ショウジョウバエにおける胚性運動ニューロンの軸索投影パターンの可視化

後

期16ショウジョウバエ胚を封入培地に入れたチューブから始めます。

ショ

ウジョウバエの運動ニューロンは免疫標識されています。

胚をスライドガラスに移し、封入剤から取り除きます。

次に、胚の腹側を上にして解剖します。

運動ニューロンを含む前部を背側を上に向けます。

タングステン針を使用して、背側正中線に沿って切断し、体壁を広げます。胚を封入培地に移動します。次に、内臓を取り除いて標識されたニューロンを露出させます

。

胚を新しいスライドに移し、取り付けて密封します。

微分干渉コントラスト顕微鏡で光が胚を通過し、高解像度の画像を生成するのを観察します。

軸索投影パターンを持つラベル付けされたニューロンは、明るい背景に暗褐色に見えます。

運動ニューロンは、分節間神経と分節神経、および筋肉を神経支配する小枝である横神経の2つの主要な神経に分岐します。

胚をフィレットするには、スライドガラスにステージングします

まず

、グリセロールの腹側を上にして一滴の中に移動します。次に、解剖顕微鏡下で、体長の4分の1で前部を切り取ります。そして、運動軸索のない最も後方の領域を取り除きます。

次に、ニードルプローブを使用して、製剤をグリセロールから取り出し、背側を上に向け、視野内に水平に配置します。次のステップでは、針プローブの中空領域に挿入し、端を曲げた細いタングステン針が必要です。タングステン針を使用して、胚の後端に小さな切り込みを入れ、背側正中線を切り続けます。

針がガラスに対して曲がりやすいため、解剖中はタングステン針の先端がスライドガラスの表面に触れないようにしてください。

次に、プローブを使用して、製剤をグリセロールドロップに戻し、背側を上にして配置します。そこで、各体壁を腹側の横方向に広げて、腸を体壁から切り離します。2つの体壁がバラバラになるはずです。次に、プローブを使用して、体壁フラップをスライドガラス上に慎重に移動させます。スライドでは、タングステン針を使用して内臓を横に押して取り除きます。

タングステン針を安定させ、損傷を防ぐために、タングステン針を操作しながら、タングステン針をスライドガラスの表面に固定する中空針プローブ

を固定します。

次に、製剤と8マイクロリットルのマウント溶液を新しいスライドガラスにマウントします。カバーガラスを取り付け、通常のマニキュアで端を密閉します。次に、DIC 光学系を使用して高解像度で画像をキャプチャします。