A Multiplexed Luciferase-based Screening Platform for Interrogating Cancer-associated Signal Transduction in Cultured Cells

Ozlem Kulak; Lawrence Lum

doi:10.3791/50369

培養細胞における癌関連シグナル伝達を問い合わせるための多重ルシフェラーゼベースのスクリーニング·プ...

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A Multiplexed Luciferase-based Screening Platform for Interrogating Cancer-associated Signal Transduction in Cultured Cells

培養細胞における癌関連シグナル伝達を問い合わせるための多重ルシフェラーゼベースのスクリーニング·プラットフォーム

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10:13 min

July 3, 2013

DOI: 10.3791/50369-v

Ozlem Kulak¹, Lawrence Lum¹

¹Department of Cell Biology,UT Southwestern Medical Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

細胞プロセスのシステム·レベルの理解を達成することは、現代の細胞生物学の目標です。我々はここでゲノム規模のRNAiライブラリーを用いた遺伝子の機能を調べるために、様々な細胞機能のエンドポイントのルシフェラーゼレポーターを多重化するための戦略について説明します。

次のプロトコルの全体的な目標は、複数の細胞の読み出しを同時に監視することにより、遺伝子機能のゲノムスケールの調査を可能にすることです。このデモンストレーションでは、Firefly RANおよびCipro Dina Luciferaseベースのレポーターを使用して、それぞれP 53 WINTおよびKRAS経路の活性をモニターします。これらの3つのレポーターは、結腸直腸癌細胞株であるHCT one 16細胞に目的の遺伝子を標的とするirnaで切断されています。

続いて、ホタルとバニラのルシフェラーゼ活性が細胞溶解物で測定され、Cipro DEAルシフェラーゼの活性が測定されます。分泌された酵素は、培養物中で測定されます。アッセイシステムの再現性、およびこれら3つのがん関連経路内の遺伝子の共通および固有の作用を明らかにする能力を示す中程度の結果が得られます。

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