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DOI: 10.3791/64268-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study describes a method for measuring absolute DNA densities within adherent cell nuclei, utilizing Voronoi tessellation of single-molecule localization microscopy (SMLM) data. This approach enables the investigation of spatial constraints in chromatin structures, linking genetic information with cell cycle stages.
本プロトコルは、単一分子局在顕微鏡データ、既知の体積、ゲノムサイズ、および細胞周期段階のボロノイテッセレーションを使用して、接着細胞核内の絶対DNA密度を測定する方法を説明する。
本法では、細胞核の絶対DNA密度測定により、翻訳後のヒストン修飾によってのみ特徴付けられるクロマチン構造の空間的制約を調査することができます。ボロノイテッセレーションとSMLMを組み合わせることで、平方マイクロメートルあたりの塩基対でDNAの絶対密度推定が可能になります。必要な唯一のアプリオリな知識は、測定された細胞核の総DNA含有量です。
今後の実験では、絶対密度差がエピジェネティック修飾の免疫蛍光やHi-Cデータなど、他の方法からの生物学的情報と相関するかどうかを調査することは興味深いでしょう。まず、事前に記録された単一の画像を並べて、スキャンされた領域を再構築します。CellProfiler を開き、パイプライン cellcycleanalysis.cpproj をロードします。
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