Name: Echinococcus granulosusからの小さな細胞外小胞の単離と樹状細胞の取り込み (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: 学ぶEchinococcus granulosus由来細胞外小胞の単離と樹状細胞への取り込み。動的光散乱や電子顕微鏡で小胞を解析し、骨髄由来樹状細胞による取り込みと免疫調節効果を評価する。寄生虫と宿主の相互作用理解に貢献する。

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL</td>チューブ <td>Henso</td><td>N14059</td><td></td></tr><tr><td>24ウェルプレート&nbsp;</td><td>JetBiofil</td><td>CAP011024</td><td>ポリスチレン、平底、滅菌</td></tr><tr><td>6 ウェル プレート&nbsp;&nbsp;</td><td>変装メディカル株式会社</td><td>N14221</td><td>フラット形状の底、PS 素材、滅菌</td></tr><tr><td>70 mm ポリプロピレン セル ストレーナー</td><td>Biologix Group Limited</td><td>15-1070</td><td>滅菌</td></tr>アル<tr><td>シアン ブルー 8 GX 染料&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-214517B</td><td></td></tr><tr><td>自動 CO2 インキュベーター</td><td>Nuarire</td><td>UN-5100E/G DH</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>ウィーナー ラボ</td><td>1443151</td><td></td></tr><tr><td>CD11c モノクローナル抗体 - PECy5&nbsp;&nbsp;100 & マイクロ;g</td><td>eBioscience</td><td>15-0114-82</td><td>クローン (N418)</td></tr><tr><td>CD40 モノクローナル抗体-FITC 100 & micro;g</td><td>eBioscience</td><td>11-0402-82</td><td>クローン (HM40-3)</td></tr><tr><td>CD80 モノクローナル抗体-APC 100 &g</td><td>eBioscience</td><td>17-0801-82</td><td>クローン (16-10A-1)</td></tr><tr><td>CD86 モノクローナル抗体-FITC&nbsp; 100 & マイクロ;g</td><td>eBioscience</td><td>11-0862-82</td><td>クローン (GL-1)</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>Thermo Scientific</td><td>IEC CL31R マルチスピード</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Nikon</td><td>Nikon 共焦点顕微鏡 C1</td><td></td></tr><tr><td>円錐形チューブ 15 mL 直径 17 x 120 mm</td><td>Citotest</td><td>4610-1865</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>107K4034</td><td></td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td>Merk</td><td>1.78343</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド&nbsp;</td><td>Anedra</td><td>6646</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 500 mL</td><td>シグマ アルドリッチ&nbsp;&nbsp;</td><td>12352207</td><td></td></tr><tr><td>フローサイトメトリーシステム</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCanto&trade;II</td><td></td></tr><tr><td>折り畳まれた毛細血管ゼータ細胞&nbsp;</td><td>Malvern Panalytical</td><td>DTS1070</td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン硫酸塩</td><td>Sigma</td><td>G1264</td><td></td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド溶液</td><td>Fluka</td><td>49630</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco</td><td>11344041</td><td></td></tr><tr><td>Hypodermic &nbsp; 針 21 G x 1 "25/8</td><td>Weigao</td><td></td><td>滅菌</td></tr><tr><td>皮下 &nbsp; 針 25 G x 5/8 "</td><td>Weigao</td><td></td><td>不妊</td></tr><tr><td>倒立顕微鏡&nbsp;</td><td>ライカ</td><td>DMIL LEDフルオ&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>ホリデイ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リポ多糖類 &nbsp; グラム</td>陰性菌 大腸菌 K12 由来の <td>5 mg Invitrogen</td><td>tlrl-rslps</td><td>LPS 。TLR2/4 アゴニスト</td></tr><tr><td>ロペラミド塩酸塩</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5.08162</td><td></td></tr><tr><td>ミディアム 199&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11150059</td><td></td></tr><tr><td>メチレン ブルー</td><td>アネドラ</td><td>6337</td><td></td></tr><tr><td>MHC クラス I (H2kb) モノクローナル抗体-PE 100 &g</td><td>eBioscience</td><td>12-5958-82</td><td>クローン (AF6-88.5.5.3)</td></tr><tr><td>MHC クラス II (IA/IE) モノクローナル抗体 - FITC&nbsp; 100 & マイクロ;g</td><td>eBioscience</td><td>11-5321-82</td><td>クローン (M5/114.15.2)</td></tr> <tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>CX31</td><td></td></tr><tr><td>マウス組換えマウス Flt3L。</td><td>PrepoTech</td><td>250-31L-10UG</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-One</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>寒天 Scientific</td><td>R1018</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン G ナトリウム塩</td><td>Sigma</td><td>P3032-10MU</td><td></td></tr><tr><td>PKH26</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI26</td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム リン酸塩一塩基</td><td>性ティンパー</td><td></td> リン<td>酸緩衝用生理食塩水 (PBS)</td></tr><tr><td>RBC 溶解バッファー 100 mL</td><td>ロシュ</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 培地&nbsp;1640 1x 500 mL</td><td>シグマ アルドリッチ (Gibco)</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>カコジル酸ナトリウム&nbsp;&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0250</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>Anedra</td><td>7647-14-5</td> リン<td>酸緩衝生理食塩水 (PBS) リン</td></tr>酸<tr><td>二塩基性ナトリウム (無水) p. a.</td><td>Biopack</td><td>1639.07</td><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 用</td></tr> <tr><td>ストレプトマイシン硫酸塩</td><td>シグマ</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 10 mL</td><td>ブレーメン</td><td></td><td>滅菌厚</td></tr><tr><td>肉ポリカーボネートチューブ</td><td>ベックマンコールター</td><td></td><td>13 x 55 mm、公称容量 4 mL</td></tr><tr><td>透過型電子顕微鏡</td><td>Jeol</td><td>JEOL JSM 100CX II</td><td></td></tr><tr><td>超遠心分離機</td><td>ベックマン</td><td>オプティマLE-80k&nbsp;</td><td>90Tiローター</td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>リッチモンド</td><td></td><td></td></tr>ゼー<tr><td>タサイザーナノ&nbsp;</td><td>マルバーン&nbsp;</td><td>Nano ZSizer-ZEN3600</td><td>動的光散乱とゼータ電位測定を実行するには</td></tr></tbody></table>

echinococcus granulosusからの小さな細胞外小胞の単離と樹状細胞の取り込み

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus

図1に、E. granulosus幼虫期の純粋培養を維持するための主なステップ、sEVの単離と特性評価、およびマウス樹状細胞によるそれらの取り込みをまとめたフローチャートが示されています。E. granulosus protoscolecesおよびmetacestodesから高いsEV産生を達成するために、以前に実験室で開発されたin vitro培養法を採用して、研究対象の寄生虫の生存と代謝恒常性を最大化しました(図2)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67559/67559fig1v2.jpg"> 
図1: E. granulosus sEVおよびBMDCを取得するための実験手順の概要。 </str...

Echinococcus granulosusからの小さな細胞外小胞の単離と樹状細胞の取り込み

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In ...

isolation-dendritic-cell-uptake-small-extracellular-vesicles-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

出典: ワトソン、DC、 et.al。大腸菌と他の細菌からの細胞外小胞のスケーラブルな単離と精製 J. Vis. 経験。 (2021年)このビデオは、遺伝子組み換え細菌の外膜に由来する細胞外小胞(EV)の単離と濃縮を示しています。このプロセスには、細菌を培養して EV...

細菌からの外膜由来細胞外小胞の単離と濃縮

このビデオでは、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)に基づいて、脳の免疫細胞であるミクログリアに由来する細胞外小胞またはEVを分離する方法について説明しています。EVは、免疫応答を調節するメディエーターを送達する分子貨物として機能します。したがって、単離されたEVは、ニューロン免疫応答中のミクログリア-ニューロンクロストークを研究するためのin...

SEC法によるミクログリア由来の細胞外小胞の単離:ミクログリア馴化培養培地から細胞外小胞を単離する技術

パイエル板の細胞の特定の亜集団（PPS）、腸管関連リンパ組織の主要な誘導部位の免疫学的機能を理解する上で関心が高まっている。ここでは、フローサイトメトリー解析と免疫染色のためのPPの凍結切片のための単一細胞調製物を調製するためのPPのパラレルプロトコルの概要を説明します。...

マウスのパイエル板のリンパ球や樹状細胞を単離し、免疫染色

このプロトコルは、濃度の単一細胞懸濁液を遠心分離し、最後に、磁気および/または目的の細胞集団のFACS選別に続いて、組織の酵素消化の異なるステップを介して、ヒト胸腺から抗原提示細胞を単離する方法を詳述する。...

ヒト胸腺からの骨髄樹状細胞と上皮細胞の単離

ここで分離し、その表現型および機能特性評価のための人間の女性の生殖器官の別の解剖学的なコンパートメントから樹状細胞を浄化する手法について述べる。このメソッドは、他の免疫細胞やその他の粘膜組織から樹状細胞を分離する合わせることができます。...

人間の女性の生殖器官から樹状細胞の表現型および機能研究の分離

ここでは、アダルト住血吸虫から培養体外細胞小胞 (Ev) の分離を記述するプロトコルを提案する.

分離と大人住血吸虫から細胞外小胞のキャラクタリゼーション

本報告書は、ミクログリアまたは血液マクロファージからの細胞外小胞(EV)単離に関する時系列的要件を強調している。ミクログリア由来EVは神経突起の伸長因子として評価され、血液マクロファージ由来EVはインビトロアッセイにおけるC6グリオーマ細胞浸潤の制御で研究された。目標は、これらのEV機能を特定の微小環境における免疫メディエーターとして理解することです。...

細胞外小胞由来免疫細胞由来の特徴と細胞環境への機能的影響の研究

我々は、第3世代レンチウイルスベクターを用いた エキノコッカス顆粒症...

エキノコッカス顆粒症のストロビレー化形態の一過性形質導入

細菌は、生理活性のある生体分子を運ぶナノメートルサイズの細胞外小胞(EV)を分泌します。EVの研究は、それらの生合成、微生物-微生物および宿主-微生物の相互作用および疾患における役割、ならびにそれらの潜在的な治療用途を理解することに焦点を当てています。EV研究の標準化を促進するために、さまざまな細菌からEVをスケーラブルに分離するためのワークフローが提示されます。...

大腸菌およびその他の細菌からの細胞外小胞のスケーラブルな単離および精製(英語)

提案されたプロトコルには、細胞培養上清から細胞外小胞を単離する際にエンドトキシンによる汚染を回避する方法と、それらを適切に評価する方法に関するガイドラインが含まれています。...

がん細胞株由来の低エンドトキシン含量細胞外小胞の単離

学ぶEchinococcus granulosus由来細胞外小胞の単離と樹状細胞への取り込み。動的光散乱や電子顕微鏡で小胞を解析し、骨髄由来樹状細胞による取り込みと免疫調節効果を評価する。寄生虫と宿主の相互作用理解に貢献する。

Echinococcus granulosusからの小さな細胞外小胞の単離と樹状細胞の取り込み

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