小さな汚染物質の免疫学的分析のための水試料の自動固相抽出ための簡単​​な方法

このサンプル調製方法の全体的な目標は、ユーザーフレンドリーで費用対効果の高い自動化された方法で、水サンプルから小さな有機汚染物質を予備濃縮することです。この方法は、ウェルプレートイムノアッセイやバイオセンサーなどの免疫検出法を使用して水サンプルの汚染を研究する際に、標準的なSPEプロセスを置き換えることができます。この手法の主な利点は、SPE手順が自動化されている一方で、機器の設置面積とコストが従来のアプローチに比べて低いことです。

さらに、濃縮プロセスの性能は、低溶媒含有量と予備濃縮効率の両方の点で、イムノアッセイの分析要件と一致します。まず、ゼロポイント2マイクロメートルの注ぐサイズのフィルターで100ミリメートルの水サンプルをろ過します。ろ過したサンプルをGL 45スレッドのガラス瓶に入れます。

メタノールを脱イオン水で希釈し、密閉チューブ内で300マイクロリットルの溶離液を50%の容量に希釈します。次に、ガラスバイル中の逆相吸着剤40ミリグラムに1, 600マイクロリットルのメタノールとそれに続く400マイクロリットルの脱イオン水を加えることにより、オクタデシルシリカ吸着剤粒子の20ミリグラム/ミリリットルの懸濁液を調製する。蓋をしっかりと閉め、ボルテックスミキサーで攪拌します。

細孔径11マイクロメートルのナイロンメンブレンを、防塵組織の二重層に置きます。メンブレンの2つの小さなパーツを直径3mmのパンチでカットします。次に、フラットエンドフィルター鉗子で小さなメンブレンをつかみ、カラムの片側に置きます。

これに続いて、平底コネクタをチューブにねじ込み、締めます。次に、柱の本体に矢印を描き、メンブレンが配置された端を指します。この時点で、矢印が下を向くようにホルダーにコラムを固定します。

下部ロックコネクタを使用して、空の10ミリリットルの使い捨てシリンジをカラムのチューブの端に取り付けます。ボルテックスミキサーで吸着剤懸濁液を攪拌し、カラムの中央で100マイクロリットルを急速にピペットで攪拌します。注入しながら、ピペットで動かした溶液をもう一方の手でシリンジを使用してメンブレンを通して穏やかに吸引します。

SPEカラムの調製は非常に重要です。シリンジを使用してメンブレンを通して溶液を適切に吸引しながら、粒子懸濁液をカラムに注入することを確認する必要があります。そうしないと、粒子が密に詰められません。

すべてのピペッティングステップ間でストック懸濁液を攪拌することにより、前のプロセスをさらに2回繰り返し、溶液中の粒子の均一な懸濁を確保します。懸濁液全体を装填し、シリンジで吸引して乾燥させた後、シリンジを所定の位置に保持し、もう一方の手で鉗子を使用して2番目のナイロン膜を上に置きます。.次に、2番目のコネクタをチューブでねじ込み、シリンジを廃棄します。

この時点で、下部ロック・コネクターを使用して、SPEデバイスのコラムを締めます。サンプルの入ったボトルをデバイスに接続するには、付属のGL45安全キャップをねじ込みます。溶離液リザーバーに200マイクロリットルの溶離液をロードします。

次に、希釈リザーバーに800マイクロリットルの脱イオン水をロードします。圧力調整器が閉じた位置にあることを確認するには、それ以上の動きが不可能になるまで圧力調整器を時計回りに逆に回します。プロトタイプの電源を入れた後、pset に 580、delta pset に 30 の値を入力します。

圧力調整器を調整するには、ポンプを始動します。次に、pregの読み取り値が劣っているが320ミリバールに近づくまで、圧力調整器を手動で回します。ポンプを停止した後、自動モードコーナーのスタートを押してSPE手順を開始します。

SPE手順が完了したら、サンプルの小さなバイルを閉じ、ELISA分析まで暗闇で摂氏4〜5度で保存します。システムを清掃するには、GL 45スレッドのガラス瓶に70体積パーセントのメタノールの10ミリリットル溶液を準備します。SPEカラムを抜き、チューブをコネクタで差し込みます。

自動モードでは、クリーニングファイルを選択し、以前にpset、delta pset、およびpregに使用したのと同じ圧力設定で開始します。吸着剤充塡剤の再現性は、ピペットで移した吸着剤をガラスバイル中で乾燥させ、秤量することによって評価しました。注入時間の再現性を100ミリリットルのサンプルについて試験しました。

初期および事前に濃縮したスパイクサンプルの濃度は、17 β-エストラジオールの市販の ELISA キットを使用して決定しました。検量線から、濃縮されたサンプルからのメタノール比がイムノアッセイの感度に影響を与えないことは明らかです。回収率は、脱イオン水と人工海水についてそれぞれ128、±22%、および107±6%が計算されました。

SPEカラムの調製を習得すると、適切に行えば、SPEカラムの調製は5分未満で完了します。SPEの手続きは、1時間以内に完了することができます。その開発後、この技術は、環境科学の分野の研究者が小さな有機汚染物質を監視するための免疫検出方法の開発を探求する道を開きました。

このビデオをご覧いただければ、イムノアッセイによる汚染物質分析のための費用対効果の高い自動装置を使用して水サンプルを調製する方法を十分に理解できるはずです。有機汚染物質や溶剤の取り扱いは危険な場合があり、このプロセスを実行するときは、適切な手袋や保護ゴーグルの着用などの予防措置を常に講じる必要があることを忘れないでください。