Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

Yan Yan; Chi-Chih Chang; Morten  T. Ven&#248;; Colin  R. Mothershead; Junyi Su; J&#248;rgen Kjems

doi:10.3791/58655

JoVE Journal
Genetics

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JoVE Journal Genetics

Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

分離、シーケンスおよびヒト間葉系幹細胞からの細胞のマイクロ Rna を分析

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10:55 min

March 8, 2019

DOI: 10.3791/58655-v

Yan Yan*¹, Chi-Chih Chang*¹, Morten T. Venø^1,2, Colin R. Mothershead¹, Junyi Su¹, Jørgen Kjems^1,2

¹The Interdisciplinary Nanoscience Centre,Aarhus University, ²Department of Molecular Biology and Genetics,Aarhus University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルは、小さな RNA ライブラリーの構築と次世代シーケンシングのための細胞培養媒体からマイクロ Rna は細胞を浄化する方法を示します。さまざまな品質管理のチェックポイントは、exRNAs のような低入力サンプルを操作するときに期待するものを理解する読者を許可するように記述されています。

これは、細胞から細胞外小胞に由来する小さなRNAの配列決定における技術的な問題に対処する最初の論文です。NGS サンプルには、厳格な準備と品質管理が必要です。EVの性質上、EVサンプルのQCプロセスは標準から逸脱しています。

このプロトコルの利点は、初めてのユーザのためのQCステップです。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の研究助手であるJunyi Suです。まず、5つのT175フラスコに新鮮なMSC培地で2,000細胞/平方センチメートルのヒト間葉系幹細胞をプレートします。

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