생화학

투석은 확산에 기초한 분자를 분리하기 위한 생화학에 사용되는 일반적인 기술입니다. 이 절차에서, 반투과성 막은 크기에 따라 특정 분자의 움직임을 허용합니다. 이 방법은 탈염으로 알려진 버퍼의 제거에 적용될 수 있고, 또는 단백질 용액으로부터 완충 분자 또는 이온을 교환할 수 있다. 이 비디오는 일반적인 절차와 함께 투석의 원리를 다룹니다.  투석의 몇몇 응용은 초원심 분리 다음 그라데이션 시약의 제거, 막 단백질 추출 후 세제 제거, 용액 환경을 변경하여 단백질의 재구성을 포함하여 검토됩니다. 생화학 적 샘플은 일반적으로 다운스트림 처리 및 분석을 방해 할 수있는 높은 완충농도를 갖는다. 투석은 확산에 기초하여 분자를 분리하는 데 사용되는 일반적, 저렴한 기술입니다. 이 방법은 크기에 따라 특정 성분의 움직임을 허용하는 반 투과성 멤브레인을 사용합니다. 이 비디오는 투석의 개념, 일반적인 절차 및 생화학에 대한 사용의 일부를 보여줍니다. 투석의 가장 중요한 측면은 분자량...

효소 운동제는 살아있는 유기체에 필요한 화학 반응을 촉진하는 생체 분자인 효소의 촉매 효과를 설명합니다. 효소는 제품을 형성하기 위하여 기질로 불린 분자에 작동합니다. 효소 운동 매개 변수는 시간이 지남에 따라 기판 또는 제품 농도의 변화를 직간접적으로 측정하는 분석서를 통해 결정됩니다. 이 비디오는 효소 운동 (속도 방정식 포함)과 운동 모델의 기본 원칙을 다룰 것입니다. 효소 분석법을 지배하는 개념도 논의되고, 전형적인 색분석이 뒤따릅니다. 응용 분야섹션은 Förster 공명 에너지 전달(FRET) 분석을 통한 효소 분석, 환경내 세포외 효소 활성 특성화, 분자 프로브를 이용한 DNA 복구 운동학 조사에 대해 설명합니다. 효소는 삶에 필수적인 생화학 촉매입니다. 효소 분석은 효소반응의 운동 특성을 연구하는 데 사용되며, 효소의 촉매 효과를 해명합니다. 이 비디오는 효소 운동 및 분석제를 다루고, 일반적인 절차를 거치고, 일부 응용 프로그램을보여줍니다. 효소는 단백질, 또는...

매트릭스 보조 레이저 탈광 이온화(MALDI)는 생체 분자 의 분석에 이상적인 질량 분광법 이온 소스이다. 기체 상태에서 화합물을 이온화하는 대신, 샘플은 레이저에 의해 강타되는 매트릭스에 내장되어 있습니다. 매트릭스는 에너지의 대부분을 흡수; 이 에너지 중 일부는 시료로 옮겨져 결과적으로 이온화됩니다. 그런 다음 시료 이온은 비행 시간 분석기(TOF)를 사용하여 식별할 수 있습니다. 이 비디오는 매트릭스 선택과 TOF가 질량 대 충전 비율을 해명하는 데 사용되는 방법을 포함하여 MALDI-TOF의 원칙을 다룹니다. 이 절차는 MALDI 플레이트의 준비, 플레이트에 샘플의 하중 및 TOF 질량 분광계의 작동을 보여줍니다. 최종 섹션에서는 전세포 분석, 복잡한 생물학적 샘플의 특성화 및 전자 스프레이 이온화를 포함한 응용 분야와 변이가 표시됩니다. 매트릭스 보조 레이저 탈광 이온화 또는 MALDI는 생체 분자 의 분석에 이상적인 질량 분광법 이온 소스입니다. 대부분의 이온 소스는...

탠덤 질량 분석에서 관심있는 생체 분자는 생물학적 샘플에서 분리 된 다음 그 구성 및 서열을 해명하기 위해 여러 하위 단위로 단편화됩니다. 이것은 일련의 질량 분광기를 갖는 것으로 달성된다. 첫 번째 분광계는 특정 질량의 샘플을 이온화하고 충전 비율을 필터링합니다. 그런 다음 여과된 이온이 조각화되어 두 번째 질량 분광계로 전달되어 파편이 분석됩니다. 이 비디오는 질량 대 비율 선택 및 해리 방법을 포함하여 탠덤 질량 분석법의 원리를 소개합니다. 또한 충돌 유발 해리와 탠덤 질량 분광법을 사용하여 생화학 화합물을 분석하는 일반적인 절차가 도시되어 있다. 응용 분야는 선택 반응 모니터링, 단백질 번역 후 수정 의 결정 및 혈액에서 tacrolimus 수준의 검출을 다룹니다. 탠덤 질량 분광법은 생체 분자를 먼저 분리한 다음 화학 적 구성의 측면을 결정하기 위해 여러 단계의 질량 분광법을 연결합니다. 생체 분자는 크고 복잡한 구조를 가지고 있어 분자 구성을 결정하기가 어렵습니다.

단백질 결정화, 생체 분자의 고체 격자를 획득, 단백질 구조를 해명하고 단백질 기능의 연구를 가능하게. 결정화는 pH, 온도, 이온 강도 및 단백질 농도를 포함하여 많은 요인의 조합에서 정제된 단백질을 건조하는 것을 포함합니다. 일단 결정이 얻어지면, 단백질 구조는 전자 밀도 모델의 엑스레이 회절 및 계산에 의해 해명될 수 있다. 이 비디오는 단백질 결정화를 소개하고 일반적인 절차를 보여줍니다. 단백질 발현 및 정제, 결정화 및 엑스레이 회절은 절차에서 덮여 있습니다. 단백질 결정화의 응용 은 실리코 약물 설계, 결합 부위 결정 및 막 단백질 구조 분석에 포함됩니다. 단백질 결정화는 단백질의 격자 고체 형태를 얻는 과정입니다. 이 결정은 단백질 기능의 연구 결과에 도움을 주며 구조 생물학자들에게 특히 중요합니다. 질량 사양 또는 SDS-PAGE와 같은 다른 기술은 단백질의 1차원 구조에 대한 정보만 제공할 수 있습니다. 단백질 결정화는 재조합 단백질 발현 및 엑스레이 회절의...

생화학에서, 크롬토그래피 계 정제 방법은 복합 혼합물로부터 화합물을 분리하기 위해 사용된다. 생화학자에 의해 일반적으로 이용되는 2개의 그 같은 방법은 크기 배제 크로마토그래피 및 친화성 크로마토그래피입니다. 크기 배제 크로마토그래피에서 다공성 구슬로 포장된 컬럼은 크기에 따라 혼합물의 구성 요소를 분리합니다. 한편, 친화성 크로마토그래피는 표적 특이적 리간드를 포함하는 고정 상으로 구성된 컬럼을 사용하여 생체 분자의 보다 구체적인 분리를 허용한다. 이 비디오는 크기 배제 및 친화성 크로마토그래피뿐만 아니라 이를 제어하는 개념에 대한 소개 역할을 합니다. 고정금속 친화성 크로마토그래피에 의한 히스티딘 태그 단백질의 정제를 위한 단계별 절차가 설명된다. 생화학 및 생의학 연구에서 이러한 크로마토그래피 방법을 모두 위한 응용 프로그램도 프로파일화되어 있습니다. "크로마토그래피"는 복잡한 혼합물로부터 성분을 분리하는 데 사용되는 광범위한 방법을 말하며, 생체 분자의 특성 및 활동이...

2차원 겔 전기포진(2DGE)은 혼합물로부터 수천 개의 생체 분자를 해결할 수 있는 기술이다. 이 기술은 함께 결합 된 두 가지 분리 방법을 포함한다: 등전기 초점 (IEF) 및 나트륨 도데실 황산염 폴리 아크라이아미드 젤 전기 포근 (SDS-PAGE). 이것은 물리적으로 그들의 등전 점 (전기 화학 적 속성) 및 그들의 분자 량에 의해 젤의 두 축에 걸쳐 화합물을 분리합니다. 이 비디오에서 절차는 2DGE의 주요 개념과 복잡한 단백질 용액의 조성을 특성화하기위한 일반적인 절차를 다룹니다. 이 기술의 세 가지 예는 질병 개시 및 진행을 위한 바이오마커 검출, 환자에서의 모니터링 치료, 번역 후 변형(PTM) 다음 단백질 의 연구를 포함하여 응용 분야에서 도시된다. 2차원 또는 2D, 겔 전기전수는 단일 혼합물에서 수천 개의 단백질을 분리할 수 있는 두 가지 분리 방법을 활용하는 기술이다. 기술 중 하나, SDS-PAGE 또는 나트륨 도데딜 황산 폴리 아크라이알라미드 젤 전기...

대사 라벨링은 세포에서 발생하는 생화학적 변형 및 수정을 조사하는 데 사용됩니다. 이것은 자연 생체 분자의 구조를 모방하는 화학 유사체를 사용하여 달성됩니다. 세포는 내인성 생화학 공정에서 유사체를 활용하여 라벨이 부착된 화합물을 생산합니다. 라벨은 검출 및 친화성 태그의 통합을 허용, 다음 다른 생화학 적 분석 기술을 사용하여 신진 대사 경로를 해명하는 데 사용할 수 있습니다, SDS 페이지 와 NMR 등. 이 비디오는 신진 대사 라벨링의 개념을 소개하고 두 가지 일반적인 절차를 보여줍니다.  첫 번째는 단백질의 인산화를 특성화하기 위해 동위원소 라벨링을 사용합니다. 두 번째는 신진 대사 라벨링의 세 가지 응용 프로그램 내에서 단백질 단백질 상호 작용을 특성화하는 광반응 라벨을 커버합니다: 식물 물질 라벨링, 운동학을 측정하기 위해 RNA를 라벨링 및 배아 개발시 글리칸 라벨링. 신진 대사 라벨은 세포의 기계를 조사하는 데 사용됩니다. 이것은 발생하는 생화학적 변형 및 수정을...

전기 전광 이동성 이동 분석법 (EMSA)은 단백질과 핵산 사이의 결합을 해명하는 데 사용되는 생화학 적 절차입니다. 이 분석에서 방사성 표지 핵산 및 테스트 단백질이 혼합된다. 결합은 질량, 전하 및 변형에 기초한 구성요소를 분리하는 젤 전기전이를 통해 결정됩니다. 이 비디오는 EMSA의 개념과 겔 및 단백질 제제, 결합, 전기 전동 및 검출을 포함한 일반적인 절차를 보여줍니다. 이 비디오에서 다루는 응용 프로그램은 크로마틴 리모델링 효소의 분석, 이중 자극을 통합 수정 된 EMSA, 세균 반응 조절기의 결합 사이트의 연구를 포함한다. EMSA, 전기 이동성 이동 분석, 또한 젤 시프트 분석으로 알려진, 다재 다능하고 민감한 생화학 적 절차입니다. EMSA는 젤 전기포고증의 대역의 변화를 감지하여 단백질과 핵산 사이의 결합을 해명한다. 이 비디오는 EMSA의 원리에 대해 설명하고, 일반 절차를 제공하며, 일부 응용 프로그램에 대해 설명합니다. DNA 복제, 전사 및 수리뿐만...

농도를 측정하는 것은 많은 생화학 적 분석을 근본적인 단계입니다. 포토메트릭 단백질 결정은 샘플에 광 흡수 물질을 더 많이 함유하고 있다는 사실을 활용하며, 빛이 이를 통해 전달되는 빛이 적다는 사실을 활용합니다. 농도와 흡수 사이의 관계가 선형이기 때문에, 이 현상은 알려지지 않은 견본에 있는 농도를 측정하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 비디오는 포토메트릭 단백질 측정의 기초를 설명하고 브래드포드 분석과 로리 방법을 소개합니다. 비디오의 절차는 전형적인 브래드포드 분석체를 다룰 것입니다. 적용 대상에는 농도와 순도를 특성화하기 위해 매우 적은 양의 핵산을 직접 측정하고, 생체 모방 물질의 결합 효율 결정, Remazol 염료를 이용한 광측정 단백질 측정의 또 다른 변형이 포함됩니다. 시료에서 단백질의 농도를 결정하는 것은 많은 생화학 적 분석을 위한 근본적인 단계입니다. 작은 샘플 크기로 포토메트릭 측정을 수행할 수 있습니다. 시료에 광 흡수 물질이 많을수록 빛이 이를...

밀도 그라데이션 극심분리는 생체 분자및 세포 구조를 분리하고 정화하는 데 사용되는 일반적인 기술입니다. 이 기술은 서스펜션에서 용매보다 밀도가 높은 입자가 퇴적물일 것이고, 밀도가 떨어지는 입자가 떠다니는 다는 사실을 악용합니다. 고속 초원심분리기는 원심분리관에서 밀도감소의 액체를 겹쳐서 확립할 수 있는 밀도 그라데이션 내에서 생체분자를 분리하기 위해 이 과정을 가속화하는 데 사용된다. 이 비디오는 샘플 준비, 자당 그라데이션 생성, 초원심 분리 및 분획된 별문 컬렉션을 보여주는 절차를 포함하여 밀도 그라데이션 초원심 분리의 원리를 다룹니다. 응용 분야는 다중 단백질 복합체의 분리, 핵산 복합체의 분리, 세슘 염화물 밀도 그라데이션을 사용하여 분리에 대해 설명합니다. 밀도 그라데이션 초원심분리는 생화학 실험을 위해 세포 구조를 분리하고 정화하는 일반적인 접근법입니다. 이 기술은 밀도 그라데이션에서 비파괴적으로 분리되는 세포 구성 요소를 위해 고속 또는 초원심분리기를 사용합니다.

공동 면역 침전 (CoIP) 및 풀다운 분석은 안정적인 단백질 단백질 상호 작용을 식별하는 밀접하게 관련된 방법입니다. 이러한 방법은 면역 침전과 관련이 있으며, 이는 결합되지 않은 단백질로부터 항체에 결합된 표적 단백질을 분리하는 방법이다. CoIP에서, 항체 결합 단백질 자체는 항체와 결합하지 않는 다른 단백질에 묶여 있으며, 이것은 단백질-단백질 복합체를 보존하는 분리 과정에 선행된다. 풀다운 에세이의 차이점은 선호도 태그가 달린 미끼 단백질이 항체를 대체하고 친화 성 염색체가 단백질 단백질 복합체를 분리하는 데 사용된다는 것입니다. 이 비디오는 CoIP, 풀다운 에세이 및 실험실에서의 구현에 대해 설명합니다. 결합된 단백질을 정화하고 분석하는 데 사용되는 시약, 장치 및 계측기를 포함하여 각 기술에 대한 단계별 프로토콜이 적용됩니다. 또한, 이 비디오의 적용 섹션은 myxovirus 단백질이 인플루엔자 뉴클레오단백질을 억제하는 방법, 풀다운 분석법을 통해 칼모둘린에서 칼슘...

재구성은 고립 된 생체 분자를 원래의 형태 또는 기능으로 되돌리는 과정입니다. 이것은 중요한 세포 기능을 가능하게 하고 가까운 지질의 행동에 영향을 미치는 막 단백질을 공부하기 위해 특히 유용합니다. 정수막 단백질의 기능을 연구하려면 인공 지질 막에 통합하여 재구성해야합니다. 이 비디오는 세제를 이용한 단백질 분리, 지질을 이용한 인공 소포 형성, 고립된 단백질을 인공 소포에 통합, 용액으로부터 세제분리와 같은 막 단백질 재구성 개념 및 관련 절차를 소개합니다. 마지막으로, 두 가지 응용 프로그램이 적용됩니다: 막 수송 단백질의 재구성 및 빛 수확 단백질의 재구성. 재구성은 고립 된 생체 분자를 원래의 형태 또는 기능으로 복원하는 과정입니다. 이 접근법은 많은 중요한 세포 과정을 가능하게 하고 이웃 지질의 행동에 영향을 미치는 막 단백질을 공부할 때 수시로 이용됩니다. 그러나, 세포 환경의 복잡성은 막 단백질 기능을 시상에서 공부하기 어렵게 만듭니다. 단백질은 추출하고 정제될 수...

Förster 공명 에너지 전송 (FRET) 근거리 생화학 적 상호 작용을 조사하는 데 사용되는 현상이다. FRET에서, 기증자 광발광분자는 각각의 방출 및 흡수 스펙트럼이 겹치는 경우에 비 라디아케로 에너지를 수용자 분자로 비-방사적으로 전송할 수 있습니다. 전달된 에너지의 양 - 그리고 결과적으로 샘플의 전반적인 방출은 수용자 기증자 쌍의 광발광성 분자의 근접에 달려 있습니다. FRET 분석은 이 "분광 눈자"에서 생분자 구조 및 상호 작용의 상세한 정보를 얻기 위하여 그밖 생화학 기술과 결합됩니다. 이 비디오는 FRET 분석의 원칙과 개념을 다룹니다. 이 절차는 FRET에 대한 샘플을 준비하고 데이터를 표시하고 해석하는 방법에 중점을 둡니다. 마지막으로, 응용 프로그램은 세포 또는 단백질의 일부를 라벨링하여 형성 및 세포 과정을 모니터링, 단백질 구조를 변경하는 효소 반응을 모니터링하고, FRET를 사용하여 세포에 의해 발현된 단량체의 응집을 모니터링하는 것을 포함한다.

표면 플라스몬 공명 (SPR)은 분자 친화성, 운동성, 특이성 및 생체 분자의 농도를 평가하기 위해 라벨이없는 바이오 센서 뒤에 근본적인 광학 현상입니다. SPR에서는, 생체 분자 상호 작용은 프리즘에 금속의 얇은 층으로 만든 생체 센서에서 생깁니다. 생체 분자의 실시간 상호 작용은 금속의 밑면에 반사되는 빛의 변화를 측정하여 모니터링할 수 있습니다. 이 비디오는 SPR의 기본 개념과 생체 분자 상호 작용을 분석하고 시각화하는 데 사용되는 방법을 설명합니다. 다음은 SPR을 사용하여 바인딩 속도를 조사하기 위한 샘플 준비 및 실험 프로토콜이 뒤따릅니다. 응용 분야 섹션에서는 SPR 이미징, 현지화된 SPR 및 퀀텀닷 강화 SPR을 탐구합니다. 표면 플라스몬 공명, 또는 SPR은 생체 분자의 결합 및 흡착 상호 작용을 평가하기위한 특정 라벨이없는 바이오 센서 뒤에 근본적인 현상입니다. ELISA와 같은 라벨링이 필요한 바인딩 된 소사는 시간이 많이 소요되는 과정이 될 수 있으며,...