心肺複合体の脱細胞化:マウスモデルから心臓と肺を脱細胞化する技術

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脱細胞化により、臓器の細胞成分が失われ、ECM構造が損なわれません。これは、臓器の 3D 構造を保存するのに役立ちます。脱細胞化手順では、安楽死させたマウスを仰臥位に置きます。マウスを解剖し、心肺複合体を露出させます。

動脈と肺循環の主要血管を除く心臓に由来するすべての主要な血管を結紮します。このステップにより、その後の灌流手順中の体液漏れが防止されます。気管に開口部を作り、この開口部からカテーテルを挿入します。カテーテルが大動脈弓に到達するまで、下行大動脈を下からカテーテルで挿入します。

カテーテルを縫合して位置を固定し、灌流ポンプに接続します。脱イオン水で灌流を開始します。大動脈を通る灌流により、心臓血管系全体から血液を効率的に除去できます。最終的に、水は肺につながる肺動脈に入ります。

肺血管系から血液を完全に除去した後、水灌流を停止し、中性から強いものまでのさまざまな洗剤溶液と交換します。この手順では、細胞を溶解して細胞内成分を放出し、心臓と肺を半透明に見せます。

脱イオン水で再度灌流して、残っている界面活性剤分子を除去します。脱細胞化された心肺複合体を抗生物質を含む溶液に保管すると、長い貯蔵寿命が保証されます。

楽死させたマウスの胸部、腹部、背中をバリカンで剃ることから始めます。70%エタノールでその部分を消毒します。次に、マウスをポリスチレントレイに固定し、前肢と後肢、頭と尾を伸ばします。顕微手術顕微鏡下に置きます。

メイヨーストレートパターンハサミを使用して、顎下領域から下腹部まで続く皮膚切開を行い、皮下解剖して胸壁と腹膜を露出させます。次に、顕微手術用ハサミを使用して、胸壁の両側の第6肋間腔に沿って大胸筋と小胸筋を切断します。

直線パターンのハサミで前の切開に沿って胸骨を切ります。次に、胸骨を長軸に沿って切断して胸骨切開を完了します。胸壁の両側を持ち上げて固定し、心肺複合体を露出させます。先端が丸いマイクロ鉗子を使用して、胸腺と周囲の脂肪組織を付着物から繊細に引き抜いて切除し、マイクロハサミで食道を切断します。

腕頭静脈と腕頭動脈を鋭利なマイクロ鉗子で分離します。次に、左総頸動脈と左鎖骨下動脈を下にある組織から分離して、結紮と焼灼を容易にします。マイクロニードルホルダーと鋭利なマイクロ鉗子、および9-0縫合糸を使用して、腕頭骨左総頸動脈と左鎖骨下動脈の出現の上にステッチを配置します。腕頭静脈を焼灼します。

マイクロハサミを使用して、靭帯を切断して入り口を開きます。27ゲージのカテーテルを気管に導入し、気管支を混乱させないように注意しながら、気管が気管支に分岐するまで繊細に押します。6-0 縫合糸を使用して、気管の周りに 3 つのステッチを縫い、カテーテルを固定します。

マウスを12番目の胸椎の高さで切断します。下行大動脈は脊椎の前方に走っており、ここで脊椎と一緒に切断する必要があります。大動脈を逆行的にカテーテルで挿入し、大動脈弓に到達するまでカテーテルを押します。縫合糸を使用して、カテーテルの先端から5ミリメートル下から始まる大動脈の周りに4つのステッチを配置します。

シリコンチューブと下部コネクタを使用してマウスをポンプシステムに接続します。毎分200マイクロリットルの脱イオン水で15分間灌流します。次に、灌流剤を脱イオン水で希釈した0.5%DOCに変更し、一晩灌流します。翌日、灌流剤を脱イオン水で希釈した0.1%SDSに変更し、8時間灌流します。次に、脱イオン水で24時間灌流し、SDSとDOCを洗い流します。

胸部への付着物を切断することにより、脱細胞化された心臓と肺を切除します。組織を、摂氏4度で1%ペニシリン-ストレプトマイシンと0.3マイクロモルのアジ化ナトリウムを含む脱イオン水に浸した滅菌クライオチューブに保存します。

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Last updated: 11 July 2026