Murine Chimeric Antigen Receptor (CAR)-T cell의 효율적인 생성

Rosa L. Vincent; Fangda Li; Edward R. Ballister; Nicholas Arpaia; Tal Danino

doi:10.3791/65887

이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

Murine Chimeric Antigen Receptor (CAR)-T cell의 효율적인 생성

5.3K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/65887

⸱

2024년 2월 2일

Rosa L. Vincent¹ , Fangda Li² , Edward R. Ballister¹ , Nicholas Arpaia²^,³ , Tal Danino¹^,³^,⁴

¹Department of Biomedical Engineering, Columbia University, ²Department of Microbiology & Immunology, Vagelos College of Physicians and Surgeons, Columbia University, ³Herbert Irving Comprehensive Cancer Center, Columbia University, ⁴Data Science Institute, Columbia University

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 레트로바이러스 벡터 생산과 쥐 T 세포 transduction을 간소화하여 마우스 CAR-T 세포의 효율적인 생성을 촉진합니다.

초록

키메라 항원 수용체(CAR)-T 세포를 활용한 조작된 세포 치료제는 혈액 악성 종양 환자에게 놀라운 효과를 보였으며 현재 다양한 고형 종양 치료를 위한 개발이 진행 중입니다. 지금까지 새로운 CAR-T 세포 산물의 예비 평가는 주로 면역 결핍 마우스를 사용한 이종 이식 종양 모델에서 이루어졌습니다. 이 접근법은 실험 환경에서 인간 CAR-T 세포의 성공적인 생착을 촉진하기 위해 선택되었습니다. 그러나 종양과 CAR-T 세포가 동일한 마우스 균주에서 파생된 합성 마우스 모델을 사용하면 기능적 면역 체계 및 포괄적인 종양 미세환경(TME)의 맥락에서 새로운 CAR 기술을 평가할 수 있습니다. 여기에 설명된 프로토콜은 레트로바이러스 형질도입 및 체외 T 세포 배양을 위한 표준화된 방법을 제시하여 마우스 CAR-T 세포 생성 과정을 간소화하는 것을 목표로 합니다. 이 프로토콜에 설명된 방법은 면역 능력 시스템에서 새로운 CAR 기술의 일상적인 평가를 가능하게 하기 위해 이 연구에서 사용된 것 이외의 다른 CAR 구조에도 적용할 수 있습니다.

서론

키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 입양 T 세포 치료제는 적응 면역 체계의 힘을 활용하여 항원 양성 암세포를 특이적으로 표적으로 삼고 제거함으로써 암 면역 요법 분야에 혁명을 일으켰습니다¹. B세포 악성종양을 표적으로 하는 CAR-T 세포 치료제의 성공은 임상적으로 검증되었지만, 동물 모델에서 수행된 전임상 연구는 고형 종양을 표적으로 하는 새로운 CAR의 개발에 여전히 중요합니다. 그러나 지금까지 고형 종양 적응증에서 제한적인 임상적 효능이 입증되었으며, 개별 전임상 모델이 살아있는 의약품의 약력학 및 임상적 효능을 정확하게 예측하지 못한다는 것이 점점 더 분명해지고 있습니다 ^2,3. 따라서 연구자들은 CAR-T 세포 제품의 전임상 연구를 확대하여 인간 및 쥐 암의 이종이식 및 합성 유전자 모델에서 각각 병행 평가를 포함하기 시작했습니다.

인간 종양과 T 세포를 면역 결핍 마우스에 생착하는 이종이식 모델과 달리, 합성 유전자 모델은 기능적 면역 체계의 맥락에서 CAR-T 세포 반응을 검사할 수 있습니다. 특히, 합성 종양을 보유한 면역 유능한 마우스는....