オプションの 2 D 加工で合理化された 3 D 小脳分化プロトコル
December 9th, 2017
簡易 3 D 識別定義されているプロトコルを使用して hPSCs の媒体と初期の上皮細胞内構造を有する細胞集塊を生成できると関連付けられている小脳のマーカーだけでなく、オプションの肯定的な成長因子を減少機能的なニューロンを生成する単分子膜として分化細胞の 2 D 変更。
これらの分化培養の全体的な目標は、2Dまたは3D環境で小脳細胞系譜を生成することです。これらの方法は、患者由来の幹細胞を使用して、小児脳障害の根底にある新しい開発や疾患メカニズムに関する基本的な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、起動とメンテナンスが簡単で、要素が少なく、より複雑なニューラルプロトコルをテストするためのベースとして使用できることです。手順を実演するのは、私の研究室の技術者であるリサです。hPSCの通過の修正された方法G法で区別を設定するには、必要な量の神経維持培地を滅菌チューブに移し、ミリリットルあたり4ナノグラムのFGF2と10マイクロモルの岩石阻害剤を補充します。次に、中チューブを室温に保つか、37°Cのウォーターバスに入れます
概要
この記事では、定義された培地と減少した成長因子を利用する、ヒトの多能性幹細胞（hPSCs）の簡素化された3D分化プロトコルを紹介します。このプロトコルは、小脳の発達に関連する初期の神経上皮構造とマーカーを持つ細胞塊を生成することができます。
主要な研究構成要素
科学の分野
- 神経科学
- 幹細胞生物学
- 細胞分化
背景
- 小脳細胞系統の理解は、小児期の脳疾患の研究に不可欠です。
- 患者由来の幹細胞は、疾患メカニズムの洞察を提供できます。
- このプロトコルは分化プロセスを簡素化することを目指しています。
- 2Dおよび3Dの培養環境の両方を可能にします。
研究目的
- 小脳細胞タイプを生成するための簡単な方法を開発すること。
- 小児期の脳疾患に関する研究を促進すること。
- より複雑な神経分化プロトコルのための基礎を提供すること。
使用した方法
- 定義された神経維持培地の利用。
- FGF2とROCK阻害剤の補充。
- hPSCsの2Dおよび3D形式での培養。
- 小脳系統への分化のモニタリング。
主な結果
- 神経上皮構造を持つ細胞塊の成功的な生成。
- 分化した細胞における小脳関連マーカーの発現。
- プロトコルの単純さと有効性の実証。
- 複雑な神経研究へのさらなる応用の可能性。
結論
- このプロトコルは、小脳分化のための信頼できる方法を提供します。
- 神経科学の様々な研究応用に適応できます。
- 将来の研究はこの基盤の上に高度な神経研究を構築できます。
よくある質問
Chapters in this video
0:05
Title
0:44
3D "Organoid" Differentiation
4:32
Alternative 2D Differentiation Culture
8:28
Results: 3D Products Exhibit Markers and Structures of Early Neuroepithelium, and 2D Products Exhibit Cerebellar Markers and Functional Neuronal Activity
9:48
Conclusion
