Summary
Здесь мы представляем изысканные протокол эффективно раскрыть биотинилированным декстрана Амин (BDA) маркировки с флуоресцентных окрашивания метода через взаимные нейронные пути. Это подходит для анализа тонкой структуры из BDA маркировки и отличает его от других нервных элементов под конфокальный лазерный сканирующий микроскоп.
Abstract
Биотинилированным высокомолекулярного декстрана Амин (BDA) был использован как трассировщик высокочувствительный нейроанатомический на протяжении многих десятилетий. Поскольку качество его маркировки пострадал от различных факторов, здесь, мы предлагаем изысканный протокол для применения высокой молекулярной массой BDA для изучения оптимальных нейронных маркировки в центральной нервной системе. После стереотаксической инъекции АРП в вентральной задне ядро таламуса крыс через деликатные стеклянные пипетки (ВПМ) BDA витражи с флуоресцентные стрептавидина Alexa (AF) 594 и counterstained с флуоресцентные Ниссль пятно AF500/525. На фоне зеленых Ниссль окрашивание красный BDA маркировки, включая нейрональных клеток органов и аксональной терминалы, более отчетливо проявилось в соматосенсорной коры. Кроме того, двойной флуоресцентные пятная для BDA и кальция связывания белка Парвальбумин (PV) была проведена соблюдать соотношение BDA маркировки и PV-позитивных интернейронов корковых целевой, предоставляя возможность для изучения местных нейронных схемы и их химических характеристик. Таким образом этот изысканный метод подходит не только для визуализации высокого качества нейронных маркировки с высокой молекулярной массой BDA через взаимные нервные пути между таламус и коры головного мозга, но также позволит одновременной демонстрации другие нейронных маркеры с флуоресцентные гистохимии или иммунохимии.
Introduction
Высокомолекулярный BDA (10,000 молекулярный вес), высокочувствительный трассировщика, была использована для отслеживания нервные пути в центральной нервной системе для более чем 20 лет1. Хотя использование BDA является общей нейронных тракта, отслеживание техники, качество BDA маркировки могут быть затронуты в животных различных факторов1,2,3. Наши недавнее исследование показало, что оптимальная структура BDA маркировки не только связанные с надлежащей впрыск выживания время, но также коррелирует с окрашивание метод4. До сих пор, обычных авидин биотин пероксидаза комплекс (ABC), стрептавидина флуоресцеин Изотиоцианаты и AF594 стрептавидина пятная методы были использованы для выявления, маркировки АРП в предыдущих исследований2,3, 4,5. В сравнении флуоресцентный окрашивания для BDA могут легко выполняться.
Для того, чтобы распространить применение высокой молекулярной массой BDA, изысканный протокол был введен в настоящем исследовании. После инъекции АРП в VPM таламуса в мозге крыс BDA маркировки было выявлено регулярный метод окрашивания стандартной ABC, а также двойной флуоресцентные окрашивание, которая была проведена для наблюдения корреляции BDA маркировки и основные нервных элементов или интернейронов корковых целевой стрептавидина AF594 и флуоресцентные Ниссль гистохимии или PV-Иммунохимия, соответственно. Через взаимное нервные пути между ВПМ и первичной соматосенсорной коры (S1)6,7,8мы сосредоточили наши наблюдения на BDA маркировки в thalamocortical прогнозам аксонов и corticothalamic СОСМ прогнозируемые ячейки в строке S1. Этот процесс мы должны обеспечить не только подробный протокол для получения высокого качества нейронных маркировки с высокой молекулярной массой BDA, но и изысканный протокол на сочетание люминесцентные маркировки BDA и другие флуоресцентные нейронных маркеры с гистохимии или иммунохимии. Этот подход предпочтительнее изучить местные нейронных цепей и их химических характеристик под Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Это исследование был одобрен Комитетом по этике на Китай Академии медицинских наук (регистрационный номер 20160014). Все процедуры были проведены в соответствии с национальными институтами здравоохранения руководство для ухода и использования лабораторных животных (Национальная академия Press, Вашингтон, о.к., 1996). В этом исследовании были использованы четыре взрослых самцов крыс (вес 250-280 г). Все животные были размещены в цикле свет/темно 12 h с контролируемой температурой и влажностью и свободный доступ к продовольствию и воде. Инструменты и материалы, используемые в настоящем исследовании были показан на рисунке 1. Перед операцией все инструменты, такие как стереотаксической рамы и стекла пипетку, были очищены с помощью 70% этиловом спирте.
1. хирургические процедуры
- Определение координат области интереса к ВПМ, с использованием стереотаксического Атлас9 (рис. 2A).
- Подготовить 1 мкл микро шприц с микропипеткой стекла (с наконечник диаметром приблизительно 10-20 мкм) (рис. 1 d) и проверить его с жидкий парафин.
- Анестезировать крыс с 7% хлораль гидрат (0,7 мл/100 г) внутрибрюшинной инъекцией.
- После подтверждения глубокий наркоз с хвостом щепотку и педаль вывода рефлекс, бриться верхней части головы животного с электрической бритвой и скраб хирургической сайта 3 раза с 10% повидон йод, следуют этанол 70% соответственно.
- Уложите стереотаксического устройство крыса, поместив тупым уха баров в уши и место крыса верхних резцов в рот держатель (Рисунок 1E), а затем применить глазная мазь на глазах.
- Очистите кожу головы хирургической сайта снова используя 70% этиловом спирте. Используйте стерильные хирургические перчатки и полотенца для поддержания операции в стерильных условиях.
- Сделайте Сагиттальный разрез в коже с помощью скальпеля вдоль Сагиттальный шов (рис. 1F).
- Скрип мышц и надкостницы от черепа с помощью стерильным ватным наконечником аппликаторы всей операции управления, кровотечение (Рисунок 1F).
- Использование предопределенных координат из атласа (рисунок 2A), определите местоположение (-3,3 мм Bregma точка, 2,6 мм право на срединной) Краниотомия (рис. 1 g).
- Выполните краниотомии с помощью сверла заусенцев с небольшим круглым кончиком (#106) (рис. 1 H) и продолжить бурение для о 1 мм глубина в течение нескольких минут до достижения мозговых оболочек (Рисунок 1I).
- Акцизный твердой мозговой оболочки с помощью microforceps для предоставления коры головного мозга через инъекции (Рисунок 1I).
- Изменить жидкий парафин в микро шприц с 10% BDA (10,000 молекулярный вес, в дистиллированной воде) раствор (Рисунок 1J).
- Смонтировать шприц в микроинъекции аппарат и соединиться с микро насос (рис. 1 K).
Примечание: Объем инъекции зависит скорость микро насоса. Здесь он был скорректирован до 30 нл/мин (рис. 1 Л). - Под стереомикроскопом Вставьте стекло микропипеткой вручную с аппаратом микроинъекции VPM через поверхности коры головного мозга на глубине 5,8 мм (рис. 1 M).
- Давление inject 100 nL 10% АРП в VPM в течение 3 мин (35 nL/мин) с микро насос (рис. 1 L, M).
- После инъекции держать пипетку в место для дополнительных 5 мин и затем вывести медленно.
- Шовные рану стерильную поток (Рисунок 1N). Следуйте рекомендациям Комитета ваших местных животных ухода для пред- и послеоперационная анальгезия.
- Место крыса в районе теплых восстановления до тех пор, пока он приходит в сознание и полностью выздоровел.
- Возвращение восстановленные крыса в своей клетке.
2. орошений и секции
- После времени выживания обычно 10 дней привнести животное с передозировкой 10% уретана (2 мл/100 г), внутрибрюшной инъекции, чтобы побудить эвтаназии.
- Perfuse экспериментальных крыс в капюшоне (Рисунок 1O).
- После того, как дыхание останавливается, используя ножницы, щипцы, откройте грудной полости крысы для доступа к сердце. Вставьте левый желудочек сторону аорты внутривенного катетера, а затем откройте правом предсердии.
- Сначала perfuse с 0,9% фосфат амортизированное saline (PBS) при физиологических температуре (37 ° C) около 1-2 мин до тех пор, пока кровь, удалились от сердца, очистить, а затем продолжить с 250-300 мл 4% параформальдегида в 0,1 М фосфатного буфера (PB, рН 7,4).
- После перфузии надрезать кожу головы и открыть черепа и затем вскрыть вне мозга крысы. После исправления расчлененных мозга в параформальдегида 4% для 2 ч при комнатной температуре (26 ° C), затем cryoprotect в 30% сахарозы в ФБР (рН 7,4) 0,1 М для 3 дней при температуре 4 ° C до тех пор, пока мозг погружен в раствор (рис. 1 P).
- После того, как мозг погружен в раствор, делят на три блока в корональных направлении на мозг матрицы (рис 1 квартал) мозга. Центральный блок содержит ВПМ и S1.
- Вырежьте центрального блока мозга на 40 мкм на замораживание сцене, раздвижные системы микротом в корональных направлении. Собирайте эти разделы упорядоченной в 6-ну блюдо с 0,1 М PBS (рН 7,4) (цифры 1R, S).
3. стандартные ABC пятнать
Примечание: Бесплатные плавающей секции от каждого третьего корональных секции мозга были использованы для визуализации BDA маркировки с стандартной ABC процедуры10.
- Полоскания разделы в 0,1 М PBS для около 1 мин.
- Инкубировать в подразделах 1% раствор ABC в 0,1 М PB (рН 7,4), содержащие 0,3% Тритон X-100 за 1 ч при комнатной температуре.
- Мыть в разделах три раза в буфер Tris 50 мм (рН 7,4).
- Пятно разделы в раствор, содержащий 0,02% 3, 3'-диаминобензидин tetrahydrochloride (DAB) и 0,01% H2O2 в буфер Tris 50 мм для около 2-5 мин при комнатной температуре.
- Мыть в разделах три раза в буфер Tris 50 мм (рН 7,4).
- Смонтируйте разделы на скольжениях микроскопа с помощью стандартных гистохимические методы (Рисунок 1Т; см. Дополнительное видео файл III, перфузии и секции).
- Сухие разделы в воздухе на ночь при комнатной температуре.
- Обезвоживает разделах кратко в серии решений алкоголя (50%, 70%, 95%, 100%). Опускайте слайды в каждом решении для около 15 s. Не позволяйте слайды высохнуть между каждым шагом.
- Очистите разделы в ксилоле три раза, около 20 мин.
- Положите 2 или 3 капель бальзама на ломтики, а затем место coverslips на участках.
4. двойной флуоресцентные пятная для BDA и основных нервных элементов в коре
Примечание: В отличие от двойной флуоресцентной окраски была проведена для наблюдения корреляции BDA маркировки и основных нервных элементов на прилегающих участках выше используется с стрептавидина AF594 и counterstained с флуоресцентные Ниссль пятно AF500/525.
- Полоскания разделы в 0,1 М PBS для около 1 мин.
- Инкубировать в подразделах смешанного решения стрептавидина AF594 (1: 500) и AF500/525 Зеленый флуоресцентный Ниссль пятно (1:1, 000) в 0,1 М PBS (рН 7,4), содержащие 0,3% Тритон X-100 втечение 2 ч при комнатной температуре.
- Мыть в разделах три раза в 0,1 М PB (рН 7,4).
- Смонтируйте разделы на скольжениях микроскопа с помощью стандартных гистохимические методы. Сухие разделы в воздухе около 1 ч.
- Применить coverslips к флуоресцентные секции с 50% глицерина в дистиллированной воде до наблюдения.
5. двойной флуоресцентные пятная для BDA и интернейронов в коре
Примечание: Двойной флуоресцентной окраски была проведена для наблюдения корреляции BDA маркировки и интернейронов на представителя секции в целевой корковых стрептавидина AF594 и PV-Иммунохимия.
- Промойте представитель Секции в 0,1 М PBS (рН 7,4) около 1 мин.
- Инкубировать в подразделах блокирующий раствор, содержащий 3% нормальной козьего сыворотки и 0,3% Тритон X-100 в 0,1 М PBS на 30 мин.
- Перенести разделы в раствор мыши моноклонального анти PV IgG (1:1, 000) в 0,1 М PBS (рН 7,4) содержащий 1% нормальной козьего сыворотки и 0,3% Тритон X-100 за ночь при 4 ° C.
- На следующий день мыть в разделах три раза в 0,1 М PBS (рН 7,4).
- Разоблачить разделы для смешанного решения коза mouse-AF488 вторичное антитело (1: 500), стрептавидина AF594 (1: 500) и 4', 6-diamidino-2-phenylindole дигидрохлорид (DAPI, 1:40, 000) в сыворотке нормальный коза 0,1 М PBS (рН 7,4) содержащий 1% и 0,3% Тритон X-100 за 1 час.
- Повторите шаги с 4,3 до 4.5.
6. наблюдение
- Возьмите изображения ВПМ, аксоны thalamocortical и corticothalamic нейронов.
- Соблюдать флуоресцентные образцы с конфокальный съемочной системы оснащены целей линзы (4 x, NA: 0,13; 10 x, NA: 0,40; и 40 x, NA: 0,95). Используйте возбуждения и выбросах волн 405 (синий), 488 (зеленый) и 559 Нм (красный).
Примечание: Здесь, конфокальная обскуры-152 мкм (4 x, 10 x) и 105 мкм (40 x). Пространственное разрешение изображений-1024 × 1024 пикселей (4 x, 10 x) и 640 × 640 пикселей (40 x). - Принять двадцать изображения в последовательных кадров 2 мкм из каждого раздела на толщину 40 мкм (серии Z).
- Интегрировать изображения в одно изображение в фокус с обработки системы программного обеспечения для трехмерного анализа следующим конфокальный изображений: установить начало фокальной плоскости → окончания фокальной плоскости → задать шаг размер → выбрать глубину шаблон → изображения захвата → Z серии.
- Соблюдать флуоресцентные образцы с конфокальный съемочной системы оснащены целей линзы (4 x, NA: 0,13; 10 x, NA: 0,40; и 40 x, NA: 0,95). Используйте возбуждения и выбросах волн 405 (синий), 488 (зеленый) и 559 Нм (красный).
- Возьмите изображения brightfield, световой микроскоп, оснащенный цифровой камерой (4 x, NA: 0,13; 10 x, NA: 0,40; и 40 x, NA: 0,95 линзы). Используйте выдержка из 500 г-жа использования фото редактирования программного обеспечения для регулировки яркости и контрастности изображения и для добавления меток.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Выживание 10 дней поста инъекции АРП в VPM было достаточно для производства интенсивной нейронных маркировки на соответствующий корковых областях ипсилатеральные в сторону впрыска (рис. 2). Обычных ABC и люминесцентные пятнать процедуры для BDA показали аналогичные модели нейронных маркировки на автомагистрали S1, в том числе anterogradely помечены аксоны thalamocortical и retrogradely помечены corticothalamic нейронов (рис. 2 c, D ).
Для anterogradely, помечены аксонов они были замечены от слоя 2 слоя 6 с высокой плотностью на уровне 4, и типичный тип аксоны thalamocortical наблюдался в области ствола (рис. 2 c, D). В представлении выше увеличение BDA маркировки четко представлены на аксональное ствола, филиалы, залогов и небольшой Варикоз (рис. 3A). Под аксоны помечены thalamocortical для отображения были показаны retrogradely помечены пирамидных нейронов коры головного мозга, и их клетки тела, распределенных на слоях 5/6, но их апикальных дендритов продлен до уровня 2 (рис. 2 c, D). BDA маркировки не только представлены в нейрональных клеток органов и дендритов, но и дендритных шипиков, появляясь как Golgi как резолюции (рисунок 3B).
Кроме того двойной флуоресцентные окрашивания также была исполнена для наблюдений корреляции BDA маркировки и интернейронов корковых целевой стрептавидина AF594 и PV-Иммунохимия. Вокруг BDA маркировки в кортикальной цели PV-позитивных нейронов слоя 2, были разосланы слоя 6 с высокой концентрацией в слое 4 (рис. 4A). Там были не PV-позитивных нейронов чтобы быть помечены с BDA, однако BDA-меченых аксональное терминалы были найдены вокруг поверхности PV-положительных клеток органов и аксональной терминалов PV-положительные вокруг BDA-меченых корковых пирамидных нейронов (рис. 4В, C ).
Рисунок 1. Фотографии ключевых хирургические шаги и основные инструменты для использования в этом эксперименте.
A: стереотаксического устройство. B: Стоматологическая дрель. C: хирургические инструменты (скальпель, microforceps и т. д.) D: микро шприц с микропипеткой стекла. E: место крыса голову в стереотаксического устройство. F: чистой хирургической сайта. G: подтверждают точку Bregma. H: сверлить череп. Я: разоблачить коры головного мозга. J: нагрузка 10% АРП в микро шприц. K: смонтировать шприц в аппарат для микро инъекций. L: Отрегулируйте скорость микро насоса. М: Вставьте стекло микропипеткой VPM. N: шовные рану стерильным ниткой. O: Perfuse крыса в капюшоне. P: вскрыть из мозга. Q: разделить на три блока с матрицами мозга мозга. R: вырезать мозг на замораживание сцене, раздвижные системы микротома. S: собирать мозга секции упорядоченной в 6-ну блюдо. T: смонтировать разделы на скольжениях микроскопа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. Инъекции и типичные нейронных маркировки с высокой молекулярной массой АРП в соматосенсорной коры.
A: инъекции был определен на стереотаксического Атлас. B: представитель Микрофотография показаны инъекции BDA (красный) в вентральной задне ядра таламуса (ВПМ) на фоне зеленых Ниссль пятнать. C: Микрофотография флуоресцентные BDA маркировки, включая аксоны thalamocortical в слое 4 и corticothalamic нейронов в слоях 5/6. D: Микрофотография обычных BDA маркировки с помощью стандартной процедуры авидин биотин пероксидаза показаны аналогичные модели нейронных маркировки люминесцентные маркировки BDA. VPL, вентральной задне ядро таламуса. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
На рисунке 3. Высокое качество нейронных маркировки с высокой молекулярной массой BDA на фоне зеленых Ниссль пятнать.
A: выше увеличение вид anterogradely помечены аксональное беседки (красный) в деталях. B: высокое разрешение фотографий, показывающих retrogradely помечены нейрональные клетки тела, дендриты и дендритных шипиков (красный) в деталях. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4. Корреляция BDA маркировки и кальция связывающий белок PV-позитивных интернейронов корковых целевой.
A: распределение BDA маркировки (красный) и PV-положительных интернейронов (зеленый) в соматосенсорной коры. B: выше увеличение представление распределения BDA-меченых аксонов и PV-позитивных интернейронов в слое 4. C: высоким разрешением фотографии BDA-меченых корковых пирамидальной клетке (красный) и PV-положительных интернейронов (зеленый) в слои 5/6. Все образцы были counterstained с DAPI (синий). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Дополнительные видео файлы: Дополнительное видео кратко показывают хирургической процедуры, инъекции АРП в ВПМ, перфузии и секционирование и результаты. В видео файл с именем «IV. Представитель результат», отображаются трехмерные Конфокальная лазерная микроскопия и анализ системы результаты сканирования. Высоким разрешением анимация показывает retrogradely помечены нейрональные клетки тела, дендриты и дендритных шипиков (красный) в деталях. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Выбор надлежащего трассирующими является важным шагом для успешной нейронных трассировки эксперимента. В семье BDA, высокой молекулярной массой BDA (10,000 молекулярный вес) было рекомендовано преференциально перевозиться через антероградная нейронные пути в отличие от низкомолекулярных BDA (3000 молекулярный вес)2,3 , 11 , 12 , 13. Однако многие исследования также предложено что высокий молекулярный вес BDA могут также потенциально использоваться для трассировки ретроградный путь параллельно с антероградная трассировки1,2,3. Через взаимное нервные пути между ВПМ и S1 мы предоставили дополнительные доказательства поддержать идею, что высокий молекулярный вес BDA подходит для двунаправленных тракта трассировки4. Аналогичным образом, в этом домене высокой молекулярной массой BDA также используется в системе визуального и слухового для изучения взаимных связей между спинной боковых коленчатые тела и зрительной коры, а также медиальной коленчатые тела и аудиального кортекса 3 , 14.
В эксперименте нейронных трассировки другим важным фактором является выбор окрашивания методом нейронных маркировки. В большинстве предыдущих исследований, в обычных ABC протокол и флуоресцентные стрептавидина окрашивания метода были использованы для изучения маркировки BDA и показали аналогичные морфологическая картина1,2,3 , 4 , 5. здесь, мы обнаружили, что стрептавидина AF594 был не только правильный выбор для маркировки BDA, но также подходит для комбинирования с другими нейронных маркера, например флуоресцентного Ниссль и PV-антигена, предоставляя новые возможности для наблюдения корреляции BDA маркировки и других нервных элементов. Хотя метод обычных двойных окрашивание BDA и других нервных маркеров также часто осуществляются с двухцветной DAB процедура14,15, это не подходит для использования трехмерного анализа системы под Сканирующая конфокальная лазерная микроскопия. С технической точки зрения наше настоящее исследование предоставляет ценную ссылку отчетливо сравнения между BDA маркировки и других маркировки.
Метод отслеживания нейронных путей первоначально использовался для выявления нейрональных связей между укола и ее цели в нервной системе; Однако исследователи по-прежнему преследовали идеальная структура нейронной маркировки с надлежащей трассирующими16,17. В отличие от других индикаторов, например пероксидаза и подгруппы B холеры токсин высокой молекулярной массой BDA производит более высокое качество нейронных маркировки для количественной оценки числа аксональное беседки и дендритов нейронов16,17 . Хотя в настоящем исследовании не проведен количественный анализ BDA маркировки, более высокое качество нейронных маркировки с BDA предоставляет больше возможностей тесно понять морфологические характеристики на обозначенные аксональное беседки и нейронов дендритов.
Подобно применения многих других индикаторов, ряд важных вопросов, должны быть рассмотрены для этой экспериментальной процедуры, включая: концентрации и объема BDA используется для инъекций, правильный сайт инъекции, диаметра кончика Пипетки стеклянные, хирургических процесс, оптимальное выживания время, перфузии, секции и наблюдения под микроскопом. Это напрямую связаны с качеством BDA, маркировки, чем мы ожидали. В дополнение к критическим шаги, упомянутые выше существуют технические ограничения, которые требуют внимания, такие как расстояние от введенного сайта на обозначенные цели, которая зависит от модели животных видов, используемых в эксперимент3, 5 , 18. Одним словом, исследование успешной трассировки зависит каждый шаг в рамках всей экспериментальной процедуры.
В настоящем исследовании мы предоставили изысканный протокол продемонстрировать, что флуоресцентные BDA, окрашивание метод является эффективным способом для получения высокого качества нейронных маркировки, которые могут быть одновременно в сочетании с другими нейронных маркеры с помощью Флуоресцентный гистохимии или иммунохимии. Сравнение обычных BDA окрашивание с процедурой DAB, мы можем более легко анализировать тонкой структуры BDA маркировки и отличать его от других нервных элементов в целевом трассировки под Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия по настоящему люминесцентные подход.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Это исследование финансировалось Национальный фонд Китая естественных наук (проект кодекса № 81373557, № 81403327).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Biotinylated dextran amine (BDA) | Molecular Probes | D1956 | 10,000 molecular weight |
| Streptavidin-Alexa Fluor 594 | Molecular Probes | S32356 | Protect from light |
| 500/525 green fluorescent Nissl stain | Molecular Probes | N21480 | Protect from light |
| Brain stereotaxis instrument | Narishige | SR-50 | |
| Freezing microtome | Thermo | Microm International GmbH | |
| Confocal imaging | Olympus | FV1200 | |
| system | |||
| Micro Drill | Saeyang Microtech | Marathon-N7 | |
| Sprague Dawley | Institute of Laboratory Animal Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences | SCKX (JUN) 2012-004 | |
| Vectastain ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | |
| superfrost plus microscope slides | Thermo | #4951PLUS-001 | 25x75x1mm |
| Photoshop and Illustration | Adobe | CS5 |
References
- Veenman, C. L., Reiner, A., Honig, M. G. Biotinylated dextran amine as an anterograde tracer for single- and double-labeling studies. J Neurosci Methods. 41, 239-254 (1992).
- Reiner, A., Veenman, C. L., Medina, L., Jiao, Y., Del Mar, N., Honig, M. G. Pathway tracing using biotinylated dextran amines. J Neurosci Methods. 103, 23-37 (2000).
- Ling, C., Hendrickson, M. L., Kalil, R. E. Resolving the detailed structure of cortical and thalamic neurons in the adult rat brain with refined biotinylated dextran amine labeling. PLoS One. 7, e45886 (2012).
- Zhang, W. J., et al. Anterograde and retrograde tracing with high molecular weight biotinylated dextran amine through thalamocortical and corticothalamic pathways. Microsc Res Tech. 80, 260-266 (2017).
- Han, X., et al. Biotinylated dextran amine anterograde tracing of the canine corticospinal tract. Neural Regen Res. 7, 805-809 (2012).
- Armstrong-James, M., Callahan, C. A. Thalamo-cortical processing of vibrissal information in the rat. II. spatiotemporal convergence in the thalamic ventroposterior medial nucleus (VPm) and its relevance to generation of receptive fields of S1 cortical "barrel" neurones. J Comp Neurol. 303, 211-224 (1991).
- Armstrong-James, M., Callahan, C. A., Friedman, M. A. Thalamo-cortical processing of vibrissal information in the rat. I. Intracortical origins of surround but not centre-receptive fields of layer IV neurones in the rat S1 barrel field cortex. J Comp Neurol. 303, 193-210 (1991).
- Agmon, A., Yang, L. T., Jones, E. G., O'Dowd, D. K. Topological precision in the thalamic projection to neonatal mouse barrel cortex. J Neurosci. 15, 549-561 (1995).
- Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , Academic Press. San Diego. (1998).
- Davidoff, M., Schulze, W. Standard avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) staining combination of the peroxidase anti-peroxidase (PAP)-and avidin-biotin-peroxidase complex (ABC)-techniques: an amplification alternative in immunocytochemical staining. Histochemistry. 93, 531-536 (1990).
- Fritzsch, B. Fast axonal diffusion of 3000 molecular weight dextran amines. J Neurosci Methods. 50, 95-103 (1993).
- Kaneko, T., Saeki, K., Lee, T., Mizuno, N. Improved retrograde axonal transport and subsequent visualization of tetramethylrhodamine (TMR) -dextran amine by means of an acidic injection vehicle and antibodies against TMR. J Neurosci Methods. 65, 157-165 (1996).
- Medina, L., Reiner, A. The efferent projections of the dorsal and ventral pallidal parts of the pigeon basal ganglia, studied with biotinylated dextran amine. Neuroscience. 81, 773-802 (1997).
- DE Venecia, R. K., Smelser, C. B., McMullen, N. T. Parvalbumin is expressed in a reciprocal circuit linking the medial geniculate body and auditory neocortex in the rabbit. J Comp Neurol. 400, 349-362 (1998).
- Ojima, H., Takayanagi, M. Use of two anterograde axon tracers to label distinct cortical neuronal populations located in close proximity. J Neurosci Methods. 104, 177-182 (2001).
- Kobbert, C., Apps, R., Bechmann, I., Lanciego, J. L., Mey, J., Thanos, S.
- Vercelli, A., Repici, M., Garbossa, D., Grimaldi, A. Recent techniques for tracing pathways in the central nervous system of developing and adult mammals. Brain Res Bull. 51, 11-28 (2000).
- Liao, C. C., Reed, J. L., Kaas, J. H., Qi, H. X. Intracortical connections are altered after long-standing deprivation of dorsal column inputs in the hand region of area 3b in squirrel monkeys. J Comp Neurol. 524, 1494-1526 (2016).
