Analysis of RNA Processing Reactions Using Cell Free Systems: 3' End Cleavage of Pre-mRNA Substrates <em>in vitro</em>

Joseph Jablonski; Mark Clementz; Kevin Ryan; Susana T. Valente

doi:10.3791/51309

事前のmRNA基質の3 '末端切断：無細胞系を用いたRNAプロセシング反応の解析 in vitroで

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Analysis of RNA Processing Reactions Using Cell Free Systems: 3′ End Cleavage of Pre-mRNA Substrates in vitro

事前のmRNA基質の3 '末端切断：無細胞系を用いたRNAプロセシング反応の解析 in vitroで

Full Text

13,160 Views

09:16 min

May 3, 2014

DOI: 10.3791/51309-v

Joseph Jablonski¹, Mark Clementz¹, Kevin Ryan², Susana T. Valente¹

¹Department of Infectious Diseases,The Scripps Research Institute, ²Department of Chemistry,City College of New York

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

RNAポリメラーゼIIは、成熟mRNAの3 '末端を越えて延びる前駆体RNAを合成する。成熟したRNAの末端が切断複合体のエンドヌクレアーゼ活性を経由して、RNA配列によって決定されるサイトで、cotranscriptionally生成されます。ここでは、in vitroでの切断反応を研究する方法を詳細に私たち。

この手順の全体的な目標は、in vitroで3つの主要なmRNA切断を成功裏に調べることです。これは、まず懸濁液中で増殖した細胞から転写活性核抽出物を作製することによって達成されます。手順の2番目のステップは、in vitro転写を介して放射性標識RNA基質を作成することです。

3番目のステップは、標識されたRNA基質をゲル精製することです。最後のステップは、核抽出物と標識RNA基質を含む切断反応を組み立てることです。最終的に、結果は、垂直放射性ゲル電気泳動による3つのプライムmRNA、UNC切断された基質、および切断された生成物を示すことができます。

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos