이 연구는 병아리콩의 근간을 연구하는 방법론과 분자 메커니즘을 제시합니다–Rhizoctonia 바타티콜라 상호 작용. 상기 블로팅 종이 방법은 병아리콩 유전자형 반응을 빠르게 연구하는 데 유용하며, 아픈 냄비 기반 방법은 가뭄과 R. 바타티콜라 감염 및 내성 유전자형을 위한 화면을 동시에 부과하는 데 사용될 수 있다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
건조 루트 부패 (DRR) 질병은 전 세계 병아리콩 재배에 대한 새로운 생물학적 스트레스 위협입니다. 토양에 의한 곰팡이 병원체인 리조토니아 바타티콜라에의한 것이다. 문헌에서는 질병 분석에 대한 포괄적이고 상세한 단계별 프로토콜은 희소합니다. 이 문서에서는 DRR에 대한 저항성을 위해 유전자형을 신속하게 선별하기 위한 블로팅 용지 기술을 설정하는 데 관련된 단계에 대한 자세한 내용을 제공합니다. 블로팅 페이퍼 기법은 쉽고 저렴합니다. 아픈 냄비 접근법에 근거한 또 다른 방법은 자연 감염의 모방이며 질병 삼각형에 관여하는 식물, 병원균 및 환경과 같은 상호 작용하는 구성 요소를 연구하기 위해 적용 될 수 있습니다.
또한, 자연에서 DRR은 주로 작물 성장이 진행됨에 따라 토양 수분이 후퇴하는 비가 내린 병아리콩 재배 지역에서 발생합니다. 가뭄 스트레스는 DRR 질병에 병아리콩 식물을 걸리기 쉬운 것으로 알려져 있습니다. 가뭄 스트레스하에서 식물 병원체 상호 작용의 병리학 및 분자 이해는 병아리콩 세균성 수영장에서 엘리트 DRR 내성 품종의 식별을위한 길을 열 수 있습니다. 이 문서는 아픈 냄비와 후속 질병 분석의 준비를위한 단계별 방법론을 제공합니다. 전반적으로, 본 원에 제시된 정보는 연구원이 R. bataticola 곰팡이 무분큐럼을 준비하고, 이 병원체를 유지하고, 블로팅 종이 기술을 설정하고, 아픈 문화와 아픈 냄비를 준비하고, 병아리콩 식물에 있는 병원균 감염을 평가하는 것을 도울 것입니다.
서론
건조 루트 부패 (DRR)는 병아리콩1,2에서경제적으로 중요한 질병 중 하나입니다. 그것은 Rhizoctonia 바타티콜라에 의해 발생 하는 루트 특이 적인 질병 (텔레모프, 거시 포 미나 phaseolina). 감염된 식물은 측면 뿌리가 부족하고 부서지기 쉬운 타뿌리와 노란색 단풍1,3을가지고 있습니다. 가뭄 스트레스하에서 DRR은 병아리콩재배1,2,3에대한 새로운 위협으로 보고되었습니다. 더욱이, DRR발생률은1, 2,3의현장조건하에서 가뭄 스트레스하에서 악화되는 것으로 보고된다. DRR은 관개 필드4보다비가 많이 내리는 지역에서 더 널리 퍼져 있습니다. 내성 품종의 활용은 질....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
1. R. 바타티콜라 의 격리 및 저장
- 병아리콩 유전자형 및 DRR 증상의 세부 사항
- 일반적으로 건조, 취성 1 차 뿌리와 같은 전형적인 DRR 증상을 보이는 병아리콩 식물 (유전자형, JG 62)을 사용하여 껍질 아래 와 pith1,3내부의 측면 뿌리및 미세 경화증이 없는경우.
- 수거 및 세척
- 표피 층 아래 미세경화증을 가진 마른 짚 색 의 엽및 취성 1 차 뿌리와 같은 현상을 보여주는 뿌리 식물. 뿌리 뽑는 동안, 뿌리의 주요 부분은 감염된 뿌리가 취성이기 때문에 토양 내부에 남아있을 것입니다. 뿌리에 부착된 거친 토양 파편을 제거합니다. 뿌리를 따로 자르고 적절한 라벨로 종이 봉투(27.5cm x 12cm)로 수집하여 샘플 수집 상자에 넣습니다.
- 샘플을 실험실로 운반한 후 뿌리를 200mL 비커에 놓고 메쉬(직경 3mm 크기의 나일론 메쉬)로 덮어, 흐르는 수돗물로 뿌리를 철저히 씻어 토양 입자를 제거합니다.
- 역삼투압(RO) 물을 사용하여 마지막에 한 번 헹구세요.
- 표면 살균
- 메스 블레이드....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
이 연구는 가뭄 스트레스하에서 식물 병원체 상호 작용의 병리학 및 분자 이해를 촉진하기 위해 종이와 아픈 냄비 기술을 블로팅과 같은 기술을 입증하는 것을 목표로했습니다. 이를 위해 DRR 증상을 보이는 식물1,3,4는 병아리콩 밭에서 수집되었고, 곰팡이는 최면 팁 방법8을사용하여 분리되었다. R. bataticola 곰팡이 문화는 PDA 플레이트에 어두운 회색으로 나타나고 인큐베이션 후 4 일 동안 기울어진(도 1A & C)및 인큐베이션 후 5 일 동안 PDB 배지에서 회색 색으로 어둡게 나타난다(도 1B). R. 바타티콜라는 미셀리아(도
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
얼룩지는 종이 기술은 실험실 조건 하에서 병아리콩 유전자형을 검사하는 간단한 접근 방식을 제공합니다. 딥 접종을 통해 접종부하(보충 도 1)를쉽게 제어하여 현세적 기초에 대한 상호 작용의 조사를 가능하게 하고 체외 검사를 용이하게 합니다. 또한, 심지어 젊은 묘목을 사용할 수 있습니다. 5일 된 곰팡이 배양(도 1B)은식물을 감염시킬 만큼 충분한 접종을 할 수 있습니다. 액체 접종은 균골과 미세 경화증(도 1D & E)을모두 함유하고 있습니다. 루트 부패증상(도 3B)은질병을 점수매기고 내성 유전자형을 식별하는 데 사용될 수 있다. DRR 발생은 주로 가뭄 스트레스1,3,
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
우리는 공개 할 것이 없다
감사의 글
M.S.K 연구소의 프로젝트는 국립 식물 게놈 연구 핵심 자금 조달에 의해 지원됩니다. VI는 DBT-JRF(DBT/2015/NIPGR/430)를 인정합니다. 우리는 비디오 촬영 중 기술 적 도움을 준 훈련생 리시카 양, 자야첸 씨, 두르가데비 양에게 원시 데이터와 원고 파일을 비판적으로 평가해 준 것에 대해 감사드립니다. 라힘 H 타라프다르 씨와 선더 솔란키 씨가 실험실에서 도움을 주신 것에 감사드립니다. 우리는 DBT-eLibrary 컨소시엄 (DeLCON) 및 NIPGR 도서관이 공장 성장 지원 / 공간을위한 e 자원 및 NIPGR 플랜트 성장 시설에 대한 액세스를 제공하는 것을 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 곰팡이- Rhizoctonia bataticola | Pathogen inoculum | Indian Type Culture Collection No. 8365 | GenBank: MH509971.1, ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& id=1251&Itemid=1370) |
| Soilrite mix | Soil medium in the lab | Keltech Energies Limited, Bangalore, India | http://www.keltechenergies.com/ |
| 식물 성장을 지원하는 여과지 블로팅 페이 | Himedia | http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 | |
| Pot | 10cm 및 30cm 크기의 화분 | 정기적으로 사용되는 종묘장, 예를 들어, | |
| https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html 감자 포도당 한천 / 육수 | 배양 및 곰팡이 유지 | # 213400, DifcoTM, MD, USA | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| 인큐베이터 | 배양 곰팡이 | LOM-150-2, S/N AI13082601-38, MRC, 인큐베이터 및 셰이커 | |
| http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 성장 챔버 | 통제된 조건에서 식물 성장 | 모델 번호 A1000, Conviron, Canada | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| 층류 기류 | 무균 운동 | 수행 Telstar, Bio II advance, Class II 캐비닛, EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/, http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html |
| Mesh | 곰팡이 균사체 필터링 | 나일론 모기장 | 메쉬 0.6-1 mm 직경 기공 크기 |
| 오토클레이브 | 오토클레이브 매체 및 병아리콩 씨앗 | 오토클레이브 | http://www.scientificsystems.in/autoclave |
| 현미경 | 감염 시각화 곰팡이 균 | SMZ25 / SMZ18, 연구 실체 현미경, 라이카 EZ4 교육용 실체 현미경 | https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i |
| 저울 | 칭량 곰팡이 및 화학 물질 칭량 | Sartorius 전자 칭량 저울, BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | 곰팡이 염색 | 시그마 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| 아닐린 블루 | 곰팡이 염색 | Himedia | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
참고문헌
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from:
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
