ナノ析出法を通じて、ジブロック高分子ナノ粒子の製剤

この手順の全体的な目標は、ナノ沈殿法を使用して高分子ナノ粒子を合成することです。これは、最初にE-D-C-N-H-S反応を行い、A-P-L-G-A PEG共重合体を生成することによって達成されます。次に、PLGA PEG共重合体を使用してナノ粒子を生成し、ナノ沈殿によって目的の薬物または貨物をカプセル化します。

この時点で、サイズ、表面電荷、薬物負荷効率などの基本的な生物物理学的特性評価は、動的光散乱透過電子顕微鏡またはHPLCによって実行できます。この技術の意味するところは、ナノ粒子が難溶性の抗がん治療薬を送達することができるため、腫瘍の治療にまで及び、現在の治療法よりも効果的である可能性があります。この方法は、がん治療への洞察を提供することができます。

また、細胞のトラフィックなどの他のシステムの研究にも使用できます。ナノ粒子は、ターゲティングリガンドと結合させ、この技術を実証する造影剤を使用してin vivoまたはin vi in vitroで可視化することができます。今日は、私たちの研究室から2人の技術者、Rohit Sukumarとナタリー・カミングス、PLGAを溶解するPLGAの合成を開始するために、穏やかな攪拌で5ミリモルの濃度でアセトニトリルのカルボキシレート

次に、PLGAと比較して5倍のストーリアメトリックの過剰量を提供する25ミリモルの濃度を得るのに十分なNHSとEDCを追加し、溶液を約1時間穏やかに攪拌して、PLGAカルボン酸塩をPGA NHSに変換します。1時間後、約10倍の容量で洗浄液メタノールを添加してPGA NHS反応生成物を沈殿させ、過剰のメタノールを溶液に添加して2000倍Gの溶液を遠心分離してペレット化し、遠心分離後のP-L-G-A-N-H-SはSUPナチンを廃棄し、EDCとNHSの痕跡を除去する。メタノールで洗浄するこの手順は、少なくとも3回繰り返されます。

洗濯完了後。P-L-G-A-N-H-Sを真空下で30分間乾燥させ、洗浄液の痕跡を取り除きます。次に、赤は、PLGAを最初に溶解するために使用されたのと同じ濃度で、アセトNI試験でP-L-G-A-N-H-Sペレットを溶解します。

一度溶解しました。PLGAソリューションにヘテロ二官能性PEGを追加します。5ミリモルの濃度を追加します。

混合物溶液を24時間インキュベートし、24時間後に絶えず攪拌します。PLGA PEGブロック共重合体反応生成物を、メタノールを過剰に添加して沈殿させます。洗浄および遠心分離プロセスを実行し、さらに3回実行して、余分な非反応性ペグをすべて除去します。

合成の最終ステップでPLGA PEGブロック共重合体を乾燥させると、真空ナノ粒子沈殿下でPLGA PEGブロック共重合体とカプセル化する薬物をA-P-L-G-A溶媒に溶解することから始まります。溶媒の選択は、ナノ粒子の特性に影響を与えるため、非常に重要です。次に、ポリマー薬物混合物を3〜10容量の攪拌水に滴下して、ミリリットルあたり約3ミリグラムの最終ポリマー濃度を得る。滴下。

水相への有機溶液の添加は、正しいサイズのナノ粒子を形成するために重要です。減圧下で2時間攪拌を続け、ナノ粒子が自己組織化によって形成され、有機溶媒の微量が除去されます。2時間の攪拌の後。

Amonフィルターを使用して、2,700倍Gで10分間遠心分離することにより、ナノ粒子を濃縮します。次に、ナノ粒子をPBSで洗浄して、閉じ込められていない薬物を取り除き、続いて遠心分離を行います。最後に、PBSでナノ粒子を再構成しますこの時点で。

サイズ、表面電荷、薬物負荷効率などの基本的な生物物理学的特性評価を行うことで、ナノ粒子の特性をよりよく理解することができます。ナノ粒子は、PLGA PEGナノ粒子透過型電子顕微鏡法を特徴付けるために、書かれたプロトコルに記載されているように保存することができ、ナノ粒子のサイズ、分布、および構造を確認するために使用された。粒子サイズは一般にナノメートルの範囲です。

粒子サイズが大きく、サイズ分布が不均一である場合は、共役反応にエラーがあるか、ナノ沈殿法の最適化が必要であることを示している可能性があります。ここに示されているのは、パクリタキセルのローディング効率と放出を標準的なHPLCで定量した薬物放出速度論研究です。既知の一定量のナノ粒子を一定の時間間隔で透析しました。

透析ユニット内の含有量を回収し、同量の有機溶媒を添加してナノ粒子を溶解しました。次に、これらのサンプルに対してHPLCを実行しました。パクリタキセル含有量を定量化するために、一度習得すると、このナノ沈殿法は3時間で適切に実行できます。

この手法を実行するときは、発生後に大きな粒子が生成されないように、常に有機相を水相にゆっくりと追加することを忘れないでください。この技術は、ナノメディシンの分野のがん研究者が、この手順後にがん患者にとって毒性が高すぎると考えられていた難溶性薬物の使用を探求する道を開きました。in vivo有効性研究やイメージング研究などの他の方法を実施して、難溶性薬物が有効かどうか、全身毒性が問題ではなくなったのはいつなのか、ターゲティングリガンドはナノ粒子を目的地に適切に標的としているのかなどの疑問に答えることができます。