神経細胞からのタンパク質抽出

カバーガラスに付着した神経がん細胞を含む細胞培養物を取り、低温条件下で維持します。

培地を取り出し、冷リン酸緩衝液で細胞を繰り返し洗浄して、残留培地を除去します。

低濃度の非イオン性界面活性剤およびプロテアーゼ阻害剤を含む溶解バッファーを追加します。

非イオン性界面活性剤は細胞膜を破壊して

溶解を開始します。

一方、プロテアーゼ阻害剤は細胞のタンパク質分解酵素をブロックし、タンパク質を酵素分解から保護します。

次に、細胞スクレーパーを使用して、部分的に溶解した細胞をカバーガラスから取り除きます。

内容物を溶解バッファーの入ったチューブに移します。

低温条件下では、ホモジナイザーを使用して細胞を機械的に溶解し、完全な細胞溶解とタンパク質放出を保証します。

細胞溶解物を遠心分離します。

上清を新しいチューブに集めます。

神経腫瘍細胞から抽出されたタンパク質は、さらなる分析の準備が整いました。

タンパク質発現の検証のために、トランスフェクションの48時間後に、培養皿を氷の上に置き、PBSで細胞を2回洗浄します。各皿の細胞を200〜400マイクロリットルの溶解バッファーで処理し、細胞スクレーパーを使用してカバーガラスから細胞を取り除きます。

各プレートから分離した細胞を個々の微量遠心チューブに移し、氷下のホモジナイザーで細胞をさらに解離します。1分後、均質化された細胞片を遠心分離してペレット

化します。