水平マウス海馬脳スライスの取得

マウスの脳半球を高スクロース溶液に取ります。接着剤を使用して、腹側を上に向けて半球をビブラトーム標本プレートに固定します。

検体プレートをスライシングチャンバーに移します。

半凍結した高スクロース溶液を加えて、組織の生理学的状態を維持し、接着剤を固化させます。

組織の酸素化を維持するために、二酸化炭素と酸素の混合物を供給します。

設定されたパラメーターを使用して、最初のスライスを取得し、削除します。さらに、水平海馬スライスを取得します。

これらの脳スライスを、組織を回復するためにACSFを含むチャンバーに慎重に移します。

水平海馬のスライスは、さらなる実験の準備ができています。

脳の腹側部分を上に向けて、切りたての背側に両半球を置き、瞬間接着剤を標本プレートに一滴置きます。ピペットチップを使用して接着剤を広い領域に広げ、両方の組織片を収容し、ろ紙ストラップを片方の半球の腹側に触れます。別のろ紙ストラップを使用して、脳の背側を慎重に半乾燥させ、半球の背側を下にして検体プレートの接着剤の上に置きます。

2本の追加ろ紙ストラップを使用して、先ほど示したように第2半球を接着剤上に配置し、試料プレートをスライシングチャンバーに入れます。次に、素早く、しかし慎重に、氷冷した高ショ糖スライス溶液スラッシュでプレートを覆います。脳組織の切片を取得するには、ビブラトームブレードを半球の内側の前に配置し、ブレードが上を向いている半球の腹側と同じ高さになるようにビブラトームテーブルを持ち上げます。

ビブラトームコントロールを使用して、ブレードを背側方向にさらに600ミクロン下げ、最初の2つのスライスが2つの半球から完全に分離するまで組織をスライスします。最初の2つの組織スライスが得られたら、切断方向を逆にし、ブレードをさらに300ミクロン下げてから、再度スライスします。海馬が見えるようになったら、幅広のプラスチック製パスツールピペットを使用してスライスを収集し、ウォーターバスの回収チャンバーに移します。