Summary
Этот протокол описывает эффективный способ контроля за сохранение клеток и накопление жировой производные мезенхимальных стволовых клеток человека (haMSCs) far-red флуоресценции маркировки в мышиной модели коленного остеоартрита (КОА) через Внутрисуставных инъекций (IA).
Abstract
Чтобы поддерживать клиническое применение жировой производные мезенхимальных стволовых клеток человека (haMSC) терапии для коленного остеоартрита (КОА), мы изучили эффективность клеток сохранение и накопление haMSCs в животных моделях. Мы продемонстрировали метод для обозначения клеточной мембраны haMSCs с липофильных флуоресцентных красителей. Впоследствии Внутрисуставных инъекций помечены клетки крыс с хирургическим индуцированных KOA контролируется динамически в vivo imaging системы. Мы заняты липофильных carbocyanines сделал (ДППК18 (5)), far-red флуоресцентные аналоговый Dil (диалкилкарбоцианины), которые использовали красный лазер, чтобы избежать возбуждения естественный зеленый аутофлюоресценция от окружающих тканей. Кроме того красный смещается выбросов спектры допустимое глубокие ткани изображений в живых животных и маркировки процедура вызвала не цитотоксических эффектов или функциональные повреждения haMSCs. Такой подход было показано, быть методом эффективного отслеживания для haMSCs в мышиной модели KOA. Применение этого метода может также использоваться для определения оптимального управления маршрут и дозировка MSCs из других источников в доклинических исследований.
Introduction
Коленного остеоартрита (КОА) является результатом потери суставного хряща и прогрессирующим воспалением, который стал основным хронических заболеваний у пожилых людей во всем мире1дегенеративные расстройства. Однако текущий терапии с использованием противовоспалительных препаратов, физической добавки и хирургических процедур может обеспечить лишь временное облегчение для симптоматического боли2.
Жировой производные мезенхимальных стволовых клеток человека (haMSCs) стали многообещающим регенеративной средство для коленного остеоартрита, ввиду их Multipotent с дифференциации, потенциал для регенерации хряща и иммуномодулирующие свойства3, 4. По сравнению с фармакологическими маршрутов для изучения механизмов действий в естественных условиях, отслеживание жить haMSCs в небольших животных моделях KOA поучительно в настоящее время установить обоснование и целесообразности haMSC терапии до клинического применения. Для доклинических испытаний, медиальной meniscectomy (мм) дестабилизирует механической нагрузки совместной побудить KOA в крыс, которая обеспечивает относительно осуществимости модель с последовательной воспроизводимость5. Начала KOA индуцированных мм раньше чем передней крестообразной связки перерезка отдельно или в сочетании с частичным медиальный meniscectomy6. Таким образом долгосрочного взаимодействия между вводят haMSCs с патологическим микроокружения KOA часто оцениваются в крыс, вызванных мм7,8.
Хотя Терапевтическая эффективность haMSCs был широко сообщалось, соответствующие знания на сохранение в vivo имплантированных haMSCs через Внутрисуставных инъекций (IA) является дефицитных9,10. Таким образом были разработаны различные методы клеточной маркировки, включая immunohistology11, Люцифераза12, Зеленый флуоресцирующий белок13 трансфекции, оксид железа, маркировки для магнитно-резонансная томография (МРТ)14 и многочисленные люминесцентные клеток красители8,,1516. По сравнению с трудоемкой гистология анализы, в естественных условиях неинвазивной визуализации использует оптические устройства для обнаружения реального времени распределение и динамика клеток, помечены флуоресцентные сигналов10,17. Для функциональной живой клетки изображений, cytocompatible люминесцентные маркировки — сложные отслеживания радиоактивных бесплатно техника раскрыть клеточной деятельности после трансплантации стволовых клеток18. Кроме того многоцветный липофильных флуоресцентных красителей обладают преимуществами над амино реактивной гидрофильные красителей или флуоресцентных белков, включая их Улучшенная ячейка проницаемость и расширенной флуоресценции квантовой урожайности19.
Таким образом, здесь включены протоколы используют красный лазер для возбуждения клеток, помечены липофильных carbocyanines сделал (ДППК18(5)), который является far-red флуоресцентные Дил (диалкилкарбоцианины) аналоговый20. Красный смещается возбуждения и выбросов спектры избегает вмешательства autofluorescent и позволяет глубоко ткани изображений в течение длительного периода времени в живых животных8. Этот метод отслеживания-клеток в vivo помечены сделал действителен для мониторинга пересаженные стволовые клетки, такие как haMSCs, в моделях животных, которая необходима для понимания и улучшения текущей восстановительной терапии стволовой клетки.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
процедур с участием животных темы были утверждены местных институциональных животное уход и Комитет по этике с целью свести к минимуму страдания животных. Следующий протокол был одобрен институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) в девятой Шанхая ’ больница связанных Шанхай JiaoTong University School of Medicine с протоколом s номер [2017] 063.
1. Создание модели артроз колена крыса Surgically-Induced
- для этой хирургической процедуры, использовать 8-12 недельных самцов крыс Sprague-Dawley (SD) с весом тела между 250 и 300 г.
- Анестезировать животных с tiletamine 40 мг/кг и zolazepam 40 мг/кг через внутримышечного.
- Место животного в левой боковой позиции на сцене с подогревом. Бритье тщательно правого колена с бритвой. Дезинфекция хирургические области с 10% providone йод раствор, затем на 70% этиловом спирте, повторить еще два раза и затем краски с 10% раствор providone йода и охватывают области нехирургических с хирургической pad.
- С помощью хирургического скальпеля, сделать 2 см разрез сбоку вдоль коленного сухожилия подвергать jointcapsules.
- Использовать хирургический скальпель трансектных медиальной коллатеральной связки. Отражать мениска к бедренной кости.
- Капельно стерильного 0,9% раствора хлорида натрия на поверхности суставного хряща в ходе операции для предотвращения высыхания хряща.
- Захватить медиального мениска с щипцами и прорезать мениска в самом узком месте от голени вложение с помощью скальпеля ( рис. 1A). Избегайте, ранив хряща.
- Закройте суставной капсулы с рассасывающиеся шовные 4-0.
- Мониторинг хирургические крысы до тех пор, пока они восстановить сознание.
- 20 мг/кг гентамицина для предотвращения инфекции и бупренорфина 0,05 мг/кг через внутримышечный путь для облегчения боли после операции вставки.
- Поддерживать крыс в контролируемой температурой животных фонда под свет/темно цикл 12 h 3-8 недель до начала KOA. Животных по-прежнему получать боль лекарства, включая но не ограничиваясь бупренорфин (0,05 мг/кг, и.м.) и гентамицин (20 мг/кг, и.м.), если боль симптомы сохраняются.
2. Гистология оценки крыса KOA модель
- жертву крыс с чрезмерным CO 2 ингаляции (добавить скорость заполнения около 30% от объема камеры в минуту с двуокиси углерода в существующих воздух в камере, чтобы сделать животных бессознательного в течение 2-3 мин поток поддерживать CO2 менее 1 мин после дыхание перестает.) в указано время точек (представитель результаты показываются в 8 недель KOA индукции от 3 до 8 недель) после хирургии.
- рассечения кожи и мышц вокруг коленных суставов и отрезали коленных суставов с помощью скальпеля.
- Исправить коленных суставов в параформальдегида 4% (PFA) для 3 дней при комнатной температуре. После этого, известь образцы в 20% Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) около 4 недель при температуре 4 ° C и измените ЭДТА каждые 3 дня.
Предупреждение: Параформальдегида токсичных, носить соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ), таких как перчатки и очки. - Дигидрат образцы с использованием автоматического ткани процессора. Установите в меню, чтобы начать флеш цикла следующим образом: 70% этиловом спирте в течение 1 ч; затем 80% этанола и этанола 95% за 1 ч соответственно; последовали 2 циклов 100% этанола за 1 ч; Впоследствии, ксилол дважды за 1 час каждый раз и парафиновые 3 раза на 58 ° C за 1 час каждый раз.
Предупреждение: Ксилол токсичных, так что носить соответствующие средства индивидуальной защиты, как перчатки и очки.
Примечание: При необходимости, использовать Coplin банок для ручной обезвоживания с же настройки как процессор автоматического ткани. - Место медиальной аспект нетронутыми совместных лицом вниз и вставлять его в блоке парафина с ткани, встроенных в центр.
Примечание: При необходимости, использовать щипцы для внедрения образцы в парафин блок вручную. - Начинают сократить 5 мкм сагиттальной секций от медиального края шва для 30 мкм интервалов с 2 последовательных секций микротом роторный.
- Монтировать разделы на стеклянных вставках и deparaffinize слайды в ксилоле. Между 2 последовательных секций, пятно один слайд с применением окрасок гематоксилин & эозином (H & E) пятная: 0.1% гематоксилином 15 мин, 1% раствор уксусной кислоты для 10 s и 0,5% эозина за 10 мин. И пятно другой слайд с Safranin O/Fast зеленой окраски: 0.1% гематоксилином 15 мин, 0,02% быстро зеленый 3 мин, 1% раствор уксусной кислоты для 10 s и 0,1% Safranin O на 3 мин
Предупреждение: Ксилол токсичных, носить соответствующие средства индивидуальной защиты, например, перчатки, очки. - Оценка окрашенных слайды с помощью системы оценки гистопатология международного общества артроз исследований (OARSI) в крыс 6.
3. Маркировки человека мезенхимальных стволовых клеток с флуоресцентных красителей сделал
- подготовить сделал клеток маркировки решение в 100% этанола в концентрации 1 мм. Защиты клетки маркировки решение от света и хранить его при комнатной температуре в течение 6 месяцев.
- Растут haMSCs со стандартной ячейки культуры процедурами в Дульбекко ' s изменение орел ' s среднего (DMEM) дополнены 1% пенициллина и стрептомицина и 10% плода телячьей сыворотки (FCS) в чашку Петри 10 см.
- Отсоединение haMSCs трипсином 2 мл 0,25% с 1 мм слияния до примерно 80% ЭДТА.
- Нейтрализовать трипсина с 4 мл питательной среды и спина клетки на 800 g x 3 мин при комнатной температуре.
- Приостановить клетки на плотность составляет 1 x 10 6 клеток/мл в 5 мл сыворотки свободной культуры среднего.
- Этикетка клетки, добавляя 50 мкл сделал клеток маркировки решение в 5 мл сыворотки свободной культуры среднего при 37 ° C 50 мин
- Спиновые помечены клетки на 800 x g на 3 мин
- Мыть клетки, два раза с 5 мл буфера фосфатный (PBS) на 800 x г за 3 мин.
- Проверить помечены haMSCs, используя флуоресцентный микроскоп с набором фильтров Cy5.
- Подсчитать ячейки с Трипановый синий окрашивание и получить 2,5 х 10 6 жизнеспособных клеток в 100 мкл PBS для инъекций.
4. В естественных условиях Флуоресцентный Imaging на трек haMSCs
- через восемь недель после операции (шаг 1), анестезировать KOA крыс внутримышечно по 25 мг/кг tiletamine и 25 мг/кг zolazepam.
- Бритья правого колена тщательно с бритвой подвергать общей зоне. Лечить области совместного с 70% этанол.
- С помощью иглы шприца 26 G, придать 2,5 х 10 6 помечены клетки, приостановлено в 100 мкл PBS в центре области треугольник, образованный стороне медиальной связки надколенника, медиального мыщелка бедренной кости и медиального мыщелка большеберцовой кости ( Рисунок 1B).
- Открыть изображений программное обеспечение и инициализировать биолюминесценции в vivo изображений системы.
- Позиция крыс в Супин позиции в Центральной сцене тепловизионные системы и закрыть дверь камеры.
- Проверить " флуоресцентный " флажок и выберите флуоресцентный фильтр задает 640 Нм для возбуждения и 680 нм для выбросов ( рис. 2A).
- Выберите поле зрения D. набор пикселей биннинга средний (8), F/Stop 2 и воздействия времени для авто. Поддержание оптимального время экспозиции, последовательно получить сопоставимые результаты через всего исследования ( рис. 2A).
- Удаление животное от стадии и монитор для восстановления от анестезии.
Примечание: Место животных на грелку покрыты 2-3 слоя полотенца. - Выбор единиц лучистого эффективности для измерения флуоресценции ( рис. 2B). Выберите регионы интереса (ROI) для анализа и количественной оценки флуоресцентные сигналы от каждого изображения ( рис. 2 c).
- Повторить процедуру в vivo изображений для каждого крыса последовательно учиться haMSCs продольной удержания в совместном.
Примечание: Мы предлагаем изображений животных ' флуоресцентные сигналы в естественных условиях тепловизионной системой каждые два дня в течение первой недели после инъекции и один раз каждую неделю до тех пор, пока сигнал не может быть обнаружен.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Чтобы побудить KOA модель, мм была исполнена в правом коленном суставе SD крыс (рис. 3). Восемь недель после хирургической операции, крысы были принесены в жертву и последовательный разделы коленных суставов были оценены с обеих H & Е и Safranin O/Fast зеленой окраски (рис. 4). Для H & E окрашивание, поверхность суставного хряща выставлены грубее границы в хирургии коленях чем нормальный совместное без хирургического вмешательства. Safranin-O/Fast зеленой окраски мы наблюдается снижение протеогликана (красное окрашивание) и увеличили фибриллированная коллагена (зеленый окрашивание) в совместные операции по сравнению с нормальной, который указал прогрессирование дегенеративных KOA фенотипов индуцированных хирургии. Напоминать прогрессирование человека Коа, крысы были принесены на 3 недели, 6 недель и 8 недель после мм для оценки патогенеза и определить время терапевтических вмешательств.
Помечены haMSCs был визуализирован в KOA крыса модели, оптический в vivo imaging системы. 1 ч после маркировки, помечены haMSCs выставлены круглых фигур в пробирке. Маркировка энергоэффективности достигло около 95%. После 24 часов, культивированный сделал помечены haMSCs выставлены длинные шпинделя фигур, указывающее сделал сделал не изменить способность присоединения haMSCs в пробирке (рис. 5). Восемь недель после хирургической операции, 2,5 х 106 сделал меченых haMSCs вводили в суставах с Коа. Здесь, помечены haMSCs были замечены в местных совместных от дня 0 (8 недель после операции) до день 70 пост инъекции (18 недель после операции), используя в vivo imaging системы (рис. 6).
Рисунок 1: схема операционного поля для области хирургии и инъекции мм для доставки клеток. (A) эта схема изображает хирургические района, которая выделена синим цветом. (B) эта схема указывает место инъекции в области красный кружке. Акроним определений являются следующие: мм, медиального мениска; MCL, медиальной коллатеральной связки; LM, боковой мениск; LCL, боковые связки залога; PL, связки надколенника. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: скриншоты в естественных условиях изображений. (A) параметры ключ параметров для приобретения флуоресцентного изображения выделены с красных квадратов. (B) лучистого эффективность выбирается в качестве единицы измерения флуоресценции. (C) в инструментальную палитру, регионы интереса (ROI) являются кружил для измерения эффективности флуоресценции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: процедуры хирургически индуцированной KOA. (A) воздействия колена совместного пространства. (B) внутренняя структура коленного сустава, с черной стрелки, указывающие медиального мениска. (C) расчлененных медиального мениска. (D) совместного пространства и кожи закрыты.
Рисунок 4: представитель гистологические фотографии коленных суставов и статистического анализа для OARSI счёт KOA. (A) восемь недель после хирургии мм у крыс, серийный разделы коленных суставов были оценены с H & E и O/Fast зеленый Safranin окрашивание. H & E пятнать показал толщины хряща в хирургии колена была сокращена. Safranin O/Fast зеленый окрашивание показал снизилась протеогликана (красное окрашивание) и увеличение хирургии колена, по сравнению с нормальной колена фибриллированная коллагена (зеленый окрашивание). Шкалы бар = 500 мкм. (B) статистический анализ для Оценка остеоартрита в нормальных суставов и суставов КоА (n = 3). Данные выражаются в виде mean±SEM. * указывает p < 0,05. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: морфология сделал меченых haMSCs. Яркие области, флуоресцентные и объединенного изображения haMSCs в 1 ч после маркировки отображаются на верхней панели. Яркие области, fluorescentand слияние изображений haMSCs at24 h после маркировки показаны в нижней панели. Шкалы бар = 50 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 6: В vivo изображений сделал меченых haMSCs. После инъекции 2,5 х 106 сделал меченых haMSCs представитель изображения KOA крыс отображаются. Сделал помечены haMSCs были обнаружены до 9 недель локально в суставах KOA крыс. Эта цифра была воспроизведена из публикации М Li et al8. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Прежде чем мы можем принести регенеративной стволовых клеток лечение для Коа из скамейке в постели срочно необходимы стандарты безопасности и накопление исследования стволовых клеток. Однако среды патологических заболеваний играет важную роль в сохранение и накопление пересаженных haMSCs10. Недавно наша группа продемонстрировала, что внутрисуставные инъекции haMSCs дольше сохраняются в среде патологических KOA чем сделали инъекции при нормальных условиях8. Вполне возможно, что воспалительные и дегенеративные микроокружения может набирать мезенхимальных стволовых клеток для ремонта и впоследствии в пользу сохранения введенного haMSCs1,21. Кроме того безопасность и эффективность профили haMSCs может зависеть от сроков доставки ячейки относительно серьезности Коа, так что оптимизация прогрессирование KOA в лабораторных животных будет предоставлять ценные данные для поддержки клинических испытаний. С целью напоминающие легкой до умеренной тяжести человека Коа крысы, вызванных мм разрешается разрабатывать Коа, от 3 до 8 недель. В этом исследовании морфологические изменения хрящевины оценивали гистопатологические забил 8 недель после хирургической операции, которая предлагает относительно осуществимости модель с умеренной степени Коа, чтобы исследовать эффективность и безопасность haMSCs8. Мы продемонстрировали здесь простой и осуществимым метод метка haMSCs краской far-red липофильных флуоресцентных мембраны для долгосрочной оценки предварительно клиническая эффективность.
Недостатки этого метода, что образ ткани должен быть рядом кожи и значительное количество меченных haMSCs необходимы для достаточного сигнала приобретения за счет скромных квантовой урожайность от сделал. Хотя в vivo оптических изображений системы позволяет неинвазивные продольных исследований из haMSCs накопление в KOA моделей, тенденции в ячейку число и местоположение можно различить только в целом. Анализ судьбы стволовых клеток, в частности пролиферации и дифференцировки, будут решаться также использованием судьба карт и изображений с высоким разрешением микроскопии.
В настоящее время широкий спектр методов маркировки доступны в vivo отслеживать стволовых клеток, включая радиоактивные этикетки, наночастиц и вирусных трансдукции репортер генов22,23,24. Однако радиоактивных маркировки, а также вирусная трансдукции стволовых клеток может мешать генетических свойств клеток, которые впоследствии могут повлиять на стволовых клеток распространения и выживание в естественных условиях16. Кроме того отслеживания стволовых клеток с помощью МРТ, поглощение наночастиц, как агент контракт требует улучшения пространственного разрешения через сильное магнитное поле, которое может вызывают беспокойство чувствительность этого метода25. Люминесцентные клеток красителей, таких как PKH26, CM-дии и CFSE выставку различной степени цитотоксичности и предлагают производными сравнительно ограниченный срок (до 4 недель) маркировки жировой клетки15. В противоположность этому экспонатов слабых флуоресценции в водных растворах. После объединена с мембранных липидов, равномерно рассеивает внутри клеточной мембраны и Ускоренная стабильной far-red флуоресценции19. Этикетки жизнеспособных клеток и не влияет на их распространение и функционировать18. Что еще более важно красители не передавать из помеченных клеток немеченого клетки если нет прямого мембраны взаимодействия этих клеток26. Far-red возбуждения и выбросов спектры предотвращает autofluorescent помех от окружающих тканей и обеспечивает глубокие ткани изображений в живых животных. Эти функции позволяют сделал маркировки как идеальной долгосрочного отслеживания техникой для изучения судьба имплантированных haMSCs внутри articularly. Таким образом, мы продемонстрировали надежной методологии для мониторинга сделал помечены haMSCs в течение 63 дней в крыса модель8.
В рамках протокола для отслеживания сделал помечены haMSCs в KOA мышиной модели, критические шаги для получения надежных и возможные результаты должны убедиться, что: 1) мениска сторону бедра полностью прорезать в каждой модели крыс для последовательного начала Коа, 2) Оптимизированное соотношение 10 мкл красителя против 106 клеток haMSC 50 мин, окрашивание, 3) в естественных условиях порог обнаружения для сделал меченых haMSCs находится между 104 и 105 клеток, в то время, как рекомендовано выше 106 клеток в этом протоколе.
Как только освоил эту технику, применение этого метода может использоваться для определения оптимального маршрута или дозировки для администрации MSCs в доклинических исследований. Этот протокол может быть легко адаптирована для долгосрочной оценки доклинические в vivo накопление мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из других источников, включая костный мозг и пуповинной крови. С учетом перспективных для судьбы стволовых клеток в KOA Животные модели immunohistology исследование культивированная haMSCs, таких как Ki67 для распространения8 и коллагена II для суставного хряща дифференциация27, могут быть объединены с этим техника.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Meng Li, Минь Хао и Вэнь Ван являются нынешние работники и держатели опционов группы клеточной биологии (Nasdaq: CBMG). Другие авторы заявляют никакого конфликта интересов.
Acknowledgments
Настоящее исследование было поддержано Шанхай инновационного финансирования (1402H 294300) при поддержке науки и технологии Комиссии из Шанхая муниципалитета (CN) для Вэнь Вана. Мы хотели бы поблагодарить д-ра Гуандун Чжоу (национальные ткани инженерных центр Китая) за его техническую помощь и научные рекомендации для этой рукописи. Мы также хотели бы поблагодарить г-н Huitang ся (девятого Шанхая больница) за его помощь в животных.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Matrx VMR animal anesthesia system | Midmark | VIP3000 | |
| 4-0 suture | Shanghai Jinhuan | KC439 | |
| Razor | Pritech | LD-9987 | |
| Gentamicin | Zhejiang Jindakang Animal Health Product Co., Ltd. | None | |
| 0.9% Sodium chloride solution | Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd. | H43020455 | |
| Penicillin | Shanghai Kangfu chemical pharmaceutical Co., Ltd. | None | |
| Buprenorphine | Tianjin Pharmaceutical Research Institute Pharmaceutical Co., Ltd. | None | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 16005 | Dilute to final concentration of 10% in PBS |
| EDTA | Sigma-Aldrich | E9884 | Dilute to final concentration of 20% in PBS |
| 0.1% Hematoxylin Solution, Mayer’s | Sigma-Aldrich | MHS16 | |
| 0.5% Eosin Y solution, alcoholic | Sigma-Aldrich | HT110116 | |
| Safranin O | Sigma-Aldrich | S8884 | |
| Fast Green | Sigma-Aldrich | F7258 | |
| Shandon Excelsior ESTM Tissue Processor | Thermo Fisher | A78400006 | |
| Shandon Histocentre™ 3 Tissue Embedding Center | Thermo Fisher | B64100010 | |
| Fully Automated Rotary Microtome | Leica | RM2255 | |
| DiD | Molecular Probes, Life Technologies |
V-22887 | |
| D-MEM High Glucose | Sigma-Aldrich | D5648 | |
| PBS | GIBCO, Life Technologies | 14190-144 | |
| 0.25% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-114 | |
| 10 cm Petri Dish | Corning | V118877 | |
| Centrifuge | Beckman | Optima MAX-TL | |
| Fluorescent microscope | Olympus | BX53 | |
| 0.4% Trypan Blue solution | Sigma-Aldrich | 93595 | |
| Titetamme | Virbac (Zoletil 50) | 1000000188 | |
| Zolazepam | Virbac (Zoletil 50) | 1000000188 | |
| Sterile hyposermic syringe for single use 26G | Shanghai Misawa Medical Industry | None | |
| IVIS Spectrum In Vivo Imaging System | PerkinElmer | 124262 | |
| Living Imaging 4.0 software | PerkinElmer | None |
References
- Loeser, R. F., Goldring, S. R., Scanzello, C. R., Goldring, M. B. Osteoarthritis: a disease of the joint as an organ. Arthritis Rheum. 64 (6), 1697-1707 (2012).
- Lane, N. E., Shidara, K., Wise, B. L. Osteoarthritis year in review 2016: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 25 (2), 209-215 (2017).
- Wang, W., Cao, W. Treatment of osteoarthritis with mesenchymal stem cells. Sci China Life Sci. 57 (6), 586-595 (2014).
- Burke, J., et al. Therapeutic potential of mesenchymal stem cell based therapy for osteoarthritis. Clin Transl Med. 5 (1), 27 (2016).
- Bendele, A. M. Animal models of osteoarthritis. J Musculoskelet Neuronal Interact. 1 (4), 363-376 (2001).
- Gerwin, N., Bendele, A. M., Glasson, S., Carlson, C. S. The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the rat. Osteoarthritis Cartilage. 18, Suppl 3. S24-S34 (2010).
- Janusz, M. J., et al. Induction of osteoarthritis in the rat by surgical tear of the meniscus: Inhibition of joint damage by a matrix metalloproteinase inhibitor. Osteoarthritis Cartilage. 10 (10), 785-791 (2002).
- Li, M., et al. In vivo human adipose-derived mesenchymal stem cell tracking after intra-articular delivery in a rat osteoarthritis model. Stem Cell Res Ther. 7 (1), 160 (2016).
- Zhou, B., et al. Administering human adipose-derived mesenchymal stem cells to prevent and treat experimental arthritis. Clin Immunol. 141 (3), 328-337 (2011).
- Desando, G., et al. Intra-articular delivery of adipose derived stromal cells attenuates osteoarthritis progression in an experimental rabbit model. Arthritis Res Ther. 15 (1), 22 (2013).
- Riester, S. M., et al. Safety Studies for Use of Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stromal/Stem Cells in a Rabbit Model for Osteoarthritis to Support a Phase I Clinical Trial. Stem Cells Transl Med. 6 (3), 910-922 (2017).
- Bai, X., et al. Tracking long-term survival of intramyocardially delivered human adipose tissue-derived stem cells using bioluminescence imaging. Mol Imaging Biol. 13 (4), 633-645 (2011).
- Wolbank, S., et al. Labelling of human adipose-derived stem cells for non-invasive in vivo cell tracking. Cell Tissue Bank. 8 (3), 163-177 (2007).
- Heymer, A., et al. Iron oxide labelling of human mesenchymal stem cells in collagen hydrogels for articular cartilage repair. Biomaterials. 29 (10), 1473-1483 (2008).
- Hemmrich, K., Meersch, M., von Heimburg, D., Pallua, N. Applicability of the dyes CFSE, CM-DiI and PKH26 for tracking of human preadipocytes to evaluate adipose tissue engineering. Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 117-127 (2006).
- Shim, G., et al. Pharmacokinetics and in vivo fate of intra-articularly transplanted human bone marrow-derived clonal mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 24 (9), 1124-1132 (2015).
- Chen, B. K., et al. A safety study on intrathecal delivery of autologous mesenchymal stromal cells in rabbits directly supporting Phase I human trials. Transfusion. 55 (5), 1013-1020 (2015).
- Chan, M. M., Gray, B. D., Pak, K. Y., Fong, D. Non-invasive in vivo imaging of arthritis in a collagen-induced murine model with phosphatidylserine-binding near-infrared (NIR) dye. Arthritis Res Ther. 17, 50 (2015).
- Texier, I., et al. Cyanine-loaded lipid nanoparticles for improved in vivo fluorescence imaging. J Biomed Opt. 14 (5), 054005 (2009).
- Honig, M. G., Hume, R. I. Fluorescent carbocyanine dyes allow living neurons of identified origin to be studied in long-term cultures. J Cell Biol. 103 (1), 171-187 (1986).
- Rahmati, M., Mobasheri, A., Mozafari, M. Inflammatory mediators in osteoarthritis: A critical review of the state-of-the-art, current prospects, and future challenges. Bone. 85, 81-90 (2016).
- Detante, O., et al. Intravenous administration of 99mTc-HMPAO-labeled human mesenchymal stem cells after stroke: in vivo imaging and biodistribution. Cell Transplant. 18 (12), 1369-1379 (2009).
- Hu, S. L., et al. In vivo magnetic resonance imaging tracking of SPIO-labeled human umbilical cord mesenchymal stem cells. J Cell Biochem. 113 (3), 1005-1012 (2012).
- Xia, Q., et al. Intra-articular transplantation of atsttrin-transduced mesenchymal stem cells ameliorate osteoarthritis development. Stem Cells Transl Med. 4 (5), 523-531 (2015).
- Jasmin,, et al. Optimized labeling of bone marrow mesenchymal cells with superparamagnetic iron oxide nanoparticles and in vivo visualization by magnetic resonance imaging. J Nanobiotechnology. 9, 4 (2011).
- Lehmann, T. P., et al. Coculture of human nucleus pulposus cells with multipotent mesenchymal stromal cells from human bone marrow reveals formation of tunnelling nanotubes. Mol Med Rep. 9 (2), 574-582 (2014).
- Wang, W., et al. Human adipose-derived mesenchymal progenitor cells engraft into rabbit articular cartilage. Int J Mol Sci. 16 (6), 12076-12091 (2015).
