만성 수축 부상으로 쥐에 있는 자동화 된 걸음 걸이 분석

요약

Neuropathic 동물 모델에서 고통 응답의 정확한 평가 통증 질환의 병 태 생리학을 조사 하 고 새로운 진통제 개발에 중요 한. 우리는 뒷 다리 발 자동된 보 행 분석 시스템에 의해 설치류의 감각 기능을 결정 하는 과민 하 고 객관적인 방법을 제시.

초록

폰 Frey 테스트 neuropathic 고통 동물의 감각 기능 검사에 널리 이용 되는 고전적인 방법 이다. 그러나, 그것은 주관적인 데이터와 같은 몇 가지 단점이 고 숙련 된, 경험 있는 실험의 요구 사항이 있다. 날짜 하려면, 다양 한 수정 폰 Frey 방법 개선 하지만 여전히 몇 가지 한계가 있다. 최근 보고서는 걸음 걸이 분석 neuropathic 동물에서 더 정확 하 고 객관적인 데이터를 생성 하는 건의 했다. 이 프로토콜을 쥐에 neuropathic 고통의 결정 자동화 된 걸음 걸이 분석을 수행 하는 방법을 보여 줍니다. 새 환경 순응의 몇 일 후 쥐 발자국을 밝히는 유리 바닥에 자유롭게 걸을 허용 되었다. 발자국과 걸음 걸이의 정량화 발 인쇄, 그네 시간, 발, 등 의 각도의 영역 등 다양 한 걷는 매개 변수 자동 분석 비디오 클립을 통해 수행 된 다음,

이 연구의 주요 목적은 자동화 된 걸음 걸이 분석의 방법론을 설명 하 고 간단히 폰 Frey 필 라 멘 트를 사용 하 여 고전적인 감각 테스트에서 데이터와 비교 하는 것입니다.

서론

외상, 대사 장애, 염증, 감염, 허 혈에 의해 유도 된 신경의 병 적인 변화 또는 자가 면역 질환은 때때로 neuropathic 고통, 병 변 또는 질병의 직접적인 결과로 발생 하는 통증으로 정의 되는 결과 somatosensory 시스템¹에 영향을 미치는. Neuropathic 고통을 일반적으로 견딜 수 이며 불행 하 게도, 기존의 진통제 일반적으로 생성 하지 않습니다 충분 한 고통 릴리프². Neuropathic 고통의 주요 기능은 자연과 자극 갖는 (즉, 용어인 및 통) 통증을 포함합니다. 용어인 가벼운 터치 등 따뜻한 자극 일반적으로 비-고통 스러운 자극에 나타나는 nociceptive 응답 이다. 통 유해 기계적 또는 열 자극³에 향상 된 고통 응답을 나타냅니다. 비록이 두 증상 모두 비판적으로 환자의 삶의 질 저하, 기계적 용어인 부드러운 촉각 자극에 의해 불러 일으켰다는 가장 악화 증상 부드러운 접촉은 일상 생활에서 피하기 어렵다 때문입니다.

기본 메커니즘 및 neuropathic 고통의 처리를 위한 새로운 진통제를 조사, 고통 응답의 정확한 측정은 필수적입니다. 수많은 neuropat....

프로토콜

모든 실험 통증 연구에 대 한 국제 협회의 윤리 지침에 따라 실시 했다와 충남대 (에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다 대전, 한국).

1. 좌 골 신경에 CCI 유도

1. 집 남성 ICR 마우스 제어 실내 온도 (20-25 ° C에서 유지 하는)와 습도 (40-60%), 12 h 명암 주기에서 20-25 g 무게 무료 음식에 접근 하 고 물입니다. 수술 하기 전에 적어도 일주일의 동물 관리 실에서 쥐에 대 한 새 환경 순응 기간 허용.
   1. 주택, 동안 모양 및 마우스의 동작을 관찰 하 고 비정상적인 운동 활동을 보여주는 마우스를 사용 하지 마십시오.
      참고: CCI 수술 전에 1 일 폰 Frey 필 라 멘 트를 적용 하 여 뒷 발을의 기계적 감도 측정 하 고 정상적인 기준선 값 자동된 걸음 걸이 분석을 수행. 마우스 제어 및 실험적인 그룹에 무작위로 할당 다음,.
2. 수술 당일, 2,2,2-tribromoethanol (250 mg/kg, 복 (IP))를 주입 하 여 마우스 anesthetize.
   참고: 외과 용 가운, 장갑, 마스크 등 개인 보호 장비를 착용 하십시오. <....

결과

우리 폰 Frey 테스트를 수행 하 고 CCI 수술 후 10 일 이내 CCI 쥐에서 걸음 걸이 분석을 자동화. 통계 분석에 대 한 양방향 분산 분석 (ANOVA)의 반복된 측정 전반적인 효과 결정 하 고 Dunnett의 게시물-특별 분석 실험 그룹 중 p-값을 결정 하기 위해 수행 합니다.

그림 1 에 표시 된 결과 고전 폰 Frey 테스트 데이터의 시간 과정을 나타냅니다. CCI 쥐의 (%) PWF CCI 수술 후 증가 2 일 이었고 가짜 그룹에 비해 10 일 동안. CCI 긍정적인 통제 그룹, GBP (50 mg/kg, IP, 일단 10 일 시작 1 일 수술 후 매일)에서 크게 CCI 강화 PWF 완화. 패널 A의 가짜 그룹에서 PWF (%)는 8.00 ± 수술에 대 timepoint 사전 .......

토론

현재 폰 Frey 필 라 멘 트를 사용 하 여 기계적 용어인의 측정은 가장 널리 방법 고통 동물 모델에서 보여 주기 위해 사용 촉각 과민 증. Neuropathic 고통에 대 한 동물 모델 개발을 계속, 감각 기능에 대 한 평가의 방법론이 되었습니다 또한 향상 된^8,,910,15. 그 보고서에서 그것은 이러한 수정 이전 방법에 대 한 더 빠르고, 정확 하 고 사용 하기 쉬운 대체를 제공할 수 있습니다 제안 되었습니다. 그러나, 그 방법에서 데이터 여전히 수 있습니다 제한 될 그것의 주관과 메서드를 수행 하는 기술 또는 경험의 요구에 의해. 또한, 동물 억제 폰 Frey 테스트를 수행할 때 피할 수 없는 및 따라서 구속 관련 스트레스는 동물의 고통 응답 결과 영향을 미칠 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.9% 식염수	JW 제약	N/A	약물용 차량
1ml 주사기	BD Plastipak	300013	주입 장치
2, 2, 2-트리브로모에탄올(97% 순도)	Sigma	T48402	마취
2-메틸-2-부탄올(99% 순도)	2	, 2, 2-트리브로모에탄올용	152463
Catwalk 자동 보행 분석 시스템	Noldus	N / A	aniaml 보행
크롬 catgut (4-0 두께)	AILEE	C442	Ligature
Gabapentin	Sigma	Y0001280	Analgeisc,이 연구에서 양성 대조 약물로 사용
Graefe Forceps	F.S.T	11051-10	수술
가열 패드	대신전자	M-303AT	체온 조절
ICR 마우스	삼타코	N/A	실험동물
Mersilk (3-0 두께)	ETHICON	W598H	피부 봉합 수술용 봉합사
재료 Micro-Mosquito	F.S.T	13010-12	수술기구
Micro-scissors	F.S.T	14090-09	Surgical 기구
바늘 홀더	F.S.T	12002-12	수술 기구
포비돈 요오드	Firson	N/A	수술 후 감염 방지를 위한 소독제
메스 블레이드	F.S.T	10010-00 (#10)	절개를 위한 수술 도구
메스 손잡이	F.S.T	10003-12 (#3)	절개를
위한 수술 도구Von-Frey 필라멘트	North Coast	NC12775-99	기계적 자극에 대한 감각 기능을 테스트하기 위한 측정 장치

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