0 閲覧数 • 1:58 分 • July 8th, 2025
カバーガラスに付着した神経がん細胞を含む細胞培養物を取り、低温条件下で維持します。
培地を取り出し、冷リン酸緩衝液で細胞を繰り返し洗浄して、残留培地を除去します。
低濃度の非イオン性界面活性剤およびプロテアーゼ阻害剤を含む溶解バッファーを追加します。
非イオン性界面活性剤は細胞膜を破壊して
溶解を開始します。一方、プロテアーゼ阻害剤は細胞のタンパク質分解酵素をブロックし、タンパク質を酵素分解から保護します。
次に、細胞スクレーパーを使用して、部分的に溶解した細胞をカバーガラスから取り除きます。
内容物を溶解バッファーの入ったチューブに移します。
低温条件下では、ホモジナイザーを使用して細胞を機械的に溶解し、完全な細胞溶解とタンパク質放出を保証します。
細胞溶解物を遠心分離します。
上清を新しいチューブに集めます。
神経腫瘍細胞から抽出されたタンパク質は、さらなる分析の準備が整いました。
タンパク質発現の検証のために、トランスフェクションの48時間後に、培養皿を氷の上に置き、PBSで細胞を2回洗浄します。各皿の細胞を200〜400マイクロリットルの溶解バッファーで処理し、細胞スクレーパーを使用してカバーガラスから細胞を取り除きます。
各プレートから分離した細胞を個々の微量遠心チューブに移し、氷下のホモジナイザーで細胞をさらに解離します。1分後、均質化された細胞片を遠心分離してペレット
化します。本記事では、カバーガラス上で培養された神経系がん細胞からタンパク質を抽出するためのプロトコルについて詳述します。この手法では、その後の解析に向けてタンパク質の完全性を保持するため、低温条件下で細胞溶解を行います。
神経系がん細胞からのタンパク質抽出は、神経腫瘍の創薬におけるターゲットバリデーションやメカニズム研究のための信頼性の高い生化学的分析を可能にします。本プロトコルは、制御された条件下での再現性のあるサンプル調製をサポートし、ダウンストリームアッセイにおけるばらつきを低減します。これにより、神経腫瘍モデルにおける初期段階の仮説検証やバイオマーカー評価が促進されます。
本手法は初期の創薬ワークフローに適合し、リード化合物同定段階に至る前のターゲットバリデーションおよびアッセイ開発を支援します。
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最終更新:29 8月 2026