Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

Rachel A. Battaglia; Parijat Kabiraj; Helen H. Willcockson; Melinda Lian; Natasha T. Snider

doi:10.3791/55655

複数のマウス組織からの中間体フィラメントタンパク質の単離による老化に関連する翻訳後修飾の研究

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Biochemistry

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Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

複数のマウス組織からの中間体フィラメントタンパク質の単離による老化に関連する翻訳後修飾の研究

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09:29 min

May 18, 2017

DOI: 10.3791/55655-v

Rachel A. Battaglia¹, Parijat Kabiraj¹, Helen H. Willcockson¹, Melinda Lian¹, Natasha T. Snider¹

¹Department of Cell Biology and Physiology, School of Medicine,University of North Carolina at Chapel Hill

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

この方法では、複数のマウス組織から中間体フィラメント（IF）タンパク質を迅速かつ効率的に単離するための生化学的手順を提示する。単離されたIFは、質量分析および他の生化学アッセイによる翻訳後修飾の変化を研究するために使用することができる。

この生化学的手順の全体的な目標は、さまざまな組織特異的な中間フィラメントタンパク質の翻訳後修飾を研究するために、複数のマウス組織から中間フィラメントが豊富な画分を単離することです。この方法は、哺乳類の老化中にこれらの重要なストレス保護細胞骨格タンパク質の機能と調節がどのように影響を受けるかなど、中間フィラメント分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、自動組織溶解ステップを組み込むことで、ユーザーが複数の組織サンプルを迅速かつ効率的に処理できることです。

まず、プロテアーゼ阻害剤を添加した氷冷したTriton X-100バッファー1ミリリットルをガラス管ホモジナイザーに加え、氷の上に置きます。液体窒素貯蔵庫からティッシュの小片を取り出し、ガラスホモジナイザーに直接入れます。次に、ホモジナイザーとサンプルを常に氷上に置いたまま、ポリテトラフルオロエチレンマシュタイユを約50ストローク使用して、気泡の形成を最小限に抑えながらサンプルをホモジナイズします。

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