0 閲覧数 • 2:23 分 • June 17th, 2025
マウスの脳から脈絡叢を標本バスケットに入れて採取します。
脳室内に位置する組織には、頂端表面に微絨毛を特徴とする上皮細胞の層が含まれています。
組織を固定液中でインキュベートして、その細胞構造を保存します。
バッファーで洗浄して、余分な固定剤を除去し、pHを安定させます。
細胞膜脂質に結合する四酸化オスミウムと組織をインキュベートし、膜の安定性を維持し、余分な試薬を洗い流します。
イメージング中の組織の歪みを防ぐために、アルコール濃度を上げて組織を脱水します。
組織を乾燥させ、カーボンコーティングされた試料マウントに固定し、導電性のプラチナ層でコーティングします。
走査型電子顕微鏡を使用して、電子ビームを表面に集束させます。白金層は電子を散逸させ、電荷の蓄積を防ぎ、イメージングアーティファクトを最小限に抑えます。
検出器は表面から後方散乱された電子を捕捉し、微絨毛を伴う上皮細胞を示す組織の画像を生成します。
SEMのサンプル調製を行うには、新たに単離した脈絡叢を新たに作った固定液に移し、摂氏4度で一晩インキュベートします。完了したら、3〜5ミリリットルの0.1モルカコジル酸ナトリウムバッファーを使用してサンプルを3回、それぞれ5分間洗浄します。
サンプルを3〜5ミリリットルの2%四酸化オスミウムを0.1モルカコジル酸ナトリウムバッファーに30分間ポスト固定します。次に、3〜5ミリリットルの超純水を使用して、サンプルを5分間3回洗浄します。次に、エチルアルコール溶液あたり15分間、氷のように冷たいエチルアルコール濃度を増やしながらサンプルを脱水します。臨界点乾燥機を使用して、サンプルを適切に乾燥させます。カーボンステッカーを貼った試料マウントにサンプルを慎重に配置し、SEMを使用して脈絡叢サンプルを視覚化します。
本記事では、マウス脈絡叢の微小解剖およびホールマウント走査電子顕微鏡(SEM)観察のプロトコルを詳細に解説します。この手法により、組織の上皮細胞層とその微絨毛の高解像度イメージングが可能となり、この特異的な脳領域に関する構造的な知見を得ることができます。
走査電子顕微鏡(SEM)を用いたマウス脈絡叢の高解像度視覚化により、上皮細胞の構造や微絨毛の詳細な評価が可能となり、脳バリア組織のメカニズム研究が促進されます。この技術は、組織特異的な形態を明らかにし、神経薬理学のパイプラインにおける生物学的仮説のリスクを軽減しようとする初期探索チームにとって極めて重要です。信頼性の高い超微形態画像は、定量的な形態学的ベンチマークを提供することで、標的の妥当性確認およびトランスレーショナルリサーチに寄与します。
このSEMベースのプロトコルは、仮説検証およびモデルバリデーションのための堅牢な形態学的データを提供することで、創薬から前臨床に至る一連の流れに統合されます。
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最終更新:29 8月 2026