Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Type 1 diabetes mellitus er en menneskelig sykdom der immunsystemet ødelegger insulin som lager betaceller i bukspyttkjertelen. Streptozocin kan indusere type 1 diabetes mellitus i sebrafisk. Først bedøv en fisk i en løsning av 2-fenoksyetanol i fiskevann. Ta fisken og legg den på en Petri-tallerken, ventral side vendt oppover. Beregn dosen av streptozocin basert på 0,35 milligram per gram av fiskens vekt og fortynn den i saltoppløsning.
Administrer streptozocin ved intraperitoneal injeksjon under bekkenbeltet på ventralsiden av sebrafisken. Streptozocin er strukturelt lik N-acetylglukosamin, en ligand som binder GLUT2-reseptoren på bukspyttkjertel betaceller, noe som fører til sekresjon av insulin. Dermed binder streptozocin seg til GLUT2-reseptorer som er tilstede på bukspyttkjertel betaceller som transporterer det inne i cellene.
Når du går inn i betacellene, utløser streptozocin en immunrespons som fører til frigjøring av autoantigener. Autoantigens får immunsystemet til å gjenkjenne betaceller som fremmede og ødelegge dem som fører til reduserte nivåer av insulin. Administrer gjentatte doser streptozocin på dag tre og fem, etterfulgt av ukentlige doser, en hver syvende dag for å opprettholde immunresponsen.
I følgende eksempel vil vi generere en sebrafiskmodell av type 1 diabetes mellitus. For å generere sebrafisk med diabetes mellitus, forbered en utvinningstank med normalt fiskevann og en bedøvelsestank med fiskevann med en 1 til 1000 fortynning av 2-fenoksyetanol. Under en avtrekkshette, lag en 0,3% løsning av streptozocin eller STZ ved å tilsette 6 milligram STZ til 2 milliliter 0,09% natriumklorid og umiddelbart plassere løsningen på is.
I et eget rør, aliquot nok saltvann til kontrollfisk. Fyll en halv CC-sprøyte utstyrt med en 27 og 1/2 gauge nål med STZ, eller kontrollløsninger, og sørg for at ingen luftbobler er fanget. Bedøvelse av en enkelt fisk ved å plassere den i bedøvelsesvann og vente til svømmebevegelsen opphører, omtrent ett til to minutter.
Når fisken er bedøvet, legg deretter fisken på et papirhåndkle for å absorbere overflødig vann. Legg deretter fisken i en veiebåt og vei den. Legg deretter fisken på et fast underlag. Sett deretter nålen forbi skråkanten inn i det bakre aspektet av det ventrale bukhinnen og injiser enten 0,35 milligram per gram STZ eller et tilsvarende volum kontrollløsning i bukhulen på fisken.
Etter injeksjon, plasser fisken i utvinningsvanntanken og overvåk den for normal svømmeaktivitet. Etter å ha injisert nok fisk til eksperimentet, overfør dem til normale oppholdstanker og vedlikehold ved en temperatur på 22 til 24 grader Celsius. Den reduserte temperaturen er avgjørende for effektiv induksjon av hyperglykemi. For å indusere en langvarig tilstand av svært høy hyperglykemi, følg en tidsplan for hyppige injeksjoner under induksjonsfasen etterfulgt av ukentlige vedlikeholdsinjeksjoner som vist her.
