Chromosomics：同時に新規OctoChrome FISHアッセイを使用した全24ヒト染色体における数値と構造変化の検出

新規蛍光

Octa Chrome Fishアッセイは、1つのスライド上の1つのハイブリダイゼーションで24のヒト染色体すべてを同時に調べます。まず、特定の8つの正方形のスライド上に中期スプレッドを準備します。次に、サンプルスライドの自動スキャンを実行して、すべてのメタフェーズの位置を特定し、すべての細胞画像の将来の再評価を容易にします。

次の位置では、8つの正方形がOctaクロームデバイスの上をスライドし、プローブをハイブリダイズします。得られた結果は、ROデバイス上の染色体の組み合わせの配置に基づいて、各正方形に3つの異なる塗装された全染色体を示すことができる。私がこのRO FISH法のアイデアを最初に思いついたのは、1990年代初頭に魚を人間の集団研究に適用し始めたときでした。

その後、1994年の年次A A CR会議でセルを設定するためのトリプルカラーペインティング、8つの正方形のスライドのアイデアを紹介しました。この手法は、従来の染色体曲げや最新のスペクトルプロトタイピングなどの既存の方法と比較した場合の主な利点は、多数の細胞内の24のヒト染色体すべてを容易に分析できることです。まず、懸濁液に固定された中期細胞をスライド上にコントロールピペットで滴下し、適切な密度を確認します。

次に、8つの正方形のOCクロームに浸し、純粋なエタノールに2分間スライドさせます。交互の正方形のシーケンスで、5マイクロリットルの細胞懸濁液をテンプレートスライドに分配して、細胞の広がりが互いに干渉するのを防ぎます。サンプルを風乾させてから、隣接するペアを見つけてください。

スライドの各半分の中央に、DAPI染色1ミリリットルあたり0.2マイクログラムの20マイクロリットルを塗布し、カバースリップを置きます。次に、サンプルスライドの自動スキャンを実行して、中期細胞をローカライズします。メタバースソフトウェアを使用して、すべてのメタフェーズの位置を特定し、すべての細胞画像の将来の再評価を容易にします。

スキャン結果を手動で表示し、非中期アーティファクトを削除します。まず、2つのXSSCバッファーでDPI染色を除去し、次に一連のエタノール洗浄でサンプルを脱水します。スライドを風乾し、摂氏37度のホッププレートに5分間置きます。

次に、クロマプローブ、マルチプローブハイブリダイゼーションチャンバー、およびハイブリダイゼーションバッファーを、ラベル面を下にして摂氏37度の水浴中で平衡化します。OCクロームデバイスを摂氏37度のホットプレートに置きます。8つの領域のそれぞれに2マイクロリットルのプレウォームハイブリダイゼーション溶液を追加します。

テンプレートを慎重に反転し、向きを変えます。OCクロームデバイスの上をスライドさせます。テンプレートスライドがOcta Chromeデバイスに配置されていることを確認します。

次に、スライドをハイブリダイゼーション溶液の滴上に慎重に下げ、穏やかで均一な圧力を加えて、ハイブリダイゼーション溶液をOCクロムデバイス上の各隆起領域の端に広げます。スライドガラスのつや消しの端を持ち上げ、スライドがOCクロームデバイスの下にくるように反転させます。摂氏37度のホットプレートに10分間置きます。

次に、摂氏75度のホットプレートに5分間移します。ハイブリダイゼーションステップのためにサンプルを変性させるために、クロマプローブ、マルチプローブハイブリダイゼーションチャンバーに移します。蓋を元に戻し、チャンバーを摂氏37度の水浴に一晩浮かべます。

スライドをデバイスから慎重に取り外し、摂氏72度で0.4余剰のSCを2分間洗います。2回目の洗浄は室温で30秒間行います。スライドの各半分の中央に20マイクロリットルのDPIを追加し、カバースリップを配置します。

サンプルを暗所で室温で10分間インキュベートしてから、蛍光顕微鏡で観察します。Octa chrome fish assayは、1枚のスライド上で1回のハイブリダイゼーションを使用して、24種類のヒト染色体すべての同時検査を容易にします。各正方形には、異なる色のフルオロで直接ラベル付けされた3つの異なる全染色体塗装プローブがあります。

Octa CHROシステムの正方形2にある正常な中期細胞の4つを調べると、染色体8、21、および12が赤、緑、青に塗られていることがわかります。これらは、それぞれのフィルターを使用して個別に視覚化することも、DAPIフィッツィー、テキサスレッドのトリプルフィルターを使用して同時に視覚化することもできます。この染色体アプローチは、白血病特異的な染色体、転座、および異数性を持つ異常細胞の検出に有用です。

例えば、T 8 21は、急性骨髄性白血病における一般的な染色体転座である。21トリソミー 21番染色体の3つのコピーは、白血病の一般的な異数性です 発症後。この技術は、分子細胞遺伝学および分子疫学の分野の科学者が、白血病およびリンパ腫で検出される主に一般的な染色体再配列を調査し、臨床患者または有毒化学物質に曝露された集団のすべてのヒト染色体の選択的倍数性を調べるための道を開きました。

このビデオを見た後、Octo Chrome Fishアッセイによる1つのスライド上の1つのハイブリダイゼーションで24のヒト染色体すべてを同時に調べる方法についてよく理解できるはずです。そして、これを染色体と定義します。