Name: ラット精巣挙筋の細動脈における無細胞層の可視化と定量化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: 学ぶラット精巣挙筋の外科的手術による細動脈無細胞層の可視化と定量化手法。マイクロ血流力学における細胞偏在性の理解と、従来の手動測定より効率的で正確な測定を実現します。

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この作業は、National Medical Research Council (NMRC)/Cooperative Basic Research Grant (CBRG)/0078/2014の支援を受けました。

この研究は、シンガポール国立大学の施設内動物管理使用委員会（承認されたプロトコルがない。R15-0225）によるものです。 動物モデルの1外科の準備<ol><li> 血管カニューレ挿入 <ol><li>ケタミン（37.5 mg / mlで）および腹腔内を介して、キシラジン（5 mg / mlで）カクテル（IP）注射（2ミリリットル/ kg）でグラム - （7週齢6）（203±20）のオスのSprague-Dawleyラットを麻酔。針をリキャップまたは注射後に注射器からそれを削除しないでください。 </li><li>動物は（爪先つまんで確認）、麻酔された後、37℃で、その体温を維持するために加温パッド上に置きます。そっと肩甲骨、前頸部、下腹部、内側後肢と陰嚢の毛を剃ります。ゆっくりと粘着紙テープを使用して足を拘束。 </li><li>見ながら顕微解剖ハサミと角度のついたピンセットを使用して、すべての外科的処置を実行します実体顕微鏡。手術中にけがを防ぐために、パンク防止トレイ上のすべての鋭い手術器具を配置します。 </li><li>切開を行う前に、すべての手術部位を交互にヨウ素、70％アルコールで3回スクラブ。 30 IU / mlのヘパリン - 食塩水溶液を持つすべてのカテーテルをフラッシュします。 </li><li>右頸静脈の上に手術用ハサミを使用して、肩甲骨1.5センチ正中皮膚切開 - 1を加えます。頸静脈を露出させるために鈍的切開により筋膜を分離し、これをポリエチレンチューブ（PE-50）5-0絹縫合糸を用いて、ヘパリン生理食塩水で満たされてカニューレを挿入。補足麻酔を注入する際に必要な（1/3初期投与量の1/2に、静脈内（IV））手術と実験の過程を通して。 </li><li>気道開存性を維持するために気管切開を行います。前頸部エリア1.5センチ切開 - 1を加えます。所定の位置にカテーテルを固定するために2-0絹縫合糸でポリエチレンチューブ（PE-205）を使用して、気管にカニューレを挿入。 </li><li>血圧を測定します大腿動脈にカニュレーションを通じて。後肢の左内側面で1.5センチ切開 - 1を加えます。鈍的切開によって大腿動脈を分離します。ヘパリン生理食塩水は、5-0絹縫合糸を用いて充填したポリエチレンチューブ（PE-10）と大腿動脈にカニューレを挿入。 </li></ol></li><li> 精巣挙筋の準備と流れの可視化 <ol><li>それを拡張するために陰嚢の頂部を通って5-0絹縫合糸を挿入します。陰嚢の腹側表面に沿って切開を行います。露出した筋肉に、定期的に暖かい等張液（pH 7.4、37℃）を適用します。 </li><li>慎重に周囲の結合組織を削除し、徹底的に綿棒を使用して。 </li><li>精巣挙筋の頂点を通って5-0絹縫合糸を挿入します。同じ長さの2つのピースに縫合糸をカットし、それぞれの側に結び目を作ります。 2ノットの間の筋肉をカットし、静かに縫合糸を引っ張ることにより、カスタマイズされた透明なプレキシグラスのプラットフォームにそれを伸ばします。フィックスブルータックとプラットフォームへの縫合糸の終わり。 注：周囲の結合組織の徹底的な除去は、最適な画像コントラストを得る上で重要です。 </li><li> 5〜6凝視が行われるまで、ステップ1.2.3を繰り返します。慎重に高温焼灼を使用して、精巣上体から精巣挙筋を取り除きます。組織の脱水を防ぐために露出した筋肉に温かい等張液を表面かん流します。 <ol><li>ガーゼの折り返し片と精巣挙筋を囲みます。ポリビニルフィルムで露出した筋肉をカバーしています。フィルムとガーゼ片は、水浸顕微鏡対物レンズ（ 図1A）のための温かい等張液を保持するために浅い盆地を形成しています。 </li></ol></li><li>生体顕微鏡（ 図1C）の動物ステージ上に動物を転送します。連続圧力監視（ 図1E）のための生理的データ収集システムに動脈カニュレーションを接続します。 </li><li>筋肉temperatを維持動物のプラットフォーム（ 図1B）の下に取り付けられた発熱体と35℃でURE。加熱素子（ 図1D）のパワー・コントローラへの負のフィードバックを提供するために、筋肉の横に温度プローブを配置します。 </li><li>環境と平衡に15分間のステージ上で動物を残します。 </li><li> 40X水浸対物レンズと長い作業冷却器を備えた生体顕微鏡で血液の流れを可視化します。 </li><li>血管の直径平面上に顕微鏡を集中させるためにはRBCコア、CFLと血管壁との間に明確な映像のピントやコントラストに基づいて分岐していない細動脈を（&lt;60μm）で、選択してください。垂直方向に血管壁を整列させるために、顕微鏡に取り付けたカメラを回転させます。 </li><li> 1秒間3,000 /秒のフレームレートの高速ビデオカメラを使用して血流を記録します。画像品質を維持するために、非圧縮8ビットグレースケールAVI形式として記録されたビデオを保存します。 注意：<html> 3000フレーム/秒の最小記録フレームレートがCFLの測定は、生理的細動脈の流れの条件の下で少なくとも一回RBCあたりに実行できることを確認することをお勧めします。 </li><li>赤血球と血漿との間のコントラストを高めるために、510 nmの - 310で394 nmおよびスペクトル帯域の波長でピーク透過と青色フィルタを使用してください。 注：光スペクトルは、微小光源（100 Wハロゲンランプ）からの青色フィルタを通過したことを確認し、任意の潜在的な組織の損傷を防止するために、低光強度です。 </li><li>実験の最後に、ペントバルビタールナトリウムの過剰投与により動物を安楽死させます。 </li></ol></li></ol> 2.画像解析 <ol><li> CFL幅測定のための前処理 <ol><li> MATLABを開き、「CFL_pre.m &#39;ファイルを実行します。 （これと他のMATLABファイルはで見つけることができますIP &quot;&gt;補足MATLABアーカイブ。） </li><li>分析するために、ビデオファイルを選択するには、「ファイルを開く」をクリックしてください。 </li><li>垂直方向に血管壁を整列させるために「回転」スライダを調整します。 注：ユーザーは「グリッドオン]ラジオボタンを選択することで、血管の位置合わせのための補助グリッド線を表示し、「ズーム」スライダーをスライドさせることにより、画像のズームレベルを調整することができます。 </li><li>血管の位置合わせを確認する「確認して編集」ボタンをクリックします。 </li><li>関心領域（ROI）を定義する」に設定したROI作物へ」ボタンをクリックします。配置画像がポップアップウィンドウに表示されます。画像上に長方形の目標を調整し、二重のROIをクリックして確認します。画像のトリミングが必要とされない場合は、このステップをスキップします。 注：のみ容器からCFL幅を分析するためのROI内の単一の容器が含まれます。必要に応じて、元の形にイメージを復元するには、「リセットイメージ」ボタンをクリックします。 </li><li>クリック9; &#39;（BMP&#39;形式の連続したビットマップ画像の8ビットグレースケール）に、すべての編集されたビデオフレームを抽出するためにボタン &#39;イメージを抽出します。抽出された画像は、選択したビデオファイルと同じ名前のフォルダに格納されています。 </li></ol></li><li> CFL幅の測定 <ol><li> MATLABを開き、「CFL_measure.m &#39;ファイルを実行します。 </li><li>抽出された画像を含むフォルダを選択するには、「[フォルダの選択]をクリックします。 </li><li>画像を含むフォルダをクリックし、「フォルダの選択」をクリックします。フォルダ内の最初の画像フレームがロードされ、「画像のヒストグラム」パネルで、その灰色の強度ヒストグラムと一緒に、「グレースケール画像」パネルに表示されます。 </li><li>分析を実行するために、リストボックスから所望の画像フレームを選択し、そうでなければ第1の画像フレームが選択されます。 </li><li>位置で決定された画像で血管内壁を識別するために、「血管壁を探す」をクリックします暗いから2ピクセル以上の光に光強度プロファイルのピーク遷移します。 </li><li> 「塩、コショウ」ノイズを低減する画像にメディアンフィルタを適用するには、「メジアンフィルタ」を確認してください。 </li><li>画像のコントラストを向上させるために、デジタル画像強度を調整する「自動コントラスト」を確認してください。 </li><li> τ（RBCコア）以下のグレーレベルでτ上記のグレーレベル（CFL）と白画素と黒画素 - 自動的に2つのクラスにグレイレベルを分割しきい値値（τ）を決定するリストボックスのしきい値アルゴリズムを選択します。 注：自動化された閾値処理アルゴリズムのいずれも適切な画像閾値化を提供しない場合は別の方法としては、手動のしきい値を使用します。 「マニュアル」のラジオボタンをクリックして、手動のしきい値の値を定義するには、スライダを調整します。 </li><li> 、CFL幅の空間的変化を測定する「ピクセル解像度」ボックス内のピクセル解像度（解像度を入力するにはこの実験で0.42ミクロン/ピクセル）でした。 </li><li> CFL幅の空間的な変化を得るために「計算」ボタンをクリックします。集計形式でCFL幅データをエクスポートするには、「書き出した.csv]をクリックします。 </li><li> 、血管に沿った特定の分析線でCFL幅の時間変化を測定する「時間変化]ラジオボタンをクリックして、フレームレート情報を入力します（この実験で使用されるフレームレートは3000フレーム/秒でした）。 </li><li>それぞれ、「フレームを起動 &#39;と&#39;最後のフレーム」ボックスに最初のフレームおよび分析のための画像の最後のフレームを入力します。 </li><li> 「分析ライン」のスライドバーをスライドさせることにより、血管に沿って分析線の位置を選択します。 「グレースケール画像」と「バイナリイメージ」の両方に示されている分析線の位置を確認してください。 </li><li> CFL幅の時間変化を取得するために「計算」をクリックしてください。 CLICKを表形式でCFL幅データをエクスポートするには、「エクスポートは.csvファイル」。 </li></ol></li></ol>

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</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

CFL幅の測定は、微小循環における血行動態のより良い理解のために不可欠です。具体的には、CFL幅の測定は腸間膜6で行われた、24および脳25微小循環をspinotrapezius。 in vivoでの CFL幅の従来の測定は、記録されたビデオフレームの手動検査によって推定に制限されていました。マニュアル測定は、視覚的にRBCコアと血管壁15,16の境界を特定する前に、いくつかの連続するビデオフレームの平均化を必要としました。別の研究では、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）は、赤血球及びローダミンBイソチオシアネート（RITC）はプラズマがネコ脳微小血管25の平均CFL幅を決定するために使用された標識-標識。これらの以前の測定方法は非常に時間がかかり、CFLのwiの空間分解能と時間分解能を制限する蛍光標識のための追加の手順が必要ですDTH測定。対照的に、効果的な画像セグメント化及び分析に高速度カメラの記録を結合することによって、技術はここで実証RBCの大きさよりも小さいオーダーの空間分解能（0.42ミ...

In vivoの動物研究は、人間の生理学と病理を理解するための基礎科学に役立っています。特に、in vivo微小血行動態研究は、血液の異常なレオロジー状態によって変化する微小循環機能の潜在的な障害を解明することができます。これまでの多くの微小血行動態研究1では、ラット火葬筋モデルを用いて微小血管の血流を可視化してきました。火葬筋は、精巣を囲む横紋筋の薄い層です。したがって、筋肉内の血流は、外科的曝露によってトランスイルミネーション顕微鏡で視覚化することができます。これにより、蛍光剤や造影剤を使用せずに生体内の血流画像を取得することができます。また、腹部大動脈閉塞2により上流の血流を減少させることにより、筋網の全血液灌流を制御することができる。これらの利点により、クレマスター筋モデルは、微小血管1,3における無細胞層(CFL)の形成を調査するために広く使用されています。
CFL幅は、微小循環における顕著な血行動態パラメータであり、微小循環機能の調節におけるその重要な役割について非常に興味深いものでした。CFLは、赤血球(RBC)のせん断誘発性横方向内方移動によって形成されます4。その結果、この移動により、血管壁付近の赤血球が枯渇し、最終的には無細胞プラズマ層が生じます。したがって、頭頂CFLは、RBCコアから組織への酸素(O2)送達、およびRBC5,6による一酸化窒素(NO)の捕捉に対する拡散障壁となる。さらに、NOの生成は、CFL幅7,8の動的変動によっても調整することができます。したがって、微小循環における血流をよりよく理解するためには、ガス輸送と微小循環における恒常性の調節の両方におけるCFLの役割を完全に確認する必要があります。最近の研究では、微小循環9-12におけるCFLの血行動態とガス輸送機能の橋渡しに焦点を当てています。さらに、別の一連の研究では、RBC凝集の病理学的上昇がCFL形成と組織13,14のO2およびNOバイオアベイラビリティに対するその影響をどのように調節するかについても調査されています。
CFLの役割は、容器の直径に対するCFLの幅の相対的なサイズが顕著な微小循環においてより重要になります。そのためには、in vivo血流中のCFLを定量化する効果的なアプローチが必要です。特に、画像取得と画像解析は、CFL幅測定の精度を決定する2つの重要な要素です。組織の血流をうまく視覚化するには、動物モデルの適切な外科的準備を行う必要があります。さらに、主に人為的エラーによって引き起こされる従来の手動測定の限界を克服するために、適切な画像分析技術が必要です15,16。デジタル画像処理のための光学計測と計算能力の進歩により、CFL幅17-19のより正確で一貫した測定を実現することが可能になりました。それにもかかわらず、これらの測定の精度は、画像ベースであるため、最終的には画像の品質に依存します。
したがって、この研究では、in vivo CFL幅の測定に影響を与える要因を調査します。特に、ラット火葬筋の細動脈のCFL幅を測定するための外科的準備とデジタル画像解析のデモンストレーションに焦点を当てました。

<table><tbody><tr><td>生体内顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>BX51WI</td><td>装置</td></tr><tr><td>ハイスピードカメラ</td><td>フォトロン</td><td>1024PCI</td><td>装置</td></tr><tr><td>ブルーフィルター</td><td>HOYA</td><td>B390</td><td>装置</td></tr><tr><td>圧力センサー&バイオパックシステム</td><td>バイオパックシステム</td><td>TSD104A、MP100</td><td>装置</td></tr><tr><td>温度調節器</td><td>島電</td><td>SR1</td><td>装置</td></tr><tr><td>Plasma Lyte A</td><td>Baxter</td><td>NDC:0338-0221</td><td>37°Cで暖かい;Cウォーターバス使用前に</td></tr><tr><td>生理食塩水0.9%</td><td>ブラウン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン(5,000 IU / ml)</td><td>LEO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE-10ポリエチレンチューブ</td><td>ベクトンディキンソン</td><td>427400.024</td> <td>"OD x .011" ID&nbsp;</td></tr><tr><td>PE-50 ポリエチレン チューブ</td><td>ベクトン ディキンソン</td><td></td> <td>427411.038" OD x .023" ID</td></tr><tr><td>PE-205 ポリエチレン チューブ</td><td>ベクトン ディキンソン</td><td></td> <td>427446.082" OD x .062" ID</td></tr><tr><td>2-0 非吸収性シルク縫合糸</td><td>Deknatel</td><td>113-S</td><td></td></tr><tr><td>5-0 非吸収性シルク縫合</td>糸 <td>Deknatel</td><td>106-S</td><td></td></tr><tr><td>水循環加熱パッド</td><td>ゲイマー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>アイソテンプ205</td><td>機器</td></tr><tr><td>滅菌コットンガーゼ&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>22-415-468</td><td></td></tr><tr><td>コットンチップアプリケーター</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>23-400-124</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS14188</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>マイクロ解剖鉗子</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS15915</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>アイリス鉗子 1 x 2 歯</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS15917</td><td>サージカル器具</td></tr><tr><td>血管カニューレ挿入鉗子</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS500377</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>マイクロハサミ</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS14177</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>アイリスシザー</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS14225</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>ベッセルクリップ</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>INS14120</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>ジェミニ焼灼システム</td><td>Braintree Scientific</td><td>GEM 5917</td><td>手術器具</td></tr></tbody></table>

ラット精巣挙筋の細動脈における無細胞層の可視化と定量化

Visualization and Quantification of the Cell-free Layer in Arterioles of the Rat Cremaster Muscle

無細胞層は、赤血球を欠いた微小血管の流れにおける頭頂血漿層として定義されます。in vivoの無細胞層幅とその時空間変動を測定することで、微小循環における血行動態を包括的に理解することができます。本研究では、生体内顕微鏡システムと高速度ビデオカメラを併用し、細動脈の無細胞層幅をin vivoで定量化しました。Sprague-Dawleyラットの火葬筋は、血流を視覚化するために外科的に外部化されました。また、セルフリー層幅の画像処理と解析を自動化するために、カスタムメイドのイメージングスクリプトも開発されました。このアプローチにより、従来の手動測定よりも一貫して時空間変動を定量化できます。ただし、測定の精度は、ブルーフィルターの使用と適切なしきい値アルゴリズムの選択に部分的に依存します。具体的には、ブルーフィルターを使用した場合と使用しない場合で取得した画像のコントラストと品質を評価しました。さらに、5つの異なる画像ヒストグラムベースの閾値化アルゴリズム(Otsu、最小、インターモード、反復選択、ファジーエントロピー閾値)を比較し、セルフリー層幅の決定における違いを示しました。

in vivoでの CFLの可視化は、動物の外科的な準備に大きく依存しています。過度の失血または拡張手術時間は収差を衝撃や血流ために動物を供することができます。手術と実験中加熱パッドだけでなく、カスタマイズされたプラットフォームを使用して、組織の温度の維持はまた、ラットの生理学的条件を維持するために重要です。顕微鏡システム100 Wのハロゲンランプを使用して、識別可能な組織の損傷があっても、実験の終了時に観察されませんでした。 図2Aは、CFLがRBCコアと内側容器壁（ 図2C）との間で観察することができるラット精巣挙筋における非分枝動脈を介して典型的なRBCの流れを示しています。実験中のこれらの構成要素間の良好なコントラストがCFL幅測定の精度を確保するために重要です。画像解析の初期位相を含みます内側の血管壁を検出します。容器に垂直な分析線に沿った光強度分布を取得することにより、場所が暗いから遷移が2ピクセル（ 図2B）の上に点灯することをピークに近似されま...

この研究は、in vivoの無細胞層を可視化するためのラットクレマスター筋の外科的準備を示しています。この研究では、セルフリー層幅測定の精度に影響を与える重要な要因について説明します。

The cell-free layer is defined as the parietal plasma layer in the microvessel flow, which is devoid of red blood cells. The measurement of the in vivo ...

この手順の全般的な目的は、生体内の細胞不含層（cell-free layer）の幅における時空間的な変動を定量化することです。この手法は、微小血行動態の分野における重要な疑問への回答に寄与し、微小循環におけるcell-philiaの役割をより深く理解するのに役立ちます。本手法の主な利点は、非常に時間がかかっていた従来の手動測定技術よりも、生体内のcell-philiaの幅を一貫性を持って、より簡便に定量化できる点にあります。無細胞層幅の測定を開始する前に、無細胞層用のMatLabプリスクリプトファイルを実行します。次に、「ファイルを開く」をクリックして解析対象のビデオファイルを選択し、回転スライダーを調整して単一血管の壁を垂直に合わせます。必要に応じてズームスライダーを使用してズームレベルを調整してください。血管が適切な位置に配置されたら、「編集確定」をクリックし、「ROI設定」をクリックしてクロップし、関心領域を定義します。整列された画像がポップアップウィンドウに表示されます。画像上の矩形領域を必要に応じて調整し、その領域をダブルクリックして関心領域（ROI）を確定させます。次に [Extract Images] をクリックすると、編集されたすべてのビデオフレームが連続したビットマップ画像として抽出され、選択したビデオファイルと同名のフォルダに保存されます。細胞不含層（cell-free layer）の幅を測定するには、[Select Folder]をクリックし、画像が保存されているフォルダを選択します。最初の画像フレームがグレースケール画像パネルに表示され、同時に対応する輝度ヒストグラムが画像ヒストグラムパネルに表示されます。分析したい画像フレームをリストボックスから選択し、[Find Vessel Walls]をクリックして血管内壁を特定します。内壁は、2ピクセルにわたって光強度プロファイルのピークが暗から明へと移行する箇所として決定されます。「median filter」にチェックを入れると、メディアンフィルタが画像に適用され、ごま塩ノイズが低減されます。「auto-contrast」にチェックを入れると、画像の輝度がデジタル調整され、コントラストが向上します。次に、リストボックスから閾値処理アルゴリズムを選択し、グレーレベルを2つのクラス（閾値より高いグレーレベルの白ピクセルと、閾値より低いグレーレベルの黒ピクセル）に分ける閾値を自動的に決定します。細胞除去層幅の空間的変動を測定するには、ピクセル解像度ボックスにピクセル解像度を入力します。次に [Calculate] をクリックして細胞除去層幅の空間的変動を算出し、[Export. csv] をクリックして細胞除去層幅のデータを表形式でエクスポートします。血管に沿った特定の解析ラインにおけるセルフリー層幅の時間的変動を測定するには、Temporal Variationをクリックし、フレームレート情報を入力してください。解析に使用する画像の開始フレームと最終フレームを、それぞれstart frameおよびlast frameボックスに入力します。解析ラインのスライドバーを調整して血管に沿った解析ラインの位置を選択し、グレースケール画像とバイナリ画像の両方に表示される解析ラインの位置を確認してください。次に、「Calculate」をクリックして細胞不全層（cell-free layer）幅の経時的変化を算出し、「Export. csv」をクリックして細胞不全層幅のデータを表形式でエクスポートします。ここでは、ラットのクレマスター筋にある非分枝動脈を赤血球が流れる典型的な例を示しており、RBCコアと血管内壁の間に細胞不全層が観察されます。これらの構成要素間の良好なコントラストは、無細胞層の幅の測定精度を確保するために不可欠です。画像解析の初期段階では、血管内壁の検出を行いました。血管に対して垂直な解析線に沿って光強度プロファイルを取得することで、2ピクセルの間で暗から明へと遷移するピーク位置を近似的に特定します。続いて、画像しきい値処理アルゴリズムを用いてRBCコアの境界を検出し、CFL幅を算出します。細胞不含層（cell-free layer）内の赤血球は光透過率が異なるため、グレーレベルの差を2つのクラスに分類することができます。しかし、画像ヒストグラムにおける2つのピーク間の正確なしきい値の特定は、画質やコントラストの低さによって制限される場合があります。赤血球とセルフリー層のコントラストを向上させるために、ブルーフィルターを使用することができます。これはこれらの画像においてより顕著であり、ブルーフィルターを用いることで赤血球コアの境界をより正確に特定できています。また、これらの画像でわかるように、しきい値設定アルゴリズムもセルフリー層の幅の測定に影響を与える可能性があり、異なるしきい値設定アルゴリズムによって赤血球コアの境界の特定結果が異なり、その結果、セルフリー層の幅にも差異が生じています。生体内の細胞不含層（cell-free layer）の幅の測定は、画像の品質に非常に敏感です。したがって、手術を慎重に行い、適切な光学補助装置を使用して高品質な画像を取得してください。さらに、正確で一貫性のある細胞不含層幅の測定を確実にするためには、適切な画像しきい値処理アルゴリズムを選択することが不可欠です。

visualization-quantification-cell-free-layer-arterioles-rat-cremaster

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

組織の準備を可視化し、生活の微小循環の実験的操作のために説明されています。麻酔雄マウスでは、薄く、非常に血管形成精巣挙筋は細動脈、毛細血管と細静脈を含む微小血管のネットワークを研究する生体顕微鏡検査用に準備されています。この製剤は、容易にラットとハムスターに適合されている。...

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ラットの精巣挙筋の虚血再灌流障害における白血球 - 内皮相互作用のリアルタイムデジタルイメージング（IRI）

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生きたマウスにおける血管炎症及び血栓形成の間に活性化内皮上に異型血小板、好中球の相互作用のリアルタイムイメージング

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末梢血幹細胞移動の解析のためのマウス精巣挙筋で微小循環の生体顕微鏡

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Ex Vivo細胞生理学研究のため網膜細動脈の隔離

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脳実質細動脈からの無傷のマウス脳内皮「チューブ」の集中的な調製は、脳血流調節を研究するために例示される。さらに、我々は、細胞内[Ca2+]および膜電位の変化を含む重要な細胞シグナル伝達経路の蛍光イメージングおよび電気生理学的測定のためのこの内皮研究モデルの実験的強みを実証する。...

マウス脳実質の動脈内皮の単離と機能解析

学ぶラット精巣挙筋の外科的手術による細動脈無細胞層の可視化と定量化手法。マイクロ血流力学における細胞偏在性の理解と、従来の手動測定より効率的で正確な測定を実現します。

ラット精巣挙筋の細動脈における無細胞層の可視化と定量化

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