Name: 繰り返しオゾン暴露によるマウスの慢性閉塞性肺疾患モデルの生成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: 学ぶ繰り返しオゾン暴露によるマウスの慢性閉塞性肺疾患モデル生成法。6〜8週間で作製でき、COPD患者の病理過程を再現し、薬剤スクリーニングや病態メカニズム解明に有用な新規動物モデルです。

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著者はこのプロトコル µCT の評価に関する技術的な支援を療養 Qin 氏 (上海公共衛生臨床センター) に感謝して思います。

注:、純正モデルが生成されて、以前に報告された研究 30 , 31 , 32 で使用します。すべての動物実験は機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) 上海交通大学によって承認されました。
 1 です。 マウス <ol><li>家病原体フリー、7-9 週齢女性 BALB/c マウスで動物の個別換気ケージ施設制御温度 (20 ° C) と湿度 (40-60%)。12 h 光と施設で 12 h 暗いサイクルを提供します。食品を提供し、広告自由 水します</li>。
</ol> 2。オゾンや大気暴露 <ol><li>シール (例えば 風防) アクリル ボックスに電動発電機とオゾンを生成します。内側に、箱の外側に接続されているエアコン通気管を通じて小さな空気送風機を使用して箱から出して空気を吹きます。オゾン プローブを使用してボックスにオゾン濃度を監視します。ボックスでのオゾンの濃度に達するあたり 2.5 部品までを待つ百万 (ppm) です 。
	注: オゾン プローブ オンまたはオフに自動的にオゾン発生器を切り替えることができます、2.5 ppm のボックスにオゾン レベルを維持できます</li>。
	<li>は、2.5 ppm のオゾンのレベルに達したら、ボックスにマウスを配置します。オゾンにそれらを公開するたびに 3 h のボックスにマウスを保持します 。
	注: ボックスは自動的にオンまたはオフにオゾン発生器を切り替えることにより 3 h 中に 2.5 ppm のオゾン濃度を維持できるし、箱から出してマウスによって生成される CO 2 を吹いています</li>。
	<li>7 週間 (3 日に 1 回) 週 2 つのオゾン露出 (3 時間を持続させるそれぞれの暴露) を与える; 同時にそして同じ期間の空気コントロール マウスを公開します</li>。
</ol> 3。マイクロ コンピューター断層撮影 <ol><li>7 週の終わりには、pelltobarbitalum natricum の腹腔内注入マウスを麻酔 (1%、0.6 - 0.8 ml/100 g) マウスがないことを確認する個々 の状況に応じて投与量を調整つま先ピンチ。 モニターに対応し、安定した呼吸の頻度でマウスを維持手続き中に自主的な動きがないかどうかを確認します</li>。
	<li>マイクロ コンピューター断層撮影 (µCT) の商工会議所に麻酔下のマウスを配置します</li>。
	<li>調整、メーカー標準のプロトコルを使用して µCT &#39; の指示。X 線管を設置 50 kV と 450 μ A の電流 。
	注: 両方、マウスを中心に x 線と検出器回転します</li>。
	<li>µCT 解析を行う 1 つのスライスの 300 ms の露光時間と 0.093 mm スライス厚 0.092 mm 有効画素サイズ 515 予測を取得します</li>。
	<li>は、ソフトウェアを使用して取得した画像で肺を再構築します。それぞれ-750 -550 ハンス台で最小値とグレースケールの最大を設定することでグレースケール画像の明るさを調整します 。
	注: ソフトウェアが自動的に肺実質と低吸収域 (LAA) 34 , 35 のボリュームを計算します</li>。
	<li>LAA ボリューム総肺気量で割ることによって LAA (LAA %) の割合を計算します</li></ol>。
 4 トレッドミル テスト <ol><li>適応マウスの上実行しているトレッドミル マシン注 10 分間 10 m/分の速度でテストを与える: 電気は、常にオフの手順が実施されている場合。</li> <li>管理、。マウスに疲労試験。
	<li>ウォーム アップ 5 分 10 m/分の速度でマウス</li> <ol>
		<li>15 m/分で 10 分間に速度を上げる</li>
		<li>運動強度を高める: 20 m/分、開始 5 m/分まで速度を上げるマウスまで 30 分毎の 36 を実行する続行できません</li>。
	</ol></li> <li>走行距離、距離疲労と疲労時間として時間を実行すると、それぞれの合計を記録します</li></ol>。
 5 肺機能測定 <ol><li>pelltobarbitalum natricum の腹腔内注入マウスの麻酔 (1%、0.6 - 0.8 ml/100 g) マウスを見るのは個々 の状況に応じて投与量を調整。つま先のピンチに応答しないと、マウスは自発呼吸。 モニターを維持し、安定した呼吸の頻度でマウスを維持するを待つ手続き中に自主的な動きがないかどうかを確認します</li>。
	<li>は慎重にマウスを tracheostomize し、コンピューター制御の人工呼吸器に接続されている体プレチスモ グラフでそれらを配置します 。
	注: 換気、気管内チューブに近位に位置する弁を介して制御されます。セットアップは、準静的圧力ボリュームの演習、高速水流量の演習を含む別の半自動操縦を提供します</li>。
	<li>平均通常呼吸パターンまで圧力制御の換気麻酔下マウスに 150 の呼吸/分の呼吸を課すし、各呼吸サイクルの完全な有効期限を取得します</li>。
	<li>プレチスモで生成された負圧を使用して、デバイスと準静的圧力ボリューム操作を実行します</li>。
	<li>は、声帯と fev 社を記録する準静的圧容積ループ内で速い流れボリューム操作を実行します。+30 cm H 2 肺を膨らませる O およびすぐにその後まで残留量-30 cm H 2 o ・ レコードで、最初の 25、50、75 ms 呼気 (fev 社 25 の fev 社は有効期限を設けるに高い負圧に接続、Fev 社 50、と fev 社 75、それぞれ)。最適な演習を拒否します。ひとつひとつのマウスと各テストでは、すべての数値パラメーターの信頼できる平均を取得する 3 つの許容される作戦の最低です</li>。
</ol> 6。BALF コレクション <ol><li>pelltobarbitalum natricum ターミナル麻酔後 ((1%、1.8 2.4 ml/100 g)、マウスはないつま先ピンチに対応し、息を失うことを参照してくださいに個々 の状況に応じて投与量を調整)、洗浄、2 ml の PBS の 1 mm の気管内チューブと、取得 BALF 10 を介してマウスします</li>。
	<li>取得した洗浄因数をプール、それら 4 ° C で 250 x g で 10 分間遠心</li>
	<li>即座の使用のための上澄みを集め、-80 ° C または液体窒素で残りの部分を格納します</li>。
	<li>診断を使用してセルの合計数をカウントします</li>。
	<li>PBS で、スピン (1,400 x g、6 分) 250 μ L のスライド スピンの遠心分離機を使用してスライド上に細胞を再懸濁細胞ペレットを再懸濁します</li>。
	<li>製造業者に従ってスライド細胞適用ライト染色 &#39; s プロトコル</li>。
	<li>マウスあたり 200 セルをカウント; 400 倍の倍率での標準的な形態によるとマクロファージや好中球、セルを識別し、その番号をカウントします</li>。
</ol> 7。心臓採血 <ol><li>心臓穿刺による採血、1.5 mL チューブにそれを読み込む、氷上で 30 分間それを維持</li>
	<li>G × 2,000 と 4 で 5 分間の血液サンプルを遠心分離機 ° C</li>
	<li>新しいチューブに上清 (血清) を転送し、-80 ° C または液体窒素で保存します</li>。
	<li>Il-1 β の血清を準備 IL-10 ・ TNF α 検出テストのそれぞれの ELISA キットを使用しています</li>。
</ol> 8。肺木股 <ol><li>マウスから気管、肺を解剖。
	<ol><li>犠牲後すぐに手術のボードの上にそれぞれの euthanized マウスを配置します</li>。
		<li>広頸筋を離れて分析と視覚化し、気管軟骨輪をアクセスする前脛骨気管筋</li>。
		<li>、胸部を開く空洞。解剖肺と、気管が肺から心臓を区切らないでください</li>。
	</ol>
</li> <li>PE90 ポリエチレン管を通って 4% パラホルムアルデヒドの入った注射に気管内カテーテルを接続します 。
	注意: パラホルムアルデヒドは有毒です。手袋と安全メガネを着用、ヒューム フード内部ソリューションを使用します</li>。
	<li>は、気管内カテーテルを 4% パラホルムアルデヒド (10 滴、〜 200 μ L) を使用して完全に肺を膨らませます。インフレの完了後中心部を削除します</li>。
	<li>少なくとも 4 時間のための 4% のパラホルムアルデヒドの 10 mL を含む 15 mL チューブに肺を維持</li>
	<li>はパラフィンに肺を埋め込みます。回転式ミクロトームで、セクショニング パラフィン ブロックで 5 μ m のセクションを取得します。断面、肺の気管支領域内の最大の表面積を公開します</li>。
	<li>形態計測学的解析、実行ヘマトキシリンとエオシン (H &#38; E) セクションに染色します</li>。
	<li>明るいフィールド正立顕微鏡 (対物レンズ 20 X; 露光時間、1.667 ms) とセクションのイメージします</li>。
	<li>がある 2 つの調べ治療プロトコルに目がくらんで組織切片を別々 にカウントします。間肺胞中隔の壁までの距離を測定するためのパラメーターとして平均線形インターセプト (L m) を使用します。L m 次の手順を使用してを決定する: <ol><li>セクションのイメージを Photoshop で開き、5 550 μ m の長い行のイメージにレティクル グリッドを描画します</li>。
		<li>グリッド線上に肺胞の数をカウントします</li>。
		<li>は、グリッドの行の長さを肺胞の数で割ることによって L m を計算します。定量化, 画像のマウスごとの 5 つのセクションを実行します。各セクション (フィールド 1 つのイメージ) の 10 の画像を取得し、ランダムに評価します。フィールド選択中に前方または別の方向に 1 つのフィールドを移動することによって航空・船舶分野を避ける 。
		注: データは、平均 ± S.E.M. として記載して非対応の t 検定は空気にさらされたマウスとマウスのオゾン暴露間の比較を行った。各グループの 3 つの動物は、有意の差の計算に使用されました。P-値 &#60; 0.05 が重要視され</li>。
	</ol>
	</li>
</ol>

Z.W.S. と大戦は、現在の従業員と細胞生物医学グループのストック オプションの保有者 (NASDAQ: CBMG)。他の作家は、彼らが競争の興味あることを宣言します。

この研究では、COPD の新しいモデルを生成するための信頼性の高い方法を提案する.この OE モデル (すなわち、 LPS または PPE モデル) の他のモデルと比較して、COPD 患者の病理学的プロセスを繰り返します。タバコの煙は、人間の患者40で COPD を引き起こす主な有害物質は、最も人気のある COPD モデル41,42のまま CS モデルです。ただし、CS モデルは 3-12 月 R を必要があります &#38; 新薬の開発期間。CS モデルに比べると、現在の純正モデルは、6-8 週間に生成期間を短縮します。我々 は、私たち以前研究30,31,32オゾン暴露の 6 週間後雄マウスで肺気腫を観察しました。本研究では 7 週間雌マウスに OE プロトコルを適用し...

それは、COPD、肺気腫と慢性気管支炎を含むかもしれない 2020年1,2の世界の死の 3 番目の主要な原因をこと推定されています。人口の 40 歳以上の COPD の潜在的な発生率は、男性で 12.7%、次の 40 年の3で女性の 8.3% と推定されます。COPD 患者4の進行悪化を逆に現在利用できる薬はありません。COPD の信頼性の高い動物モデルだけでなく病気の病理学的プロセスの模倣の需要、また短い世代期間が必要。LPS または PPE 誘発モデルを含む、現在の COPD モデルは、肺気腫のような症状5,6を引き起こすことができます。単回投与または LPS または PPE の一週間にわたる課題著明な BALF の血清、プロ炎症性メディエーター (例えばTNF-α や il-1 β) を増加、気管支肺胞洗浄液 (BALF) でマウスやラットの結果を生成する肺実質の破壊拡大の空気のスペースと制限気流5,6,7,8,9,10。ただし、組合や PPE 人間 COPD の原因ではない、従って11病理学的プロセスを模倣しません。CS 誘起モデルは、永続的な気流制限、肺実質の破壊を生産し、機能的運動能力を削減します。しかし、伝統的な CS プロトコルには、COPD モデル12,13,14,15を生成するため、少なくとも 3 ヵ月が必要です。したがって、2 つの要件を満たしている新しいより効率的な動物モデルを生成する重要です。
最近では、タバコを吸う、に加えて大気汚染や職業暴露は COPD16,17,18のより一般的な原因になっています。主要な汚染物質の一つとして、オゾン (ただし大気汚染の主要なコンポーネントではなく)、することができます直接気道反応し、子供や若い大人19,20,21 の肺組織の損傷 ,22,23,24,25。組合、PPE は、CS などその他の刺激と同様に、オゾン、深刻な肺の酸化ストレスや DNA の損傷の生化学的経路に関与しているし、開始と COPD26,27のプロモーションにリンクしています。別の要因は、オゾン、オゾンが肺機能18,28,29を破壊できることを示すにさらされた後いくつかの COPD 患者の症状が悪化することです。したがって、我々 は繰り返し 7 週間のオゾンの高濃度にマウスを公開することによって新しい COPD モデルを生成これは気流の欠陥や肺実質損傷前調査30,31,32のものと同様で起因しました。本研究では雌マウスに OE プロトコルを拡張し、私たち以前研究30,31,32の雄マウスにみられる肺気腫を再現します。COPD 死亡率は男性で減少したが、多くの国の33の女性で増加、ためメカニズムの研究と女性の COPD 患者の治療法を開発する女性の COPD モデルが必要です。すべての性別に OE モデルの適用性は、COPD モデルとしての使用にさらにサポートを貸します。

<table><tbody><tr><td>BALB/cマウス</td><td>Slac Laboratory Animal,Shanghai, China</td><td>N/A</td><td>7-to-9 week-old の雌BALB/cマウスをこの研究で使用しました。</td></tr><tr><td>個々の換気ケージ</td><td>蘇庵、上海、中国</td><td>型式番号:MU64S7</td><td>ケージは動物施設でマウスを収容するために使用されました。</td></tr><tr><td>シーリングパースペックスボックス</td><td>Suhang、上海、中国</td><td>N / A</td><td>ボックスは、オゾン発生器を格納するために使用されました&nbsp;マウスは箱の中でオゾンにさらされました。</td></tr><tr><td>発電機</td><td>サンダー・オゾニザー、ユッツェ・エルツェ、ドイツ</td><td>モデル500&nbsp;</td><td>この装置はオゾンの生成に使用されました。</td></tr><tr><td>オゾンプローブ</td><td>ATi Technologies, Ashton-U-Lyne, Greater Manchester, UK</td><td>Ozone 300</td><td>この装置は、オゾンの生成を監視および制御するために使用されました。</td></tr><tr><td>Pelltobarbitalum natricum</td><td>Sigma、セントルイス、ミズーリ州、米国</td><td>P3761</td><td>マウスは、pelltobarbitalum natricumの腹腔内注射によって麻酔されました。</td></tr><tr><td>マイクロコンピュータ断層撮影</td><td>GEヘルスケア、ロンドン、オンタリオ州、カナダ</td><td>RS0800639-0075</td><td>このデバイスは、肺の画像を取得するために使用されました。</td></tr><tr><td>Micro-view 2.01 ABAソフトウェア</td><td>GE Healthcare, London, ON, Canada</td><td>Micro-view 2.01&nbsp;</td><td>この装置は、肺の再建と肺の体積、LAAの分析に使用されました。</td></tr><tr><td>トレッドミルマシン&nbsp;</td><td>Duanshi、杭州、浙江省、中国</td><td>DSPT-208</td>この<td>マシンは疲労試験のために米ドルでした。</td></tr><tr><td>ボディプレチスモグラフ</td><td>eSpira&trade;強制機動システム、EMMS、エジンバラ、英国</td><td>強制機動システム</td><td>この装置は、肺活量測定の肺機能をテストするために使用されました。</td></tr><tr><td>ベンチ</td><td>レーターeSpira&trade;強制機動システム、EMMS、エジンバラ、英国</td><td>強制機動システム</td><td>この装置は、肺活量測定の肺機能をテストするために使用されました。</td></tr><tr><td>スライドスピナー遠心分離機</td><td>Denville Scientific, Holliston, MA, USA</td><td>C1183&nbsp;</td><td>BALF細胞をスライド上にスピンするために使用されました。</td></tr><tr><td>Wright Staining</td><td>Hanhong, Shanghai, China(上海市)</td><td>RE04000054</td><td>&nbsp;これは、懸濁したBALFのマクロファージ、好中球の染色に使用されました。</td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>Hausser Scientific, Horsham, PA, USA</td><td>4000</td><td>細胞を数えるために使用されました。</td></tr><tr><td>IL-1&ベータ;</td><td>Abcam, Cambridge, MA, USA</td><td>ab100704</td><td>それらは、血清中のそれぞれの因子をテストするために使用されました。</td></tr><tr><td>IL-10</td><td>Abcam, Cambridge, MA, USA</td><td>ab46103</td><td>それらは、血清中のそれぞれの因子をテストするために使用されました。</td></tr><tr><td>TNF-&アルファ;</td><td>Abcam、ケンブリッジ、マサチューセッツ州、米国</td><td>ab100747</td><td>それらは、血清中のそれぞれの因子をテストするために使用されました。</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド&nbsp;</td><td>シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国</td><td>P6148</td>肺<td>は4%パラホルムアルデヒドによって膨らみました。</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Hualing、上海、中国</td><td>56#</td><td>肺を埋め込むために使用されました。</td></tr><tr><td>ロータリーミクロトーム</td><td>ライカ、ウェッツラー、&nbsp;ヘッセン州、ドイツ</td><td>RM2255</td><td>肺の切片化に使用されました。</td></tr><tr><td>Hgaematoxylinおよびエオシン(H&E)染色液</td><td>Solarbio、北京、中国</td><td>G1120</td><td>H&形態計測解析のためにE染色を行いました。</td></tr><tr><td>直立型明視野顕微鏡</td><td>オリンパス、ペンシルベニア州センターバレー、米国</td><td>CX41</td><td>H&E染色スライド。</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 12</td><td>Adobe, San Jose, CA, USA</td><td>Adobe Photoshop 12</td><td>H&E染色画像。</td></tr><tr><td>GraphPad prism 5</td><td>Graphpad Software Inc., San Diego, CA</td><td>GraphPad prism 5</td><td>データ分析やフィギュアの制作に使用されました。</td></tr></tbody></table>

繰り返しオゾン暴露によるマウスの慢性閉塞性肺疾患モデルの生成

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

慢性閉塞性肺疾患 (COPD) は、永続的な気流制限や肺実質の破壊によって特徴付けられます。それは人口高齢化における発生率が非常に高いです。COPD フォーカスを中心に症状変更薬; 現在の従来の治療法したがって、新しい治療法の開発が急務します。COPD の修飾の動物モデルは基になるメカニズムを特徴付けるために助けることができるし、新しい薬物スクリーニングに使用することができます。リポ多糖 (LPS) など、現在の COPD モデルやブタ膵臓エラスターゼ (PPE)-誘導肺気腫モデル肺と気道における COPD のような病変を生成が、そうでなければ人間 COPD の病因を似ていません。タバコの煙 (CS)-誘導モデルのまま 1 つの最も人気のあるのでそれはだけでなく呼吸器系における COPD のような病変をシミュレートしますが、それは人間の COPD を引き起こす主な有害物質の一つに基づいています。ただし、CS 誘発モデルの時間のかかり、労働集約的な側面は、劇的に新しい創薬スクリーニングへの応用を制限します。この研究では、正常に高濃度のオゾンにマウスを公開することによって新しい COPD モデルを生成しました。このモデルは次を示した: 1) 強制呼気量 25、50、75/強制肺活量の減少 (fev 社25/FVC、fev 社50/FVC と fev 社75/FVC)、肺機能の悪化を示す2) 拡大肺肺胞、肺実質の破壊;3) 削減疲労時間と距離。・ 4) 炎症を増加します。一緒に取られて、これらのデータは、オゾン暴露 (OE) のモデルがオゾン露出オーバーは COPD の病因の要因の一つは、人間に同じような信頼性の高い動物モデルであることを示します。さらに、6-8 週間、OE モデル COPD 研究の良い選択であるかもしれないことを示すタバコの煙モデルを誘発する 3-12 ヶ月を必要とするのに対し、純正モデルを作成する私たちの前の仕事に基づくだけかかった。

各グループの 3 D µCT 画像の例としては、図 1に表示されます。オゾン暴露マウスが大きく総肺気量 (図 1と b) と LAA % (図 1c) 空気露出コントロール マウスよりも。肺気量と LAA % に残ったオゾン露出31,32の 6 週後上昇。LAA % と増加し、肺容積は、肺気腫の表現型を表しています。図 2に肺の肺胞肥大の例では、肺気腫形成を示しています。平均線形インターセプト (Lm) の増加は、ozone 暴露後肺実質の破壊が発生したことを確認したオゾン暴露マウス (...

本研究では、オゾンの高濃度にマウスを繰り返しさらすことによって新しい慢性閉塞性肺疾患 (COPD) の動物モデルが正しく生成について説明します。

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

本実験の全体的な目的は、マウスへのオゾン曝露（OE）により、慢性閉塞性肺疾患（COPD）を誘導することである。この新しいOEモデルは、COPDの潜在的なメカニズムの特性解析に活用でき、新薬のスクリーニングにも利用可能である。このOEモデルの主な利点は、COPD患者の病理学的プロセスを再現している点にある。これはわずか6〜8週間で生成可能です。本手順のデモンストレーションを行うのは、当グループのリサーチフェローであるWeijaian Sangです。オゾンを生成するには、電気発生器と小型エアブロワーを使用し、ボックスの内外を繋ぐエアベントパイプを介して、密閉されたPerspexボックス内に空気を吹き込みます。その際、オゾンプローブを用いてボックス内のオゾン濃度をモニタリングします。オゾン濃度が2.5 parts per millionに達した時点で、マウスをボックス内に3時間入れてください。7週目の終了時に、標準プロトコルに従って、オゾン処理した動物をマイクロコンピューター断層撮影（micro-computed tomography）で撮影します。オゾン誘発性の変化および肺疲労などの機能的容量をテストするため、まずトレッドミル上で分速10 meters per minuteの速度でマウスをウォーミングアップさせます。5分後、速度を15 meters per minuteに上げ、10分間維持します。その後、マウスが走行できなくなるまで、30分ごとに速度を5 meters per minuteずつ上げ続けます。各個体の総走行距離と走行時間を、それぞれ疲労距離および疲労時間として記録します。オゾンに曝露させた動物の肺機能を測定するため、麻酔をかけたマウスをコンピューター制御の人工呼吸器に接続した全身プレチスモグラフ（body plethysmograph）に配置します。圧制御換気を用い、規則的な呼吸パターンが得られ、かつ各呼吸サイクルで完全な呼気が得られるまで、麻酔下にある動物に平均呼吸数150回/分の呼吸を導入します。その後、呼気開始から25、50、および75ミリ秒における強制呼気量を記録し、不適切であった操作は除外します。終末麻酔後、直径1 mmの気管内チューブを用い、1回につき1 mLのPBSで動物を2回洗浄します。回収した各動物からの洗浄液をまとめて遠心分離し、上清を液体窒素で回収します。ペレットを新鮮なPBSに再懸濁して計数し、マウス1匹につき、顕微鏡スライド、フィルターカード、および漏斗を備えたホルダーを2つ用意します。再懸濁した細胞を各漏斗に約100〜125 µLずつ加えます。ホルダーをサイトスピン遠心機にセットし、細胞をスライドガラス上に遠心分離して固定します。その後、製造元の指示に従って適切な染色液を細胞に適用し、400倍の倍率でマウス1匹あたり200個の細胞をカウントします。心臓採血では、オゾン曝露動物から心穿刺により約500 microlitersの血液を採取します。その後、血液を氷上の1.5 milliliterチューブに入れます。氷上で30分間静置後、血液試料を遠心分離し、血清上清を新しいチューブに移して液体窒素で保存します。サンプルは後で解凍し、標準プロトコルに従ってELISAにより血清サイトカインの発現レベルを評価することができます。肺の形態計測分析を行うには、心臓サンプリング後、1匹目のマウスを仰臥位にします。次に、胸腔を開き、広頚筋と気管前筋を剥離して気管環を露出させます。心臓と肺を分離せずに、肺と気管を摘出します。次に、PE90ポリエチレンチューブを用いて、気管カテーテルを4% formaldehydeを含むシリンジに接続し、約200 microlitersのparaformaldehydeで肺を完全に膨らませます。その後、肺を10 millilitersの新鮮な4% formaldehydeを含む15 milliliterチューブに入れ、少なくとも4時間固定します。マイクロコンピュータ断層撮影（microCT）による評価の結果、オゾンに曝露したマウスは、周囲空気（アンビエントエア）に曝露した対照動物と比較して、全肺容量および低吸収域の割合が有意に大きいことが示されました。また、肺胞の拡大および平均線形切断（MLI）の増加により、肺気腫の表現型も認められました。プレチスモグラフを用いた肺機能評価では、オゾン曝露マウスで低下したすべてのパラメータが、慢性閉塞性肺疾患（COPD）患者に見られる典型的な肺機能不全と一致していました。さらに、オゾン曝露は運動耐性試験における疲労時間および疲労距離を有意に減少させます。また、オゾン処理した動物では、マクロファージや好中球を含む炎症細胞が有意に増加し、IL-10が有意に減少、IL-1 betaおよびTNF alphaが増加することが示されており、このオゾン曝露モデルがヒトの慢性閉塞性肺疾患（COPD）様症状を再現していることが証明されています。C57 BR6マウスなどの他のマウス系統でこの手順を実施することにより、同様のOEモデルを作製することが可能です。本手法の開発により、肺疾患分野の研究者がCOPDの根底にあるメカニズムを探索するための道が開かれます。パラホルムアルデヒドの取り扱いは危険を伴う可能性があるため、この試薬を使用する際は、常に手袋や保護メガネの着用、およびドラフトチャンバー内での操作などの予防措置を講じることを忘れないでください。

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SCIREQ株式会社、モントリオール、QC、現在のプロトコルでは、呼吸器系の力学の測定と同様に強制振動技術を使用してマウスで吸入メサコリンに対する気道反応性の評価（flexiVentを実行するために必要な手順の詳細なステップバイステップの説明を提供しています、カナダ）。...

強制振動法を用いたマウスにおける呼吸器系の力学の評価

我々は、マウスモデルにおいて、長期持続性の慢性緑膿菌気道感染を確立する寒天ビーズ法を記載している。...

長期的な慢性<em&gt;緑膿菌</emマウスにおける&gt;気道感染

このプロトコルの目標は、COPDのマウスモデルにおける慢性肺の病状を定量化する自動化された方法を提供することです。このプロトコルには、マウスをタバコの煙(CS)にさらすこと、肺機能の測定、肺を膨らませること、および形態測定法を使用してマウスの肺気腫と小さな気道リモデリングを測定することが含まれます。...

肺気腫とタバコ煙曝露マウスにおける末梢気道リモデリングの自動測定

ここに提示される肺固定のための有用なプロトコルは、肺気腫のマウスモデルからの肺標本の組織学的評価のための安定した状態を作成する。このモデルの主な利点は肺の崩壊またはデフレなしで同じ一定した圧力の多くの肺を固定できることである。...

マウスにおける気腫の評価に対する一定圧力下での肺固定

ここで肺式を評価する方法について述べる予測される miRNAs...

肺のマイクロ Rna 発情周期にわたってプロファイリングのオゾン暴露マウスの

この原稿は、大気汚染物質であるオゾンへの曝露が生体内の肺胞マクロファージエフェロサイト症を損なうかどうかを決定するためのプロトコルを記述する。このプロトコルは、一般的に使用される試薬および技術を利用し、肺胞マクロファージエフェロサイトシスへの影響を決定するために肺損傷の複数のモデルに適応することができる。...

オゾン暴露後の肺胞マクロファージエフェロサイトーシスの生体内評価

オゾンと細菌性内毒素を組み合わせたマウスは、好中球を含む広域細胞死を示す。細胞骨格ラメリポディアの破壊、気管支-肺胞洗浄における複雑なV...

オゾンとLPS誘発マウス急性肺損傷時の肺細胞適応の可視化

ブレオマイシンを用いた肺線維症の様々な動物モデルが確立されており、肺線維症の病態解明や新たな創薬標的の探索が進められています。しかし、肺組織を標的とする肺線維症モデルの多くは、薬剤の投与にばらつきがあります。ここでは、鼻ブレオマイシン噴霧によって誘発される均一な肺線維症のモデルを提案します。...

鼻ブレオマイシン噴霧により誘発される肺線維症のマウスモデル

このプロトコルは鼻の点滴によって無水ケイ酸懸濁液への反復的な露出によって珪肺症のマウス...

結晶性シリカダストの反復吸入による珪肺症マウスモデル

このプロトコルは、ブレオマイシンの中咽頭反復投与によりマウスに肺線維症を誘発する方法を描写し、特発性肺線維症のものによく似た病理学的特徴をもたらします。...

特発性肺線維症の洗練されたマウスモデル

ここでは、気管 を通じて 投与されたエアロゾル化されたブレオマイシンを用いてマウスの肺線維症をモデル化するプロトコルを紹介します。この最適化された方法は、手術的切開を行わずに均一で定量的かつ正確な投与を可能にし、ブレオマイシン誘発性線維症の再現性と信頼性を高めています。...

肺線維症の再現可能かつ低侵襲マウスモデルのための洗練されたエアロゾルを用いた気管内ブレオマイシン投与法

学ぶ繰り返しオゾン暴露によるマウスの慢性閉塞性肺疾患モデル生成法。6〜8週間で作製でき、COPD患者の病理過程を再現し、薬剤スクリーニングや病態メカニズム解明に有用な新規動物モデルです。

繰り返しオゾン暴露によるマウスの慢性閉塞性肺疾患モデルの生成

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