Name: ヒトCD14+ 単球から寛容性樹状細胞を作製するための免疫調節剤を試験するための簡便で効率的な方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: 学ぶヒトCD14⁺単球から寛容性樹状細胞を作製する効率的な方法。免疫調節剤のスクリーニングとフローサイトメトリーによる細胞解析を用い、自己免疫疾患や移植治療への応用可能性を評価する。

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<ol><li>Banchereau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annu Rev Immunol. 18 (1), 767-811 (2000).</li>
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<li>Nakayama, M., Michels, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+antigen+specificity+of+human+islet+infiltrating+T+cells+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Determining antigen specificity of human islet infiltrating T cells in type 1 diabetes.</a> Front Immunol. 10, 365(2019).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.1-10 & マイクロ;L ろ過ピペットチップ</td><td>VWR</td><td>76322-158</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>1.5 mL 遠心分離管</td><td>VWR</td><td>77508-358</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>10 mL 血清学的ピペット</td><td>VWR</td><td>414004-267</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>100-1000 &L ろ過ピペットチップ</td><td>VWR</td><td>76322-164</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>15 mL コニカルチューブ</td><td>VWR</td><td>77508-212</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>20-200 &L フィルター付きピペットチップ</td><td>VWR</td><td>76322-160</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>2-メルカプトエタノール</td><td>MP 生物医学</td><td>194834</td><td>T 細胞培養</td></tr><tr><td>50 mL コニカルチューブ</td><td>VWR</td><td>21008-736</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>60 x 15 mm ディッシュ、Nunclon Delta</td><td>Thermo Fischer</td><td>150326</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>96 ウェル コニカル (V) 底板、未処理表面</td><td>サーモフィッシャー</td><td>277143</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>96ウェル フラットボトム</td>プレート <td>サーモフィッシャー</td><td>161093</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>APC/シアニン7 抗ヒトCD272 (BTLA) 抗体</td><td>バイオレジェンド</td><td>344518</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>Attune NxT (赤/青レーザー、7チャンネル)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>A24863</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>BSA</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15260-037</td><td>一般セル培養</td></tr><tr><td>CD14 モノクローナル抗体 (61D3)、PE</td><td>サーモフィッシャー</td><td>12-0149-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD1c モノクローナル抗体 (L161)、PE-シアニン7</td><td>サーモフィッシャー</td><td>25-0015-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD209 (DC-SIGN) モノクローナル抗体 (eB-h209)、PerCP-シアニン5.5</td><td>サーモフィッシャー</td><td>45-2099-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD25 モノクローナル抗体 (CD25-4E3)、APC</td><td>サーモFischer</td><td>17-0257-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD274 (PD-L1、B7-H1) モノクローナル抗体 (MIH1)、PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-5983-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD4 モノクローナル抗体 (RPA-T4)、Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>53-0049-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD40 モノクローナル抗体 (5C3)、APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0409-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD40 モノクローナル抗体(5C3)、APC-eFluor 780</td><td>サーモフィッシャー</td><td>47-0409-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD69 モノクローナル抗体 (FN50)、PE</td><td>サーモフィッシャー</td><td>MA1-10276</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD86 モノクローナル抗体 (BU63)、FITC</td><td>サーモフィッシャー</td><td>MHCD8601</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>CD8a モノクローナル抗体 (RPA-T8)、PE-シアニン7</td><td>サーモフィッシャー</td><td>25-0088-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>円錐底(Vウェル)96ウェルプレート</td>サーモフィ<td>ッシャー2605</td>フロー<td>サイトメトリー</td><td></td></tr>極<tr><td>低温バイアル、2 mL</td>サー<td>モフィッシャー</td><td>430488</td><td>T細胞培養</td></tr>ジ<tr><td>メチルスルホキシド(DMSO)、シーケンシンググレード</td>サーモフィ<td>ッシャー20688</td><td></td>一般<td>細胞培養</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>サーモフィッシャー</td><td>14200166</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>EasySepヒト単球単離キット</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>19359</td><td>細胞分離</td></tr><tr><td>EasySep ヒト T 細胞分離キット</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>17951</td><td>細胞分離</td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>18000</td><td>細胞分離</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>サーモフィッシャー</td><td>AIM9260G</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>ファルコン 丸底ポリスチレンチューブ、5 mL</td><td>幹細胞技術</td><td>38025</td><td>細胞分離</td></tr><tr><td>Fc 受容体結合阻害剤 ポリクローナル抗体</td><td>サーモフィッシャー</td><td>14-9161-73</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>サーモフィッシャー</td><td>A5670701</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>固定可能な生存率色素 eFluor 780</td><td>サーモフィッシャー</td><td>65-0865-18</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>Foxp3 / 転写因子染色バッファーセット</td><td>サーモフィッシャー</td><td>00-5523-00</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>FOXP3 モノクローナル抗体 (PCH101)、PE-シアニン5.5</td><td>サーモフィッシャー</td><td>35-4776-42</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>サーモフィッシャー</td><td>14170-112</td><td>一般細胞培養</td></tr> 熱<tr><td>不活化ウシ胎児血清</td><td>サーモフィッシャー</td><td>A5670801</td><td>一般細胞培養</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15630106</td><td>moDC 細胞培養</td></tr><tr><td>HLA-DRモノクローナル抗体(L243)、Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>A51009</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>ヒトCD3/CD28/CD2 T細胞活性化因子</td><td>StemCell Technologies</td><td>10970</td><td>T細胞培養</td></tr> ヒ<tr><td>トGM-CSF組換えタンパク質</td><td>Thermo Fischer</td><td>300-03</td><td>moDC細胞培養</td></tr><tr><td>ヒトIL-10 ELISAキット、高感度</td><td>サーモフィッシャーBMS215-2HS</td><td></td><td>ELISAの</td></tr><tr><td>ヒトIL-4、動物性フリー組換えタンパク質</td><td>サーモフィッシャーAF-200-04moDC</td><td></td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>ヒトPBMC(新たに単離</td>)<td>UPenn HIC</td><td>N/A</td><td>細胞</td></tr><tr><td>ヒトTNFアルファELISAキット</td><td>サーモ</td>フィッシャーBMS223-4ELISA<td></td><td></td></tr><tr><td>光学顕微鏡(DMi1)</td><td>Lucia</td><td>391240</td>一般<td>細胞培養</td></tr>リ<tr><td>ポポリサッカリド(LPS)</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-eblps</td><td>moDC細胞培養LIVE</td></tr><tr><td>/DEAD固定可能な近赤外死細胞染色キット</td>サーモフィ<td>ッシャーL34975</td>フロー<td>サイトメ</td><td></td></tr><tr><td>トリーMEM非必須アミノ酸溶液(100x)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>11140050</td><td>T細胞培養</td></tr>ペ<tr><td>ニシリン-ストレプトマイシン(100x)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15140122</td><td>一般細胞培養</td></tr>ピ<tr><td>ペットコントローラーVWR</td><td></td><td>77575-370</td><td>一般細胞培養ラ</td></tr><tr><td>パマイシン、98+%</td><td>サーモフィ</td><td>ッシャーJ62473。MF</td><td>moDC 細胞培養</td></tr><tr><td>RPMI 1640 グルタマックス</td>付き <td>サーモフィッシャー</td><td>61870-036</td><td>一般細胞培養</td></tr>分離<tr><td>バッファー</td><td>幹細胞技術</td><td>20144</td><td>細胞分離</td></tr><tr><td>T 細胞刺激カクテル (500x)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>00-4970-93</td><td>T 細胞培養</td></tr><tr><td>UltraComp eBead Plus 補償ビーズ</td><td>サーモフィッシャー</td><td>01-3333-41</td><td>フローサイトメトリー</td></tr><tr><td>可変ピペットセット</td><td>Fischer Scientific</td><td>05-403-152</td><td>一般細胞培養</td></tr></tbody></table>

ヒトcd14+ 単球から寛容性樹状細胞を作製するための免疫調節剤を試験するための簡便で効率的な方法

A Simple and Efficient Method for Testing Immunomodulatory Agents for Generation of Tolerogenic Dendritic Cells from Human CD14+ Monocytes

我々は、ヒトPBMCのプロトコルを記載し、市販の磁気分離キットを用いてCD3+ T細胞とCD14+ 単球の両方を単離し、単球をGM-CSFおよびIL-4を用いてCD14-、HLA-DR+、CD141+、CD1c+ moDCに分化させ、それらを24時間処理し、抗CD3/CD28刺激を伴う自家T細胞と72時間共培養した。実験的な概略図を 図1に示します。
単球/T細胞の単離とmoDCの分化 私たちの最初の代表的な結果として、2億個のヒトPBMCがペンシルベニア大学のヒト免疫学コア(HIC)から1人の健康なドナーから購入され、プロトコルセクション1および2で説明されているように処理されました。1日目に採血し、HIC施設で標準的なFicoll分画を用いて単離した。T細胞と単球の単離には1億個のPBMCを使用し、それぞれ1,000万個のT細胞と300万個の単球を収...

ヒトCD14+ 単球から寛容性樹状細胞を作製するための免疫調節剤を試験するための簡便で効率的な方法

Tolerogenic dendritic cells (tolDCs) are a subset of dendritic cells (DCs) that are known to influence na&#239;ve T cells toward a regulatory T cell ...

a-simple-efficient-method-for-testing-immunomodulatory-agents-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

樹状細胞による二次リンパ器官における抗原提示がT細胞媒介免疫応答の開始に重要です。ここでは、マウス樹状細胞を骨髄由来の文化、活性化、および2光子イメージングのための標識を示す。...

2光子イメージングで使用するための骨髄由来マウス樹状細胞の世代

このビデオは、ヒト単球からの未熟、成熟、および寛容性の樹状細胞(DC)の生成を示しています。単球を成長因子やサイトカインとインキュベートすると、未成熟なDCが産生されます。免疫調節分子に応答して、未成熟DCは寛容性DCと成熟DCに分化します。...

単球からの未熟、成熟、および寛容性樹状細胞の作製

このビデオでは、免疫調節薬理剤を使用して樹状細胞(DC)を寛容性DC(TolDC)に変換する方法を示します。この変換は、CD4+...

樹状細胞とCD4+ T細胞との相互作用に対する免疫調節薬理剤の効果

未成熟樹状細胞は、免疫と耐性のバランスを調整するために、寛容性または成熟性樹状細胞に選択的に分化させることができます。この研究は、未熟な単球由来樹状細胞(moDC)、代謝表現型が異なるin...

代謝表現型が異なる未熟、熟女と寛容原性樹状細胞の生成

この研究では、in vitro樹状細胞(DC)を得るためのヒト単球単離の2つの異なる方法を比較しています。単球は接着によって選択されるか、磁気分離によって負に濃縮されます。単球の収量と生存率、および MDDC 生存率、増殖、および CD11c/CD14...

イメージングフローサイトメトリーによるヒト単球由来樹状細胞の特徴付け：二つの単球の分離プロトコルの比較

ここでは、ヒトの抗凝固血液の密度勾配遠心分離後に、末梢血単核細胞からの磁気ビーズ分離によって単球がどのように単球を単離されるかを示します。5日間のインキュベーション後、ヒト単球は未成熟樹状細胞に分化し、非臨床環境での実験手順の準備が整います。...

全血からのヒト単球由来樹状細胞の生成

ここでは、開発し免疫寛容樹状細胞 (TolDCs) の特徴し、その免疫療法の有用性を評価するためのプロトコルを提案する.

開発とマウス免疫寛容樹状細胞の機能解析

Transimmunization (TI) デバイスまたはプレートと関連するプロトコルは、実験的な設定で、体外光化学療法 (ECP) の主要な機能を再現するために開発されており、生理活性、チューナブル樹状の生産を可能にします癌免疫療法のための細胞...

生理学的免疫原性樹状細胞を生成するための新規プロトコル

ここでは、腸内ホーミング調節T細胞誘導の生体内増強のためのプロトコルを提示する。このプロトコルでは、樹状細胞は、活性ビタミンD(1,25−ジヒドロキシビタミンDまたは1,25[OH]2D)および活性ビタミンA(レチノイン酸またはRA)de...

腸内調節制御T細胞誘導の生体内増強

この方法論では、ウシ単球由来樹状細胞(MoDC)の生成と、牛の潜在的な獣医用ワクチンの開発中の抗原候補の in vitro...

ウシ単球由来樹状細胞を用いたワクチン免疫原性の決定

シアリダーゼ処理を使用して、単離された末梢血単核細胞(PBMC)から脱シアル化ヒト単球由来樹状細胞(mo-DC)を生成するための独自の包括的なプロトコルが提示されます。さらに、mo-DCの表現型および機能特性を評価し、シアリダーゼ処理がmo-DCの成熟レベルをどのように改善するかを評価する方法が記載されている。...

シアル化表現型の異なる単球由来樹状細胞の作製

学ぶヒトCD14⁺単球から寛容性樹状細胞を作製する効率的な方法。免疫調節剤のスクリーニングとフローサイトメトリーによる細胞解析を用い、自己免疫疾患や移植治療への応用可能性を評価する。

ヒトCD14⁺ 単球から寛容性樹状細胞を作製するための免疫調節剤を試験するための簡便で効率的な方法

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