Name: 培養細胞における癌関連シグナル伝達を問い合わせるための多重ルシフェラーゼベースのスクリーニング·プラットフォーム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: 学ぶ 多重ルシフェラーゼスクリーニング法で大腸がん細胞HCT116におけるP53・WNT・KRAS経路を同時解析し、遺伝子機能を網羅的に解明する手法。がんシグナル伝達の理解と分子標的治療開発に貢献する。

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我々はCPRIT（RP100119）とウェルチ財団（I-1665）からの資金支援を認める。

プロトコル全体は約4日かかります。 1。のsiRNAとレポータートランスフェクションのための細胞の調製我々はここで例示の目的のためにゲノムワイドなsiRNAライブラリからsiRNAの小さなセット（単一遺伝子を標的とする4倍のsiRNAから成る各プールで、96ウェルフォーマットで384の異なるsiRNAのプール·アレイ）​​を使用したsiRNAライブラリーを尋問するためのプロトコルを紹介します。この特定の研究のために、我々はHCT116逸脱WntシグナルとKrasのシグナルを示す細胞、p53活性を活用します。関心のある他の細胞プロセスに問い合わせを目的とした研究において、適切な細胞株は同定され、同様の方法で評価されなければならない。 <ol><li>トリプシン処理ソリューション/プレートを1mlを用いてトリプシン処理によって収穫細胞は、2％のFEを含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）10mlで中和した後、PBSで80〜90％コンフルエントHCT116細胞を5×10 cm 2とプレートを洗うタルウシ血清（FBS）および1％ペニシリン/ストレプトマイシン/プレート。 </li><li> DMEM / 2％FBS / 1％ペニシリン/ストレプトマイシンを10ml、50 mlコニカルチューブに細胞懸濁液を移し、5分間〜130×gで遠心分離し、上清を除去し、再懸濁細胞ペレット。 </li><li>セルカウンターで細胞数をカウントした後、10 5細胞/ mlの細胞溶液を行い、次のステップを150ミリリットルの細胞懸濁液を維持する。マルチドロップ自動液体ディスペンサー（以下、マルチドロップ）を用いて96ウェル細胞培養プレートの各ウェルのプレート10 4細胞（100μl）を。細胞懸濁液は、めっき12×96ウェルプレートで、この場合には十分であるべきである。 </li><li>トランスフェクション混合物を準備しながら、5％CO 2で37℃で細胞とプレート°インキュベーターでCをインキュベートする。 </li></ol> 2。レポーターコンストラクトストック溶液を調製<ol><li>分離し、高品質な記者は、標準的なミディ​​プレップキット（NucleoBondエクストラミディが生産で使用してDNAを構築とクロンテック）は各レポーターのために1 mg / mlの最終濃度にDNAを希釈。 </li><li>記者のp53-FL30μlの、8X TCF-RL、Elk1-Gal4の30μlの、6μlのUAS-CLとでDNAミックスを達成するためのH 2 O 4μlの30μlのを組み合わせることにより、原液を構築100μlのを準備記者の最終1:1:1:0.2比率。このDNAミックス原液の最終DNA濃度は、0.3 mg / mlのです。 </li></ol> 3。 siRNAを/ DNAトランスフェミックスの準備プロトコルのこの部分では、12×96ウェルプレートをトランスフェクトするために十分であるsiRNAを/ DNAトランスフェクションミックスを準備します。 siRNAの4×96ウェルプレートのこのテストライブラリのために、我々は三重にそれぞれのsiRNAプールをトランスフェクトされます。我々が使用するトランスフェクション試薬は、のEffectene（キアゲン）と呼ばれています。我々の手では、これは培養細胞へのsiRNAやDNAの同時配信のために働くだけ試薬である。 <ol><li>リポーターコンストラクト株式ゾルの80μlの希釈3μgの/ mlの最終濃度でDNA溶液を達成するために、EC緩衝液（キットのEffectene）8mlのでution。一般的には、すぐに使用するために十分なDNA溶液ミックスを調製する。 </li><li> 96 /ウェルプレートの各ウェルに、このDNA溶液を20μlのプレート。 96ウェルプレートの数は、siRNAプールがテストされますどのように多くに依存します。たとえば、この場合には、我々は384の異なるsiRNAのプールを評価するために4×96ウェルプレートが必要になります。 </li><li>テストするsiRNAは、5μMのストック濃度になっているはず。ていない場合は、レプリカプレートし、各ライブラリに関連付けられた推奨される希釈液を使用して、この濃度に希釈することができる。 </li><li> BIOMEK自動液体ハンドラーで希釈したDNAストックを含むPCRプレートの対応するウェルに各5μMのsiRNAストック2μlのを転送します。調査の規模に応じて、マルチチャネルピペットで十分である。 </li><li>今、私たちは、DNA / siRNAのPLAの各ウェルにエンハンサー溶液（のEffecteneキット）を1μlを追加しますTE。これは、再び自動液体ハンドラまたはマルチチャンネルピペッターのいずれかを達成することができます。 </li><li>その後、各ウェルにのEffecteneトランスフェクション試薬の3μLを加え、さらに10分間室温でインキュベートエンハンサー反応は5分間室温で発生することができます。 </li><li>トランスフェクション複合体形成を停止するには、PCRプレートの各ウェルに10μlのDMEM / 2％FBS / 1％ペニシリン/ストレプトマイシンを追加します。 </li><li>細胞（細胞インキュベーターから取得）を含む96ウェルプレートの各ウェルにトランスフェクション混合物10μlを移す。各トランスフェクションは、トリプリケートで実施されるように、同一の組合せは、細胞を含む2つの付加的な96ウェルプレートに適用される。 </li><li> 36時間、5％CO 2を含む加湿環境下で37℃で添加し、トランスフェクション混合物で細胞をインキュベートする。 </li></ol> 4。細胞サンプルからのルシフェラーゼ活性を決定 36時間後、ルシフェラーゼ活性は、測定のための準備が整いましたトランスフェクションされた細胞である。エンドポイントごとの実験に基づいて決定されるべきである。我々の研究では、36時間のインキュベーション時間は、以前に結果決定を意味するために十分に堅牢な信号が得られていた。本研究では、複数の記者（培養培地中に分泌一つであり、細胞質で発現している2つの他の人）が内蔵されたように、我々は、培養培地と同様、細胞溶解物の両方からの測定値を取得します。 <ol><li>培養培地中のCL活性の検出： <ol><li>培地20μlのは、白色不透明な96ウェルプレート（どちらBIOMEK液体ハンドラまたはマルチチャンネルピペッターを使用して）でレプリカメッキです。 </li><li>各ウェルにCLアッセイ緩​​衝液20μlを（システムのターゲット）を追加します。 </li><li>各ウェルにウミホタルルシフェリン基質（システムをターゲット）を10μlを加え、ルミノメーター（例えばBMGによって生成Pherastarプレートリーダー）を使用して、CL活性を検出。 </li></ol></li><li> FLとRL活性の検出： <ol><li> Cを溶解し第培地を除去することによってエルボ。これは、逆さまにプレートを回して、シンクに培地を投げることによって、急速に行うことができます。残りの培地を穏やかにペーパータオル上にプレート逆さまをタップして削除することができます。プラットフォームロッカーにマルチドロップと場所を用いて細胞の各ウェルに1Xパッシブ溶解バッファー（Promega社）を30μl加え、室温で5分間程度の速度を設定します（ベルコは、これらが行う一つの会社です。） </li><li>ルミノメーターを用いたマルチドロップし、直ちに測定FLアクティビティを使用してルシフェラーゼアッセイ試薬II（プロメガデュアルルシフェラーゼキットの一部）の20μlのを追加します。次に、ストップ＆FL活動をクエンチとRL活性の測定が可能になりますグロ試薬（Promega）を追加します。注：拡張信号の長さを（例えばプロメガからデュアルグロルシフェラーゼキットなど）を許可基板ミックスを使用している場合を除き、フラッシュキットの使用は、基質添加時の迅速な測定（5分以内）が必要です。 </li></ol></li></ol>

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<li>Boutros, M., Bras, L. P., Huber, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cell-based+RNAi+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cell-based RNAi screens.</a> Genome Biology. 7, R66(2006).</li>
<li>Gilbert, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+multiplex+cell+viability+assay+for+high-throughput+RNAi+screening%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A novel multiplex cell viability assay for high-throughput RNAi screening.</a> PLoS ONE. 6, e28338(2011).</li>
</ol>

OKとLL多重ルシフェラーゼ技術に関連する特許出願中で著者がある。

初めてのハイスループットスクリーンを楽しま人のために便利にオンラインリソースを提供ルシフェラーゼベースのレポーターシステムのいくつかの御用達（例えば、プロメガ、ターゲットシステム、New England Biolabs社、及びサーモフィッシャーなど）があります。また、遺伝子の発見と方法のRNAiベースのスクリーニング結果は、他の-オミクスベースのデータセットを統合することができるためのハイスループットスクリーニングの使用を最適化に関する優れたレビューの数が役に立つ15,16でなければなりません。ハイスループットスクリーニングから &quot;ヒット&quot;を選択するための方法は、本報告書の範囲を超えて別の議論の主題である。このトピックに関するいくつかのレビューは17,18可能です。しかし、転写活性化レポーターの使用に基づいて画面から選択したヒットを検証するための重要な基準は、測定されたRT-PCR、定量PCRを使用して検証標的遺伝子上の同じ効果を誘導するために、同じperturbagen（RNAiを化学的又はベース）のための能力である、またはマイクロアレイ分析。また、記者によって測定される...

細胞生物学的プロセスの多様な配列を監視するためのルシフェラーゼに基づくレポーターの様々な市販されている。これらのDNAの大部分は、特定の細胞の刺激や摂動によって発現するように誘導されているルシフェラーゼタンパク質をコードする構築。最も堅牢な転写基づい記者は生理学的に関連する転写イベント1,2の報告では、その信頼性のために十分に確立された合成エンハンサーエレメントまたは遺伝子プロモーター領域の制御下にルシフェラーゼ酵素の発現を配置。ルシフェラーゼタンパク質の発現を駆動するためGAL4-UASを利用するトランス - ルシフェラーゼレポーターシステムも存在する。 GAL4は、酵母転写活性化因子であり、UASは、Gal4のは、特にそれ3の下流に配置された遺伝子配列の転写を活性化するために結合するエンハンサーである。ルシフェラーゼこれらのタイプのシステムは、典型的には、2つのDNAプラスミドに支持されている - オンはregulatoに融合GAL4タンパク質をコードするリュー目的のタンパク質の部分と、第二は、1つまたは複数のUAS配列の制御下に置かれたルシフェラーゼタンパク質をコードする。したがって、セルラルシフェラーゼシグナルは目的のタンパク質の活性レベルを反映する。ルシフェラーゼベースのレポーターの別の一般的な用途は、目的のタンパク質がルシフェラーゼ酵素4に融合させたタンパク質の安定性を監視するためのものです。一つはよく尋問されたため、任意のレポーターの特異性を仮定することはできませんように関係なく、レポーターのタイプの、買い主の危険負担は、ここで注目される。したがって、デューデリジェンスは、任意の研究戦略における新たなレポーター構築の組み込みが必要になります。 ルシフェラーゼ酵素読み出しの選択は、その発現を制御するDNAエレメントの信頼性と同じくらい重要になることがあります。ホタルルシフェラーゼ（FL）は、市販の構成要素の中で最も一般的に使用される酵素であるのに対し、（場合のようにATPを必要としない新しいルシフェラーゼレポーターシステムの出現FLベースの反応）またはより強いシグナルを発する組み込むより安定した酵素は、この研究プラットフォームの効率と信頼性を向上させることを約束します。その化学研究でルシフェラーゼレポーターの選択に関する重要な注意事項は、虚偽の報告を生じさせる可能性があり、化学阻害にFLの感受性である。我々の経験では、そのようなウミや基質としてセレンテラジンを利用ガウルシフェラーゼ（それぞれRLとGL、）のような他の酵素が少なく容易に小分子5によって阻害される。 多重化ルシフェラーゼリードアウトのための最も一般的な形式は、主に単一のサンプルから順次に酵素活​​性を測定する機能を簡単に使用できるキットの利用可能性を与えFLとRLの使用を伴う。ほとんどのキットにおいて、サンプルは、最初に同時にseconを得セレンテラジンを用いて堆積される消光用試薬が続くFL活性のレベルを明らかにするルシフェリンにさらされているDARY RL信号。例えばウミホタルルシフェラーゼ（CL）のようなさらに別の基板GL、またはその用途として分泌され得る他のルシフェラーゼを添加して、ルシフェラーゼを用いた高コンテンツデータを生成する可能性がより多くの数が浮上している。この技術を用いたゲノムワイドRNAiスクリーニングが6ここで見つけることができた例。これらの技術的進歩は、順番に、クロストーク7を制限するために、ルシフェラーゼ酵素の各タイプをクエンチするために特定のメカニズムの開発に拍車をかけた。私たちの手で、私たちはそのようなGLやCLなどの分泌ルシフェラーゼと、 &quot;エッジ効果&quot;（高力価の培養プレートのエッジに関連する細胞活動の不可解な傾向）の大きい周波数に注意してください。それらは、細胞生存率をadulteratingずに信号サンプリングを可能にするように、その一方で分泌ルシフェラーゼ、運動アッセイに有用である。 ここで紹介する私たちの研究では、我々は同時に3癌関連のアクティビティを監視します細胞プロセス：p53を、Krasの、及びWntシグナル伝達経路。 、、我々の研究に組み込まれた記者はクロンテックからPP53-TA-リュックFLレポーター（以下のp53-FL記者と呼ぶ）8、Elk1-GAL4/UAS-CLレポーター系（アジレント以後エルク-1レポーター）であるおよびT細胞因子（またはのTCF）9-11として知られるWnt経路転写調節因子によって認識され、複数の合成エンハンサー要素を取り入れ8X TCF RLレポーター。

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</strong</td></tr><tr><td>>PathDetect Elk1 Trans-Reporting System</td><td>株式会社アジレント・テクノロジー</td>ズ<td></td><td></td>219005</tr><tr><td>Pathway Profiling Luciferase System 4 pp53-TA-Luc Vector</td><td>Clontech Lab Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>631914 エフェクテントランスフェクション試薬</td><td>キアゲン株式会社</td><td></td><td></td>301427</tr><tr><td>デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム</td><td>株式会社プロメガ</td><td>E1960</td><td></td></tr><tr><td>Cypridina Luciferase Assay 試薬</td><td>ターゲティングシステム</td><td>VLAR-1</td><td></td></tr><tr><td>HCT116 細胞</td><td>ATCC</td><td>CCL-247</td><td></td></tr><tr><td>CytoTox-Fluo Cytotoxicity Assay</td><td>Promega Corp.</td><td>G9260</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>MultiFlo Microplate Dispenser</td><td>Labsystems Inc.</td><td>モデル 832</td><td></td></tr><tr><td>Biomek FXP ラボラトリー オートメーション ワークステーション</td><td>ベックマン・コールター</td><td>A31842</td><td></td></tr><tr><td>PHERAstar FS-マルチモードHTSマイクロプレートリーダー</td><td>BMG Labtech Inc.</td><td>0471-101A</td><td></td></tr><tr><td>ブライトライン ライカート血球計算盤</td><td>ハウサー サイエンティフィック カンパニー</td><td>1490</td><td></td></tr></tbody></table>

培養細胞における癌関連シグナル伝達を問い合わせるための多重ルシフェラーゼベースのスクリーニング·プラットフォーム

A Multiplexed Luciferase-based Screening Platform for Interrogating Cancer-associated Signal Transduction in Cultured Cells

RNA干渉（RNAi）を使用して、遺伝子機能のゲノムスケールの尋問は、化学的に扱いやすい癌細胞の脆弱性の迅速な同定のための途方もない可能性を秘めています。この技術の可能性を制限することで、迅速に結果の表現型の基本メカニズムを描くため、分子標的治療戦略の開発を知らせることができないことである。私たちは、ここで重要な癌細胞関連のプロセスを監視できるように多重化されたレポーターシステムを用いた標的RNAiによる遺伝子によって誘導される細胞の表現型を解体するためのメソッドの概要を示します。このハイコンテントスクリーニング方法は汎用性があり、容易に大規模な分子ライブラリの他のタイプのスクリーニングに適合させることができる。

大規模なゲノム配列の取り組み12-14を使用して、様々な癌の変異風景をマッピングにおける進歩にもかかわらず、我々はまだ場所に介入戦略にこれらの観察を翻訳するための体系的なアプローチを持っていません。結腸直腸癌（CRC）は、3つの細胞プロセスのコンポーネントに影響することが予測されている変異 - / Wntシグナルβ-カテニン、p53の、そしてKrasのシグナリングは - 彼らは腸内細胞の形質転換の主な要因である示唆すべての腫瘍の99％で発見されてい13。したがって、がんゲノムデータセットはおそらくプロセスを促進する共通分母癌を支える遺伝子が濃縮されており、そのは、癌細胞の脆弱性の迅速な同定のために悪用される可能性があります。この仮説を調べるために、我々は、/ Wntシグナルβ-カテニン、p53の、そしてKrasのシグナリングに対する遺伝子機能のハイスループット尋問に従順な戦略を考案した。我々は最初のシングルreporte内の各レポーター系の特異性を実証rの試験（ 図1）、その後、これらの記者は、これらの3つの重要な細胞プロセス（ 図2）</s...

細胞プロセスのシステム·レベルの理解を達成することは、現代の細胞生物学の目標です。我々はここでゲノム規模のRNAiライブラリーを用いた遺伝子の機能を調べるために、様々な細胞機能のエンドポイントのルシフェラーゼレポーターを多重化するための戦略について説明します。

Genome-scale interrogation of gene function using RNA interference (RNAi)  holds tremendous promise for the rapid identification of chemically tractable  ...

本プロトコルの全体的な目的は、複数の細胞内リードアウトを同時にモニタリングすることで、ゲノムスケールでの遺伝子機能の解析を可能にすることです。本デモンストレーションでは、Firefly RANおよびCipro Dinaルシフェラーゼベースのリポーターを用いて、それぞれP 53 WINTおよびKRASパスウェイの活性をモニタリングします。これら3つのリポーターを、標的遺伝子をターゲットとするirnaと共に、大腸がん細胞株であるHCT one 16細胞に共導入します。続いて、細胞溶解液中のホタルルシフェラーゼおよびバニラルシフェラーゼの活性を測定し、同時に、分泌酵素であるCipro DEAルシフェラーゼの活性を培養液中で測定します。得られた培地の結果から、本アッセイシステムの再現性と、これら3つの癌関連経路における遺伝子の共通および固有の作用を明らかにできることが示されます。本手法のマイクロアレイやマルチカラープローブなどの既存手法に対する主な利点は、細胞の転写出力を観察するための安価で汎用的かつ費用対効果の高い方法であることです。この手法は、分子標的治療戦略の開発など、がん研究における疑問の解決に役立ちます。我々の一過性トランスフェクションプロトコルは、ILおよびスクリーニングセットアップへの事前の時間的拘束を最小限に抑えていますが、ウェル間のシグナル変動が増大する可能性があります。これについては、ウェルからの絶対的な値ではなく、レポーター比を確認することで対処可能です。本手順を開始するには、80〜90%にコンフルエントとなったHCT 116細胞が入った10 cm²プレート5枚をPBSで洗浄し、その後、各プレートの細胞をトリプシン処理により回収します。1 mLのトリプシン溶液を用い、続いて2% FBSおよび1% ペニシリン・ストレプトマイシンを含む10 mLのDMEMで中和します。懸濁した細胞を50 mLのコニカルチューブに移し、約130 Gで5分間遠心分離します。上清を除去し、細胞ペレットを10 mLの培地で再懸濁します。セルカウンターを用いて細胞数を計測し、1 mLあたり10⁵個の細胞溶液を調製します。マルチドロップ自動液体分注機を用いて、次のステップ用に150 mLの細胞懸濁液を用意します。96ウェル培養プレートの各ウェルに、100 µL（または10⁴個の細胞）を分注します。この場合の細胞懸濁液は、1296ウェルのプレートに播種するのに十分な量である必要があります。トランスフェクション混合液を調製している間、細胞が入ったプレートを5%二酸化炭素含有のインキュベーター内にて37°Cでインキュベートします。ここで使用した高品質のリポーター構築用DNAは、標準的なMIDI prepキットを用いて単離し、最終濃度が1 mg/mLになるように希釈したものを使用しま

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Medicine

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概日時計は、個々の細胞内で機能する、すなわち、それらは細胞自律的である。ここでは、非侵襲的、ルシフェラーゼベースのリアルタイム生物発光技術を用いた細胞自律的なクロックモデルを生成するための方法を説明します。レポーター細胞は、概日生物学を研究するのに扱いやすい、機能的なモデル系を提供する。...

ルシフェラーゼ生物発光レポーターを用いた遺伝子発現のモニタリング細胞自律的な概日時計のリズム

このビデオでは、薬物の高感度かつ迅速なスクリーニングのための生物発光アッセイの有用性を強調する方法について説明します。これらの薬剤は、単独で、または組み合わせて試験して、作用機序の相乗効果を評価することができます。...

細胞生物発光ベースのアッセイ:コンビナトリアル薬物スクリーニングのためのハイスループット法

このビデオでは、細胞内ATPレベルを細胞代謝活性のマーカーとして使用して、試験剤で治療した患者由来オルガノイドの細胞生存率を評価するための迅速な単一添加アッセイを実演します。細胞内ATPレベルは、ルシフェラーゼ/ルシフェリン反応を用いて測定され、放出された光強度は細胞の生存率を示し、ひいては試験剤の増殖阻害力を示します。...

ATPベースのルシフェラーゼ生存率アッセイ:腫瘍オルガノイド上の試験剤の成長阻害能を評価するための均質な方法

このビデオは、ルシフェラーゼタグ付きタンパク質の定量に使用されるルシフェラーゼアッセイを示しています。このアッセイでは、目的のタンパク質と結合した小さなフラグメントと結合する大きなフラグメントで構成される人工的なルシフェラーゼ酵素を使用します。結合したサブユニットは活性酵素を形成し、基質の存在下で発光シグナルを放出します。次に、この信号をルミノメーターを使用して定量化します。...

ルシフェラーゼアッセイ:人工ナノルシフェラーゼシステムベースのバイオレポーターを使用して発光シグナルを測定するハイスループットアッセイ

我々は、高スループットのロボットのトランスフェクションと自家製デュアルグロールシフェラーゼアッセイを使用して転写調節因子を同定するための迅速で安価なスクリーニング法を提示する。このプロトコルは、急速に数千の遺伝子のための直接のサイド·バイ·サイド機能データを生成し、目的の任意の遺伝子をターゲットに簡単に変更可能です。...

自家製デュアルグロールシフェラーゼアッセイを用いて、ハイスループット機能スクリーニング

私たちは、現在の研究では、トランスジェニックマウス由来のリンパ球を用いた新規蛍光ベースのアッセイを提示します。このアッセイは、阻害またはリンパ球活性化を促進するいずれかの能力を付与する小分子のハイスループットスクリーニング（HTS）に適しています。...

小分子のハイスループットスクリーニングのための適切な蛍光ベースのリンパ球アッセイ

大きな腫瘍サプレッサー (ラッツ) のキナーゼ活動を定量化するルシフェラーゼを用いたバイオ センサーの紹介-中央キナーゼ シグナル伝達経路カバで。このバイオ センサーには、カバ経路レギュレータの in vitroとin...

信号経路活性ルシフェラーゼ ベースの大きい腫瘍のサプレッサー (ラッツ) バイオ センサーを用いたカバを監視

転写因子の新しい調節因子を同定するために、我々は、二重ルシメラーゼベースの転写レポーターアッセイを用いて、配列レンチウイルスまたはレトロウイルスRNAiライブラリをスクリーニングするアプローチを開発した。このアプローチは、1回の実験で数百人の候補者をスクリーニングするための迅速かつ比較的安価な方法を提供します。...

アレイ化されたライブラリの中スループットスクリーニングとデュアルルシファーゼベースレポーターを用いた転写因子レギュレータの同定

このプロトコルは、中処理から高スループットのオルガノイド薬物スクリーニングのための半自動化された方法と、顕微鏡に依存しない自動画像分析ソフトウェアを説明し、マルチパラメトリックの単一オルガノイド薬物反応を定量化および視覚化して、腫瘍内の不均一性をキャプチャします。...

バルクおよび単一オルガノイド分析のための広視野生細胞イメージングを用いたマルチパラメトリック腫瘍オルガノイド薬物スクリーニング(英語)

患者由来の腫瘍オルガノイドは、基礎研究およびトランスレーショナル研究のための高度なモデルシステムです。この手法では、異なるオルガノイド表現型の同時速度論的評価のためのマルチプレックス蛍光生細胞イメージングの使用について詳しく説明します。...

がんの患者由来オルガノイドモデルにおける薬物反応のための多重化生細胞イメージング(英語)

肺がんの新しい治療法を開発する上の主な課題には、局所疾患が転移性疾患に進行する際の腫瘍微小環境のモデル化が含まれます。ここでは、肺がんの同所性同系モデルを確立する簡単な方法を説明し、経時的な疾患の in vivo...

肺癌の同系同所性マウスモデルを生成するための低侵襲法

学ぶ 多重ルシフェラーゼスクリーニング法で大腸がん細胞HCT116におけるP53・WNT・KRAS経路を同時解析し、遺伝子機能を網羅的に解明する手法。がんシグナル伝達の理解と分子標的治療開発に貢献する。

培養細胞における癌関連シグナル伝達を問い合わせるための多重ルシフェラーゼベースのスクリーニング·プラットフォーム

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