Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and <em>In Situ</em> Proximity Ligation Assay

Xinzhou Zhu; Andrea Zelmer; Sven Wellmann

doi:10.3791/55218

共免疫沈降により核および細胞質画分中のタンパク質間相互作用の可視化とその場で近接ライゲー...

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Biochemistry

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Visualization of Protein-protein Interaction in Nuclear and Cytoplasmic Fractions by Co-immunoprecipitation and In Situ Proximity Ligation Assay

共免疫沈降により核および細胞質画分中のタンパク質間相互作用の可視化とその場で近接ライゲーションアッセイ

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10:05 min

January 16, 2017

DOI: 10.3791/55218-v

Xinzhou Zhu¹, Andrea Zelmer¹, Sven Wellmann^1,2

¹University Children's Hospital Basel (UKBB),University of Basel, ²Department of Clinical Research,University of Basel

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

タンパク質間相互作用は、細胞の核と細胞質の両方で発生する可能性があります。これらの相互作用を調べるために、従来の共免疫沈降と最新の近接ライゲーションアッセイが適用されます。本研究では、これら2つの方法を比較して、核と細胞質におけるNF90-RBM3相互作用の分布を可視化します。

この実験の全体的な目標は、異なる細胞コンパートメント内のタンパク質タンパク質相互作用を視覚化する際の共免疫沈降法(co-ip)と近接ライゲーションアッセイ(pla)の長所と短所を比較することです。ここで紹介した2つの異なる方法の比較は、科学者が細胞の核と細胞質内のタンパク質タンパク質相互作用の分布パターンを調査する際に、どちらが特定の目的に適しているかを判断するのに役立ちます。co-ipの主な利点は、真正なタンパク質タンパク質相互作用を検出できることです。

対照的に、plaの利点は、研究所のタンパク質相互作用を単一細胞レベルで迅速に解析できることです。テキストプロトコルに従ってhex293細胞を増殖させ、収穫した後、6番目の細胞に3×10に、冷たい細胞質抽出液の300マイクロリットルを追加し、15秒間最高速度で細胞をボルテックスします。抽出物を氷上で30分間インキュベートし、インキュベーション中は10分ごとにサンプルを5秒間ボルテックスします。

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