Streptozocine behandeling: een zebravis model van type 1 diabetes mellitus

- Type 1 diabetes mellitus is een menselijke ziekte waarbij het immuunsysteem insuline vernietigt waardoor bètacellen in de alvleesklier worden aanmaken. Streptozocine kan type 1 diabetes mellitus bij zebravissen veroorzaken. Verdoof eerst een vis in een oplossing van 2-fenoxyethanol in viswater. Neem de vis en plaats deze op een Petrischaaltje, ventrale kant naar boven gericht. Bereken de dosis streptozocine op basis van 0,35 milligram per gram vis.

Dien de streptozocine toe door intraperitoneale injectie onder de bekkengordel aan de ventrale kant van de zebravis. Streptozocine is structureel vergelijkbaar met N-acetylglucosamine, een ligand dat de GLUT2-receptor op pancreas bètacellen bindt, wat leidt tot afscheiding van insuline. Streptozocine bindt dus aan GLUT2-receptoren die aanwezig zijn op bètacellen van de pancreas die het in de cellen transporteren.

Bij het betreden van de bètacellen activeert streptozocine een immuunrespons die leidt tot het vrijkomen van autoantigenen. De autoantigenen zorgen ervoor dat het immuunsysteem bètacellen als vreemd herkent en vernietigt, wat leidt tot lagere insulinespiegels. Dien herhaalde doses streptozocine toe op dag drie en vijf, gevolgd door wekelijkse doses, één om de zeven dagen om de immuunrespons te behouden.

In het volgende voorbeeld zullen we een zebravismodel van type 1 diabetes mellitus genereren. Om zebravissen met diabetes mellitus te genereren, bereidt u een hersteltank voor met normaal viswater en een verdovingstank met viswater met een verdunning van 1 tot 1.000 2-fenoxyethanol. Bereid onder een zuurkast een 0,3% oplossing van streptozocine of STZ door 6 milligram STZ toe te voegen aan 2 milliliter.

Vul in een aparte buis voldoende zoutoplossing voor controlevissen. Vul een halve CC-spuit uitgerust met een 27 en 1/2 gauge naald met de STZ, of regeloplossingen, zodat er geen luchtbellen worden opgesloten. Verdoof een enkele vis door deze in verdovingswater te plaatsen en te wachten tot de zwembeweging stopt, ongeveer één tot twee minuten.

Eenmaal verdoofd, plaatst u de vis kort op een papieren handdoek om overtollig water op te nemen. Plaats de vis vervolgens in een weegboot en weeg deze. Plaats vervolgens de vis op een stevig oppervlak. Steek vervolgens de naald langs de schuine kant in het achterste aspect van het ventrale peritoneum en injecteer ofwel 0,35 milligram per gram STZ of een gelijkwaardig volume controleoplossing in de peritoneale holte van de vis.

Na injectie plaatst u de vis in de terugwinningswatertank en controleert u deze op normale zwemactiviteit. Na het injecteren van voldoende vis voor het experiment, breng u ze over naar normale levende tanks en handhaaft u deze op een temperatuur van 22 tot 24 graden Celsius. De verlaagde temperatuur is van cruciaal belang voor een efficiënte inductie van hyperglykemie. Om een langdurige toestand van zeer hoge hyperglykemie te induceren, volgt u een schema van frequente injecties tijdens de inductiefase, gevolgd door wekelijkse onderhoudsinjecties zoals hier getoond.