マウスにおける気腫の評価に対する一定圧力下での肺固定

固定装置内の一定の圧力は、軽度のタバコの煙誘発肺気腫の評価に適した組織学的肺検体を生成する合理的に膨張した状態で肺を維持する。このモデルの主な利点は、肺の崩壊やデフレなしに同じ一定の圧力を使用して、同時に多くの肺を固定できることです。この手順を実演するのが、研究室の大学院生である荒野直子です。

反射運動に対する応答性の欠如を確認した後、マウスの内側線に沿って皮膚および筋肉組織を切開し、頭蓋領域を目指し、横方向に切断してより広い作業空間を作り出す。ダイヤフラム層を露出させた後、組織を鉗子で穿刺し、胸腔を開く。胸部領域を切り取り、肺と心臓を視覚化します。

左心房と右心室を切ります。灌流ポンプに接続された24ゲージカニューレを右心室領域に挿入し、肺動脈に到達するまでカニューレを頭蓋領域に向けます。次に、ポンプをオンにし、肺組織のすべてが白色に変わるまで1時間PBSの約200ミリリットルで組織を浸透させます。

灌流の終わりに気管、肺および心臓を取り巻く結合組織を切断し、右の主気管支を結ぶために縫合糸を使用する。次に、右肺の個々のローブをすべて収穫し、左肺の心臓とローブを適切な固定剤を含む個々の10ミリリットルの注射器に入れる。肺を膨らませて、注射器から肺を取り除くために、シリンジに真空を作り出すプランジャーを引き込みます。

気管に20ゲージカニューレを挿入し、縫合糸を使用してカニューレを所定の位置に固定します。固定剤で満たされた1ミリリットルのシリンジをカニューレに接続し、肺に追加の固定剤を充填して漏れをチェックします。固定中に肺の検体が肺板から外れないように、挿入部位が確保されていることを確認してください。

次に、組織を肺固定圧装置に移し、サンプルを取り除き、固定期間の終わりに結び目で気管を引き離します。肺サンプルが挿入される肺固定圧力装置の下部成分は、3方向のストップコックでホルマリンフローの先端に20ゲージカニューレを介して接続される。圧力は、下側と上の区画の間の固定剤の異なる表面レベルから生成されます。

圧力差は水の25センチメートルですが、高さ調整ノブは、水の25〜30センチメートルの間に圧力を調整するために使用することができます。ポンプは下側と上側の容器をつなぎ、固定面高さの25センチメートル差を保ち、薬剤の流れを導く。48時間固定後、周囲の空気にさらされたSMP30ノックアウトマウスからの肺は、著しい空域拡大を示さない。

しかし、慢性タバコの煙にさらされたSMP30ノックアウトマウスでは、有意な空域の拡大および歯槽壁破壊が観察される。さらに、肺検体の平均線形インターセプトおよび破壊指数は、空気暴露された動物よりも、露出したSMP30ノックアウトマウスの煙において有意に大きい。私たちの研究室は10%ホルマリンを使用していますが、研究者は実験ニーズに応じて他の固定剤を使用することができます。

我々は実証された固定システムを使用して報告したように肺のサンプルは形態評価のための様々なマウス肺気腫モデルから採取することができる。固定剤は危険な場合がありますので、常に適切な人の保護具を着用し、換気の良い部屋で作業します。