マウス腎臓移植：同種移植片拒絶のモデル

このビデオでは、腎臓移植のマウスモデルを紹介しています。主要な組織適合クラスが知られている複数の近交系を利用することにより、腎同種移植片の拒絶反応のさまざまな側面を再現することができます。提示されたデータは、これが有用なモデルであることを示していますこれらのメカニズムの研究において、この概略図の漫画は、このモデルの主要なステップを示しています。

左腎摘出術をドナーマウスで行い、次にドナー腎臓を滅菌綿棒で調製します。培養皿では、レシピエントマウスは、ドナーの腎臓が移植される前に右腎摘出術を受けます。この手順は、滅菌されたオートクレーブ滅菌された器具と消耗品を使用して、滅菌された手術野内に配置されます。

複数の動物を手術する場合は、新しい滅菌器具のセットを各手順に使用するか、手順間で器具を滅菌します。ビーズ滅菌器を使用して、オペレーターは滅菌ガウン、マスク、帽子、手袋を着用します。1人のオペレーターで、腎臓を回収するまでドナーを準備することで、この手順を実行できます。

その後、レシピエントは移植の準備をしてから、腎臓を摘出するためにドナーに戻ります。これにより、冷え虚血の時間が短縮されます。あるいは、2人のオペレーターがドナーとレシピエントを同時に準備することもできます。

これにより、1日で複数の動物を手術することができます。これは、ケタミンと塩酸塩およびマイネの腹腔内注射によって麻酔された生後8週齢のC 57ブラックシックスマウスのオスです。手術部位は、希薄なヨウ素溶液を使用して剃毛および消毒されています。

マウスは、滅菌ドレープされた加熱された手術用パッドの上に置かれ、四肢がパッドに固定されています。眼軟膏を塗布しています。開腹術は、正中線の皮膚切開によって行われます。

次に、腹膜腔は、組織分離ハサミを使用して線形アルバートを介して開きます。次に、マウスをドレープし、カリブラリトラクターを切開部に挿入します。腸は手術野の左右に変位して左腎臓と尿管を露出させ、ドナー腎臓を準備します。

移植の場合、尿管は結紮され、膀胱のできるだけ近くで分割されます。下性腺静脈と上部副腎静脈は結紮され、腎静脈の近くで分裂します。大動脈は結紮され、腎動脈よりも優れており、ウィスコンシン大学の冷たい溶液が大動脈に注入されて腎臓を灌流します。

尿管は後腹膜から容易に解剖することができ、膀胱の終結まで追跡することができる。7.0縫合糸でできるだけ膀胱に近づけて結紮し、その後、通常は腎静脈に空になる左性腺静脈を分割する必要があります。9.0縫合糸を使用して二重結紮し、腎静脈に近い縫合糸間で分割する必要があります。

このクリップで同様の方法で示されているように、左副腎静脈は腎静脈に空になり、結紮して分割する必要があります。次に、ドナー大動脈を周囲のリンパ組織から解剖し、最初の緩い下縫合糸を配置できるようにするための出現に注意を向ける必要があります。次に、腎動脈への優れた縫合糸。

ドナーマウスの準備ができたら、5ユニットの静脈内ヘパリンを背側陰茎静脈に投与します。まず、下大動脈縫合糸をしっかりと結び、続いて上結紮糸を結んでいます。これにより、腎臓が動脈循環から分離されます。

約500マイクロリットルの冷たい大学のウィスコンシン溶液が大動脈によって投与されます。成功した滲出は、ドナー腎臓のブランチングによって識別されます。大動脈は最初に下方に分割され、次に腎動脈よりも上方に分割されます。

次に、腎静脈は大静脈との接合部で分割されます。次に、ドナーの腎臓を取り出し、冷たい滅菌ガーゼを敷きます。培養皿では、大動脈は腎大動脈の真向かいに縦方向に切開されます。

吻合のための大動脈パッチを作成するには、腎動脈の内腔を特定し、余分な極性動脈がないことを確認します。次に、腎静脈は、最初に10 Oポリアミド縫合糸を腎静脈の下端に配置し、次に同様に、上端に縫合糸を配置することによって調製されます。副腎静脈と性腺静脈を分けた結紮糸は、静脈を方向付けるための有用なマーカーです。

この時点で、ドナーの腎臓採取に続いて、前述のようにレシピエントマウスを調製し、レシピエントマウスをドレープし、カリブラリトラクターを挿入する。腸は術野の右または左に変位し、生理食塩水で湿った滅菌ドレープで覆われています。まず、右腎摘出術を結紮して行い、腎動脈と静脈を7つの縫合糸で結紮し、次に尿管を分離して結紮してから分裂させます。

最後に、腎動脈と静脈が分割され、その後腎臓を切除することができます。これにより、腹腔内に移植腎臓レシピエントの大動脈と大静脈のためのスペースができ、その後、血管吻合の準備が必要になります。まず、リンパ束を大動脈と大静脈から動員し、後腹膜を開きます。

腰椎血管を左右から鈍く解剖し、腰椎血管の周囲に縫合糸を留置します。その後、血管は分裂することなく連続的に結紮することができます。これにより、血管吻合を行う際の背中の出血を防ぎます。

次に、大動脈と大静脈との間に、および周囲の外来組織から窓を作るために、さらなる解剖が行われます。上微小血管クランプと下微小血管クランプの位置を特定し、余分な組織がなく、吻合の準備ができていることを確認します。この時点で、ヘパリンは、前に示したように静脈内注射によって投与することができ、ドナーの腎臓はレシピエントの腹腔内に置かれる。

静脈に留置した縫合糸が絡まらないようにマウスに注意する必要があります。この概略的な漫画は、ドナーの腎臓を右腎摘出術後にレシピエントのIVC大動脈と膀胱と一緒に示し、ドナーの腎臓を2つ移植します。外傷性クランプは、血管吻合部位の上下のIVCと大動脈に適用されます。

ドナーの腎臓、腎静脈、および動脈は、それぞれレシピエントのIVCと大動脈に吻合されます。これに続いて、非外傷性クランプが取り外され、ドナーの腎臓が再灌流されます。次に、尿管は最初にレシピエントの膀胱に吻合されます。

下微小血管クランプは、大動脈と大静脈の両方を含むように適用されます。その後、優れたクランプが配置されます。アトミーは、30ゲージの針と大静脈に生理食塩水で洗い流して作られています。

静脈切開術は鉗子で広げられます。以前にドナー腎静脈の上頂点に配置された縫合糸は、次に静脈耳術の上頂点にあるレシピエントの大静脈を通過します。次に、縫合糸を結び、pH 耳咽喉科の下尖に達すると、腎静脈の後壁から大静脈までのランニング縫合糸吻合が行われます。

以前に腎静脈に留置された2番目の縫合糸は、下大静脈を通過して結ばれます。次に、これを最初の縫合糸に結び付け、ランニング血管吻合を行って前壁を完成させることができます。添付のプロトコルでは、血管吻合の各ステップの図式表現が提供される。

不注意で前壁を後壁に縫合したり、金星吻合の縫合糸に実際の動脈や大動脈パッチを巻き込んだりしないようにすることが非常に重要です。その後、ドナーの自切術は、鉗子で大動脈の小さな楕円を拾い上げ、ハサミで正確に切断することによって作成できます。次に、10 OH縫合糸を大動脈パッチの上点に配置します。

動脈内皮表面の取り扱いは最小限に抑えるように注意してください。これにより血栓症のリスクが高まるため、縫合糸はA自切体と潮汐の上頂点を通過します。その後、大動脈パッチは、レシピエントの大動脈にランニング縫合糸で吻合され、それ自体に結び付けられます。

きつく結びすぎると、弦ごとの効果が発生し、流入が危険にさらされる可能性があるため、注意してください。下微小血管クランプが最初に取り外され、多くの場合、遠位大動脈から腎動脈への逆流により再灌流が起こります。次に、優れたクランプを取り外します。

その後、尿管吻合は、21ゲージの針を膀胱に出し入れすることによって行われます。次に、鉗子を管に戻して戻し、次に尿管を縫合糸を介して引き抜きます。次に、尿管の降臨組織を膀胱の降着組織に縫合し、3点で9つのOHポリアミドを使用して尿管を所定の位置に固定します。

その後、尿管は膀胱に流されて切断され、多くの場合、ドナーの腎臓によって尿が生成されているのを見ることができます。尿管あたり血管からの出血にも注意してください。尿管は膀胱内にゆるく横たわることが許され、腸を交換した後に欠損

腹膜を縫合し、金属製のクリップを使用して皮膚を閉じます。その後、ヨウ素を手術領域に適用し、塩酸タパゾールの皮下注射により麻酔を部分的に逆転させます。鎮痛薬は、塩酸ブプレノルフィンの注射によって投与されます。.

体液は、1ミルの温めた生理食塩水を皮下注射することによって投与されます。.マウスは、意識が回復し、警戒心が強くなり、自分で書くことができなくなるまで注意深く監視されます。マウスは、長期実験のために29度に保たれた加熱ボックスを24時間回収することができます。

継続的な鎮痛薬が投与され、スキンクリップが取り外されます。手術後7日。これは、手術後24時間のマウスで、完全に可動性があり、寝具組織に血痕のついた尿が過ぎ

このモデルでは、麻痺が現れた血管合併症を示している可能性があるため、麻痺の処理を監視することが重要です。次に、このモデルとさまざまなマウス系統を使用して、急性移植拒絶反応をモデル化するための腎移植拒絶反応の進行を研究する方法を示すデータです。変異マウス系統BM12をドナーとして使用します。

これらの変異型BM12マウスは、親のC 57ブラックシックス系統と異なり、BMCクラス2の違いが1つあり、BM12腎臓を腸Cレシピエントに移植します。クラス1とクラス2のMHCの完全な不一致により、急性拒絶反応を引き起こします。C 57ブラックシックス同種移植片は、分離されたMHCミスマッチBM 12 ISOグラフトによる慢性的な拒絶反応の発症につながります BM 12 ISO移植片は、完全なクラス1とクラス2のMHCの一致を持っているため、拒絶反応の兆候を示しません。

腎臓の構造は、ヘマチンとエオインで染色されたパラフィン包埋腎臓切片の病理組織学によって調べられます。このモデルは生存のために移植に依存しないため、ネイティブ腎臓をコントロールとして使用できます ISOグラフト腎移植後、腎臓は虚血再灌流障害を受けますが、4週間までに尿細管はBM12に続いて回復し、生検同種移植片移植に入ります。急性拒絶反応は、C 57 black six マウスに移植された二重アスタリスクおよび尿細管 BM 12 腎臓を持つ単一のアスタリスク壊死性尿細管で示されるびまん性単核細胞浸潤で明らかです。

ブロック矢印で示される血管周囲リンパ管浸潤を特徴とする慢性同種移植片損傷を引き起こし、中空矢印で示される間質性線維症および尿細管萎縮を伴う。高倍率電界あたりの尿細管の定量化は、機能的なネフロン質量を評価するために使用できます。ISO移植片と移植後4週間の天然腎尿細管数との間に差はなかった。

急性拒絶反応は、4週間までに尿細管の大幅な喪失をもたらします。それに比べて、慢性的な拒絶反応は、より多様ではあるが徐々に失われることを示しています。Piro serious redはパンコラーゲン染色であり、パラフィン包埋腎臓切片で実施して間質性線維症を定量化することができます。

ISOグラフト腎移植は、天然の腎臓BM 12 inter C 57と比較して、重要でない線維症に関連しています。ブロック6は12週で線維症の結果をもたらします。移植後、外科的技術のデモンストレーションに重点を置いた腎移植のモデルについて説明しました。

このモデルは、有意な学習曲線と関連しており、これを克服することで、再現性のある機能的なマウス腎臓移植モデルを達成することができます。記載されている株の組み合わせは、慢性腎移植損傷の主要な特徴を発現し、間質性線維症および尿細管萎縮の結果として生じる病理を調査するために使用できます。さらに、急性拒絶反応もモデル化できるため、このエンティティの重要な病態生理学的メカニズムの調査が可能になります。

このビデオでは、視聴者がこのモデルを忠実に再現するための重要な手術ポイントを提供します。