走査型電子顕微鏡によるマウス脳脈絡叢の可視化

マウスの脳から脈絡叢を標本バスケットに入れて採取します。

脳室内に位置する組織には、頂端表面に微絨毛を特徴とする上皮細胞の層が含まれています。

組織を固定液中でインキュベートして、その細胞構造を保存します。

バッファーで洗浄して、余分な固定剤を除去し、pHを安定させます。

細胞膜脂質に結合する四酸化オスミウムと組織をインキュベートし、膜の安定性を維持し、余分な試薬を洗い流します。

イメージング中の組織の歪みを防ぐために、アルコール濃度を上げて組織を脱水します。

組織を乾燥させ、カーボンコーティングされた試料マウントに固定し、導電性のプラチナ層でコーティングします。

走査型電子顕微鏡を使用して、電子ビームを表面に集束させます。白金層は電子を散逸させ、電荷の蓄積を防ぎ、イメージングアーティファクトを最小限に抑えます。

検出器は表面から後方散乱された電子を捕捉し、微絨毛を伴う上皮細胞を示す組織の画像を生成します。

SEMのサンプル調製を行うには、新たに単離した脈絡叢を新たに作った固定液に移し、摂氏4度で一晩インキュベートします。完了したら、3〜5ミリリットルの0.1モルカコジル酸ナトリウムバッファーを使用してサンプルを3回、それぞれ5分間洗浄します。

サンプル

を3〜5ミリリットルの2%四酸化オスミウムを0.1モルカコジル酸ナトリウムバッファーに30分間ポスト固定します。次に、3〜5ミリリットルの超純水を使用して、サンプルを5分間3回洗浄します。次に、エチルアルコール溶液あたり15分間、氷のように冷たいエチルアルコール濃度を増やしながらサンプルを脱水します。臨界点乾燥機を使用して、サンプルを適切に乾燥させます。カーボンステッカーを貼った試料マウントにサンプルを慎重に配置し、SEMを使用して脈絡叢サンプルを視覚化します。