シングルステップおよび半自動ヘパリンアフィニティークロマトグラフィープロトコルによるアデノ随伴ウイルスベクターの単離

この原稿では、最適化されたヘパリンベースのアフィニティークロマトグラフィー法を使用して、アデノ随伴ウイルスベクターを生成および精製するための詳細なプロトコルについて説明します。シンプルでスケーラブル、かつ費用対効果の高いアプローチを提供し、超遠心分離の必要性を排除します。得られたベクターは、高い純度と生物学的活性を示し、前臨床試験でその価値を証明しています。

この研究では、前臨床試験でその価値を証明できるモザイクアデノ随伴ウイルスベクターの製造、精製、および特性評価のための改良されたプロトコルを開発する予定です。安定した産生細胞株を確立するための努力にもかかわらず、哺乳類細胞における一過性トランスフェクションは、依然としてAAV産生の主要なワークフローです。次に、AAVは、超高速密度勾配遠心分離、またはウイルス粒子の生化学的特性に依存するクロマトグラフィー技術によって精製されます。

AAVを精製するために一般的に使用される方法は、塩化セシウム、またはヨージキサノール密度勾配超遠心分離を利用します。それらの利点にもかかわらず、それらにはいくつかの制限があります。時間がかかり、スケーラビリティが限られており、純度の低いベクターに結果をもたらすことがよくあります。

現在、これらの制約を克服するために、何人かの研究者がクロマトグラフィー技術に注意を向けています。AAV2のヘパリン結合能に基づくモザイクrAAVの生成のための段階的なプロトコルについて説明します。この方法は、高純度で生物学的に活性なrAAVを6日間で使用できるようにし、前臨床試験用のrAAVを生成するための半自動化され、スケーラブルで費用対効果の高い戦略であることを示しています。

モザイクrAAVの生成に対するこの方法の適用性が実証されたので、生産細胞株を確立することにより、生産システムを微調整して、より優れたスケーラビリティと費用対効果を達成できるようになりました。さらに、2番目の研磨精製ステップを含めることにより、空の粒子を除去することを目指しています。