Name: オンチップ·血管内皮の炎症性表現型 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-21T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: 学ぶラボオンチップ技術を用いて、せん断応力下での血管内皮細胞の炎症性表現型を解析する方法です。TNF-α刺激とTHP-1細胞接着を定量評価し、動脈硬化の初期炎症メカニズムを解明します。

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この作品は、スコット·I.サイモン、アンソニー·G. PasseriniにNIH / NHLBIの助成金R01 HL082689によってサポートされていました。

1。細胞培養と基板の準備<ol><li>旋盤を使って、100 x 20 mmの組織培養ディッシュ（BDファルコン）から3インチの円形の基板をカットします。 70％エタノールに浸漬して基板を滅菌する。室温で1時間4ミリリットルI型コラーゲン（100μg/ ml）を持つペトリ皿とコートで行われ、その後4ミリリットル1×PBSですすいでください。 </li><li>基板に直接1ミリリットルを適用することにより、6.5x10 5細胞/ mlとシードでヒト大動脈内皮細胞（HAEC、通路4-6）を中断します。 37℃、5％CO 2インキュベーター内で行われ、細胞が1時間の基質に付着することができます。 </li><li>細胞への1xの抗生物質抗真菌剤溶液を補充した内皮増殖培地-2（EGM-2）の9ミリリットルを追加します。細胞が90％コンフルエントに達するまで2日ごとにメディアを変更します。 </li><li> 10％FBSおよび1x抗生物質抗真菌剤溶液を添加したRPMI 1640培地でTHP-1細胞を維持します。彼らは1の密度に達する通路細胞0 6細胞/ ml。 </li></ol> 2。セルのせん断プロトコル細胞は、カスタムコーンとプレートの細胞せん断装置（CSD）に条件付けされています。デバイスの詳細と設計仕様を表1および図4に記載されています。 <ol><li> CSDを準備します。エタノールでチャンバハウジングを殺菌し、滅菌PBSですすいでください。コー​​ンは、細胞単層に垂直であることを保証するために37°Cおよびレベルへの熱住宅を。ハウジングの底部から細胞を基板を組み立て、目的の高さにコーンを設定します。 </li><li>リーボビッツ-15（L-15）CO 2の存在下で適切なpHを維持するために、せん断媒体として内皮BulletKitを添加した培地を使用しています。炎症を刺激する剪断媒体に腫瘍壊死因子-α（TNF-α、は0.5 ng / ml）を加え、入口ポートに接続されたシリンジを介してデバイスに6ミリリットルを注入し、空気を導入しないように世話をするチャンバー内の気泡。 </li><li> 4時間の高振幅安定したせん断応力（HSS、15ダイン/ cm 2）または振動せん断応力（OSS、0±5ダイン/ cm 2、1 Hz）でのせん断細胞。希望するSSは正確に前述のようにマイクロステッピングモータで制御された細胞は、上記円錐を回転させることにより達成され6面の壁SS（τW）で近似されます。 <img src="/files/ftp_upload/4169/4169eq1.jpg" alt="式（1）" /> μは媒体の粘度であり、ωはコーンの角速度であり、αはコーン角（0.5°）である。基板とコーンのアライメントは、精度の平準化と20に設定し、ギャップの高さを介して0.05°±τwの円周方向と半径方向の変動を最小限に抑えるために深さゲージを使用して、10μmの範囲内に調整されます。デバイスは、層流の特性を確保するために検証されています。 cを削除するデバイスからellsと単球接着の分析のために準備します。 </li></ol> 3。 PDMSマイクロ流体チャンバーの作製<ol><li>アプリケーションに応じて、目的のマイクロチャンネル番号とチャンネルの高さのマスター型を取得します。このプロトコルで使用されている特定の設計の特性を表1に詳述されています。 これらを作成するための方法はすでによく文献に記載されています。1簡単に言えば、チャンネルのネットワークは、CADソフトウェアを使用して設計された（Autodesk Inventorの）と5000 dpiで印刷されます透明性。ネガ型フォトレジスト（SU8）は、100μmの厚さのシリコンウエハ上にスピンされています。透明度は重ねて、紫外線にさらされています。非重合フォトレジストが正のレプリカマスターを生成するために削除されます。 </li><li>計量ボートの重量によるシリコーン硬化剤10：01とPDMS液混合シリコーンベースを作成し、5ミリリットル血清をピペットで攪拌する。壁をこすりしないように注意してくださいのソリューションにプラスチックのフレークを加えないようにするためにボートの重量を量る。 </li><li> 100x15mmのペトリ皿の中でマスターウェハを配置し、皿にPDMS液を注ぐ。 </li><li>皿をカバーし、気泡を除去するために15分間、真空容器内に配置します。 15分後にペトリ皿を取り出し、軽く表面上に空気を吹き込むことによって余分な気泡を除去します。 </li><li> 70℃で1時間オーブンでペトリ皿を置き℃に皿を取り外し、鋭い刃を使用して流体チャンバを切り取る。 </li></ol> 4。顕微鏡上のデバイスの組立<ol><li>倒立顕微鏡に光源をオンにして、37にヒーター℃に設定してください。 10mlのシリンジにチューブを接続し、気泡が存在しないことを、蒸留水でいっぱいに。シリンジポンプにシリンジを置き、1ダイン/ cm 2の壁SSを誘導するために流量を設定します。チャネルの中心線に沿って生成された壁面せん断応力（τw）の標準を使用して近似されます。平行平板フローチャンバーの式： <img src="/files/ftp_upload/4169/4169eq2.jpg" alt="式（2）" /> μは体積流量Qは媒体の粘度であり、hはチャネルの高さ、Wはチャネル幅です。 注：チャネルは有限の幅があるので、実際のτwは wはチャネルに応じて異なりますアスペクト比、および測定は、側壁に最も近い25％で回避されます。1,7 </li><li>水の中にPDMSチャンバーを配置し、個々のチャネルから空気を除去するために100μlのマイクロピペットを使用しています。バルブがオフに設定されていることを確認してチャンバーに真空アダプターを取り付けます。 </li><li>目標以上HAEC単分子膜でペトリ皿を置きます。ペトリ皿の上にPDMSチャンバーを配置しない気泡がデバイスと単層の間に形成されないことを保証しながら慎重にHAEC単分子層の上に置きます。真空がオンになっているとチャンバーがしっかりと接続されているように、バルブを回します。 </LI&gt; <li>金属左の唯一の5ミリメートルがあるよう鈍ら19ゲージの針をカットします。バッファを使用してプラスチック製のタンクを記入し、PDMSチャンバーの入り口に入れられます。使用するチャネルの適切な数に対して、この手順を繰り返します。シリンジポンプからPDMSチャネル出口にチューブを取り付けます。 </li></ol> 5。せん断応力下では単球接着アッセイ<ol><li> HBSS +のCa 2 + / Mg 2 +の + 0.1％HSAに2×10 6細胞/ mlのTHP-1細胞をサスペンドします。室温で15分間、間質由来因子-1（SDF-1、濃度50μg/ ml）でインキュベートすることによりアクティブ化THP-1細胞。 </li><li>フローを確立するため、シリンジポンプの電源を入れ、気泡を導入することなく、貯水池の細胞懸濁液50μlを加える。一度流れが完全に開発され、データ収集を開始します。 </li><li>解決策が少なくなった場合は、貯水池にバッファを追加し、適切な流量で5分間実行されます。フロー·ストリーム内の任意の未結合細胞を洗浄するためのチャンネルにバッファを流れる続けています。 </li></ol> 6。データ収集と分析<ol><li>チャンネル内の3箇所でのチャネルの縦軸に沿って完全に開発の流れは、次の2分間3フレーム/秒でデジタル画像のシーケンスを取得し、入学後、または最寄りの出口側ポートまたは25％の直前に記録しないように注意しながら壁。 </li><li>単分子層と同じ焦点面での位相明るい外観を識別することによってフィールドごとに停止した細胞の数を数えます。 </li><li>しっかりとした細胞の逮捕は、10秒の動き&lt;½セルの直径によって定義されています。 3ランダムフィールド/チャネルを介して平均データと、ImageJソフトウェアを使用して定量化する。 </li></ol> 7。代表的な結果血管内皮が均一に全身性炎症に寄与するアゴニストにさらされていますが、アテローム性動脈硬化症は、内皮機能の空間的な異質性をが関与し、動脈内の流れの乱れのサイトで優先的に開発の焦点疾患である8。 </suP&gt;このようなTNF-αなどの炎症性メディエーターの代謝ストレス下でのヒト血清中で上昇している循環と障害内皮機能と相関する。9、10、TNF-αの細胞接着分子（CAMのアップレギュレーションを含むECで十分に特徴付けられた応答を誘導する;例えば、VCAM-1、ICAM-1、E-セレクチン）およびケモカイン循環から募集球、早期のアテローム性動脈硬化病変の特徴で、11動態内皮細胞の炎症性表現型の重要な調節因子である12高の大きさのせん断応力（HSS。例えば15ダイン/ cm 2）または拍動性のせん断応力（PSS、動脈のアテローム性動脈硬化症への抵抗のサイトに関連付けられている例えば15±5ダイン/ cm 2）は、TNF-α誘導応答をダウンレギュレートする。逆に、低振幅のせん断応力（LSS、例えば、2ダイン/ cm 2）または振動せん断（OSS;例えば0±5ダイン/ cm 2）in vivoでの影響を受けやすい部位の特徴、cytokiを悪化させるNE-誘発性炎症13、14私たちのマイクロ流体PDMSデバイスは、内皮機能と病態の調節における流体力学的因子と代謝ストレスの重ね合わせに関連した仮説を検証する機構の研究を実施するためのプラットフォームを提供します。アプローチの有用性と汎用性は、大きく分けて以下の代表的な結果により示されています。 <img src="/files/ftp_upload/4169/4169fig1.jpg" alt="図1" /> 図1。せん断応力は、差動TNF-α炎症性内皮単層にTHP-1細胞接着を調節する。これらのデータは、上記の、ビデオに記載されて説明した詳細なプロトコルを使用して取得した。 HAEC単層は、同時に炎症性サイトカインTNF-α（0.5 ng / mlと、VCAM-1のアップレギュレーションのために〜EC 50）およびHSS（15ダイン/ cm 2）やOSS（0±5ダインのいずれかの低用量に暴露されたdescriとして4時間のカスタムCSDで/ cm 2で 、1 Hz）を詳細なプロトコルのベッド。 THP-1細胞の逮捕は、PDMS流チャンバ内のせん断流の下で定量した。ヒト単球の表現型を模倣し、この細胞株は、その再現性と使いやすさのために選ばれました。 HSS減衰炎症反応は低下したTHP-1細胞停止の結果、OSSに比べて。データは、スチューデントのt検定により分析し、平均値±3つの独立した実験のSEMとして表されます。DeVerseらから許可を得て適応5。 以下のデータは私たちの公開作品から例を使用して、我々のアプローチの多様性を示しています。該当する場合、上記のプロトコルからの逸脱が示されている。 <img src="/files/ftp_upload/4169/4169fig2.jpg" alt="図2" /> 図2。せん断応力勾配におけるサイトカイン誘導VCAM-1発現と単球の動員の変調。 A）HAEC単層floの下で4時間TNF-α（0.3 ng / ml）で刺激したHele-Shawのフロー理論に基づいて設計さVMMCのワット15チャンネルの中心線に沿ってSSの大きさの線形減少は、二次元よどみ流れの合理化と終了を形成すると一致するようにチャンバの側壁を設計することによって達成されたチャンネルのISO-電位線を一致させることができます。入り口から軸方向距離（x）の時にこのチャネルの中心線に沿って生成された壁面せん断応力（τw）は次式で与えられます。 <img src="/files/ftp_upload/4169/4169eq3.jpg" alt="式（3）" /> μは体積流量Qは媒体の粘度、ここで、hはチャネルの高さであり、w 1は、チャネルの入り口の幅、Lは総チャネルの長さです。Q 16 ​​からSSの大きさの勾配を生成するために選ばれましたよどみ点における0〜入口ダイン/ cm 2 outleに&quot;&quot;ちょうど近トン。B）-C）VCAM-1発現は、量子ドットに結合して刺激静的コントロールの割合の中央値の蛍光強度（MFI）として提示抗体を用いて免疫蛍光顕微鏡でその場で測定した。 SSは刺激HAEC（灰色の三角形）が低く、VCAM-1の基底レベルを調節していませんでした。しかし、VCAM-1発現は、〜2ダイン/ cm 2でピークとせん断の大きさ&gt; 5ダイン/ cm 2（黒四角）で、以下のTNF-αのベースラインに戻ったり、LSSの大きさで、TNF-αの相対増加した。D）単球（10 6 / ml）を）のように前提条件と組織化単分子膜上のパラレル·フロー· ​​チャンネルで5分間2ダイン/ cm 2で灌流した。内皮への単球の動員を定量的に与えられたせん断応力の大きさで、VCAM-1発現と相関していた。特に、monolayeの細かい空間分解能とVCAM-1発現と単球の動員を調べる機能rは、独立した実験でせん断わずか数離散値を適用することによって理解されないSSの大きさの狭い範囲で大きな変化を明らかにした。データは、TNF-αから* P &lt;0.05静的な条件下では、反復測定ANOVAとニューマン·クールズ事後テストによって評価の違いによって分析した。データは平均±3から6の独立した実験からのSEM。 族らから許可を得て適応2。 <img src="/files/ftp_upload/4169/4169fig3.jpg" alt="図3" /> 図3。トリグリセリドに富んだリポ蛋白（TGRL）はドナー血清トリグリセリドレベルとVCAM-1発現に比例してサイトカイン誘導炎症を調節する。HAECの単層をTGRL（10 mg / dlと同時に4時間TNF-α（0.3 ng / ml）で刺激したアポ）静置培養における高脂肪の食事の後に被験者から単離された）。VCAM-1発現はフローサイトメトリーによって中断されたECで個別に測定した。と単球の接着には、詳細なプロトコルで説明されているようVM​​MCを用いて定量。データは、TNF-αからの％変化として表示されます。単球の逮捕は、ドナー血清トリグリセリドのレベルを直接に増加した。B）炎症誘発性ドナーのサブセットの単球停止がVCAM-1のブロッキング抗体の存在下で抑制された内皮細胞VCAM-1発現に直接比例して変化した。意義が対スチューデントt検定によって決定され、3-5の独立した実験からの平均±SEMを意味します。Wangらの許可を得て適応4。

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<li>Wu, H., Gower, R. M., Wang, H., Perrard, X. Y., Ma, R., Bullard, D. C., Burns, A. R., Paul, A., Smith, C. W., Simon, S. I., Ballantyne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+role+of+cd11c%2B+monocytes+in+atherogenesis+associated+with+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Functional role of cd11c+ monocytes in atherogenesis associated with hypercholesterolemia.</a> Circulation. 119, 2708-2717 (2009).</li>
<li>Bussolari, S. R., Dewey, C. F., Gimbrone, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apparatus+for+subjecting+living+cells+to+fluid+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22The+Review+of+scientific+instruments%22%5BJournal%5D)">Apparatus for subjecting living cells to fluid shear stress.</a> The Review of scientific instruments. 53, 1851-1854 (1982).</li>
</ol>

利害の衝突が宣言されません。

我々は、CAMの発現と単球接着のリアルタイムイメージングを通じて、血管内皮の炎症性の表現型のオンチップ評価のためのマイクロ流体PDMSデバイスの使用について説明します。我々のアプローチの大きな利点は、このような動脈硬化血管内にせん断応力をミラーリング定義されている流体力学的条件の下で食事の脂質やサイトカインなどの炎症性メディエーターに曝露した細胞の内皮機能不全に関連付けられた成果を定量化する能力にあります。 VMMCは、限られた供給になると、安価でカスタマイズ可能な、高スループットの影響を受けやすいという追加の利点があるかもしれません試薬や材料の少量の使用を容易にする。 マイクロ流体デバイスの使用は、せん断に培養されたECの応答を調べるために数十年にわたって使用されているマクロスケールのアプローチに代わるものを表しています。これらは、CAであるそれぞれの平行平板フローチャンバー、円筒形のチューブ、コーン及びプレート粘度計を含む着実に、層流ポアズイユ流条件（16日）堂々のpable。これらのデバイスへの変更の壁せん断応力の時間的または空間的な変化を生み出す、ある...

<table border="1"><tbody><tr><td> アイテム </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> 100×20ミリメートルのペトリ皿</td><td> BDファルコン</td><td> 353003 </td></tr><tr><td>エタノール95パーセント</td><td> EMDケミカルズ</td><td> EX0290-1 </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Cellgro </td><td> 21から031-CV </td></tr><tr><td>私はラット尾由来のコラーゲンを入力します。 </td><td>ギブコ</td><td> A10483-01 </td></tr><tr><td>ヒト大動脈内皮細胞</td><td> Genlantis </td><td> PH30405A </td></tr><tr><td>抗生物質抗真菌ソリューション</td><td>インビトロジェン</td><td> 15240-062 </td></tr><tr><td>内皮BulletKit </td><td>ロンザ</td><td> CC-4176 </td></tr><tr><td>内皮細胞基本培地-2 </td><td>ロンザ</td><td> CC-3156 </td></tr><tr><td> 10mlのシリンジ</td><td> BDファルコン</td><td> 309604 </td></tr><tr><td>ポリウレタンチューブ</td><td>タイゴン</td><td> ABW0001 </td></tr><tr><td>リーボビッツ-15メディア</td><td>ギブコ</td><td> 11415-069 </td></tr><tr><td> Sylgard 184シリコーンエラストマーベース</td><td>ダウコーニング</td><td> 184 </td></tr><tr><td> Sylgard 184シリコーンエラストマー硬化剤</td><td>ダウコーニング</td><td> 184 </td></tr><tr><td> SU8フォトレジストマスターウェーハ</td><td>カリフォルニア大学デ​​ービス校パンラボ</td><td> N / A </td></tr><tr><td> EclipseのTE200倒立顕微鏡</td><td>ニコン</td><td> EclipseのTE200 </td></tr><tr><td>注射器ポンプ</td><td>ハーバード装置</td><td> PHD2000 </td></tr><tr><td> 19ゲージの注射針</td><td>ケンドール</td><td> 8881 </td></tr><tr><td> THP-1単球細胞系</td><td> ATCC </td><td> TIB-202 </td></tr><tr><td>のCa 2 + / Mgの2 HBSS（ハンクス緩衝化生理食塩水溶液）+ </td><td&gt;ギブコ</td><td> 14025-092 </td></tr><tr><td>腫瘍壊死因子α（TNF-α） </td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 210-TA-010 </td></tr><tr><td>間質由来因子 - 1（SDF-1） </td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 350 NS-010 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Cellgro </td><td> 10から040-CV </td></tr><tr><td>ヒト血清アルブミン（HSA） </td><td> ZLBベーリング</td><td> NDC 0053-7680-32 </td></tr></tbody></table> 表2特異的試薬および装置。

オンチップ·血管内皮の炎症性表現型

On-Chip Endothelial Inflammatory Phenotyping

アテロームは、内皮機能不全をもたらす全身性炎症の高まり状態に寄与する代謝異常によって増強されています。しかし、リスクの個々のレベルを示す内皮細胞の初期段階で機能的な変更は、直接ガイド治療戦略を支援するために臨床的に評価されていません。また、地元の血行動態による炎症の調節は、アテローム性動脈硬化症の非ランダム分布に寄与しますが、機構は、 生体内で線引きするのは困難です。我々は、正確な流量条件下でのヒト内皮細胞（EC）および単球の炎症性イベントの定量的アッセイ代謝摂動のラボオンチップベースのアプローチを説明します。ソフトリソグラフィーの標準的な方法培養EC単層に直接バインドされている血管擬態流体室（VMMC）を 、microfabricateするために使用されます。1これらのデバイスは、試薬の少量をしながら使用することの利点を持っている明確に定義されたせん断場にさらされたECの膜で炎症イベントを直接イメージングするためのプラットフォームを提供しています。我々は正常ヒト大動脈EC（HAEC）におけるサイトカイン、2脂質A-3、4、RAGEによって誘導される5炎症を調査するためにこれらのデバイスを適用している。ここでは、アッセイの単球細胞（THP-1）圧延および差動のせん断特性の下でエアコンと炎症性サイトカインTNF-αによって活性化されるHAEC単層上で逮捕にVMMCの使用を文書化します。このような研究は代謝危険因子でatherosusceptibilityに機械的な洞察を提供しています。

フォトリソグラフィ法によりエッチングし、PDMSから製造されるマイクロ流体フローチャンバーは、EC機能不全や炎症に関連付けられた機能的転帰を調べるために適用されます。代表的な実験では、EC単層を活性化サイトカインの単球の細胞接着を調節する差動せん断応力の能力が実証されています。

動脈硬化の形成は、全身性の炎症状態を増悪させる代謝異常によって促進され、その結果として内皮の...

このビデオの目的は、血管内皮細胞の炎症状態を特性評価するためのラボオンチップ技術を実演することです。まず、ヒト大動脈内皮細胞を組織培養基質上でコンフルエントになるまで培養し、次にConanプレートせん断装置に挿入します。細胞を前炎症性サイトカインであるTNF alphaで処理し、同時に、基質上のコーンの回転を精密に制御することで、4時間にわたって異なるせん断応力条件下にさらします。せん断応力は、サイトカインに対する十分に特性評価された炎症反応を調節します。これには、VCAM-1やICAM-1などの接着分子の上方制御が含まれます。基板を顕微鏡ステージに移動させ、APDMSマイクロ流体デバイスを単層上に直接真空密閉して流路を形成します。活性化した単球性THP-1細胞を前処理したHUVEC上に流すと、細胞接着分子の発現レベルに比例して細胞が結合します。内皮細胞の炎症状態は、強固に接着したTHP-1細胞の総数を定量することで決定されます。こんにちは、私はシェ・ディバースです。グレッグ・フォスターです。そして、キース・ベイリーです。私たちはカリフォルニア大学デービス校バイオメディカル工学科のPastor教授とSimon教授の研究室にいます。本日は、内皮機能不全と炎症を定量的に調べるためのラボ・オン・チップ（lab-on-a-chip）ベースの手法について解説します。これらのツールは、代謝ストレスと流体力学的因子の重畳、および内皮炎症フェノタイプの調節や動脈硬化への感受性に関する研究を行うためのプラットフォームを提供します。本研究では、使用するデバイスを血管模倣マイクロ流路チャンバー（vascular mimetic, microfluidic chambers：VMMC）と呼びます。これらのデバイスを用いることで、アテローム形成血管に似た条件下で、内皮細胞および単球における炎症反応を定量化することが可能です。また、VMMCは、供給量が限られている試薬や材料を少量で利用できる利点があります。これらは、カスタマイズ可能な多くのレイアウトや形状で構築できるため、非常に幅広いアプリケーションに適しています。本日は、当研究室のラボオンチップアプローチを用いた代表的な実験をご紹介します。ヒト血管内皮細胞単層を、明確に定義されたせん断応力の下でサイトカイン活性化にさらします。本手法では、血管内皮細胞活性化の機能的読み取り値として、ヒト単球細胞の単層への動員をリアルタイムで定量化するためのVMCの使用法を実演します。旋盤を用いて、100 mmの組織培養ディッシュから3インチの円形基材を切り出します。3インチの基材を蒸留水で洗浄し、70%エタノールに浸漬して滅菌します。滅菌した基材を100 mmのペトリ皿に配置し、乾燥させます。その後、100 µg/mL濃度のI型コラーゲンとともに室温

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JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

このビデオでは、リポ多糖を腹腔内に注入したマウスモデルの腸間膜静脈における血液細胞と内皮の相互作用をリアルタイムで可視化する方法を示します。...

炎症マウスモデルにおける血球-内皮相互作用を分析するための生体内顕微鏡法

血管内皮細胞は、しっかりと白血球動員を制御します。不十分な白血球の血管外漏出は、炎症性疾患に貢献します。したがって、内皮活性化の新しい規制要素の検索は、炎症性疾患の改善治療を設計する必要です。ここでは、白血球は炎症時に人身売買を変更できる新しい内皮調節を特徴付けるための包括的な方法論について述べる。...

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このステップ バイ ステップのプロトコルによる ECs...

ひと誘導多能性幹細胞由来血管内皮細胞 (による ECs) へ白血球接着の評価のためのマイクロ流体アッセイ

冠状血管形成術後の心血管予後に影響を与える主要な有害心血管イベントの発症は、冠状動脈損傷および血管修復の程度に影響を受ける。新しい冠状動脈細胞および可溶性バイオマーカーの使用は、血管損傷および修復に反応し、MACEおよび予後の発達を予測するのに有用である。...

冠動脈血管形成術後の心血管予後における冠動脈前駆細胞と可溶性バイオマーカー

生検由来の腸オルガノイドと臓器オンチップ技術は、領域特異的な腸機能を再要約するためにミクロ生理学的プラットフォームに組み合わされます。...

ヒトオルガノイドと臓器オンチップ技術を組み合わせて腸領域特異的機能をモデル化

ここでは、多能性幹細胞を脳微小血管内皮細胞(BMEC)様細胞に分化させるプロトコルである拡張内皮細胞培養法(EECM)について述べる。これらの細胞は内皮細胞接着分子発現を示すため、in...

ヒト人工多能性幹細胞の成熟免疫表現型を有する脳微小血管内皮細胞様細胞への分化

等速電気泳動（ITP）は、毒素の検出からサンプル調製に至るまでのアプリケーションで堅牢な電分離と濃縮技術です。小分子および細胞培養溶解液からの核酸の精製の分離と検出：我々はITPと2具体例のアプリケーションにこのテクニックを適用する方法論の物理的原理を確認します。...

イオンの分離及び核酸の精製のためのオンチップ等速電気泳動

Lensfree光トモグラフィーは、&lt;1μmの空間分解能を提供して三次元顕微鏡技術である×&lt;1ミクロン×15〜100ミリメートルの大型イメージングボリューム上のそれぞれx、yおよびz次元において&lt;3μmの...

マルチアングル照明とピクセル超高解像度を採用しLensfreeオンチップ·トモグラフィー顕微鏡

内皮グリコカリックスの機械的特性は、AFMカンチレバー上にミクロンサイズの球を使用して、インデントによって測定した。内皮細胞は糖衣発現を誘導する生理的な流動条件下でカスタム室で培養した。データはグリコカリックス厚さと弾性率を決定するために、薄膜モデルを用いて分析した。...

原子間力顕微鏡と内皮グリコカリックスの機械的性質の定量化

私たちの目標は、内皮細胞の捕捉のための強磁性体のステントを設計、製造、テストしました。十ステントは、骨折のために試験し、10以上のステント保持磁力を試験しました。最後に、10のステントは、 インビトロで試験したところ、8複数のステントは、細胞捕獲および保持を示すために、4匹のブタに移 ​​植しました。...

内皮細胞捕捉および保持のための強磁性ベアメタルステント

学ぶラボオンチップ技術を用いて、せん断応力下での血管内皮細胞の炎症性表現型を解析する方法です。TNF-α刺激とTHP-1細胞接着を定量評価し、動脈硬化の初期炎症メカニズムを解明します。

オンチップ·血管内皮の炎症性表現型

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