Streptozocine behandeling: een zebravis model van type 1 diabetes mellitus

Overview

Deze video beschrijft de techniek van het maken van een zebravismodel voor type 1 diabetes mellitus met behulp van het medicijn Streptozocine, om de pathofysiologie van diabetische complicaties en metabolisch geheugen te bestuderen.

Protocol

1. Generatie Zebravis met Diabetes mellitus, DM Fish

1. Bereid zowel herstel- als verdovingswatertanks voor. Terugwinningswater is normaal viswater. Voeg voor verdovingswater voldoende 2-fenoxyethanol toe, zodat een verdunning van 1:1.000 in normaal viswater wordt bereikt.
2. Bereid een 0,3% oplossing (in een zuurkast) streptozocine (STZ) door 6 mg STZ toe te voegen aan 2 ml 0,09% natriumchloride en plaats de oplossing onmiddellijk op ijs . Dit biedt voldoende injectieoplossing voor de injectie van ongeveer 20 vissen in 20 minuten. Als u de markering van 20 minuten overschrijdt, stop dan en maak een nieuwe STZ-oplossing voordat u doorgaat. In een aparte tube aliquot voldoende zoutoplossing voor het beheersen van vissen. Zodra de STZ is oplosbaar, vereisen alle volgende stappen geen gebruik van de zuurkast.
3. Vul een 1/2 cc spuit uitgerust met een 27 1/2 gauge naald met de STZ of besturingsoplossingen om ervoor te zorgen dat er geen luchtbellen worden opgesloten.
4. Verdoof elke vis afzonderlijk door de vis in verdovingswater te plaatsen en wacht tot hun zwembeweging stopt (1-2 minuten).
5. Eenmaal verdoofd, plaats de vis kort op een papieren handdoek om overtollig water te absorberen, plaats de vis in een weegboot en meet de massa van de vis.
6. Plaats de vis op een stevig oppervlak (petrischaaldeksel) voor injectie.
7. Injecteer de STZ of controleoplossing in de peritoneale holte van de vis door de naald langs de schuine kant in het achterste aspect van het ventrale peritoneum te steken.
8. 0,35 mg/g (350 mg/kg) STZ moet aan elke vis worden geleverd en het volume van de vereiste 0,3% oplossing kan op de volgende manier worden berekend.
   1. Vermenigvuldig de massa van de vis (g) met 0,35 om de vereiste hoeveelheid STZ in mg op te leveren.
   2. deel het product dat hierboven wordt gegenereerd door 3 om het volume van de 0,3% oplossing die nodig is voor injectie in μl op te leveren.
      Monster: Voor een vis van 0,5 g : a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) .0175/3= 0,058 ml = 58 μl.
      Hetzelfde volume zonder de STZ zou worden geïnjecteerd voor een controlevis. Er moet een blad worden gegenereerd voor de te injecteren hoeveelheden per vismassa en moet worden gebruikt voor snelle referentie.
9. Plaats de vissen na injectie in de terugwinningswatertank en controleer ze op normale zwemactiviteit. Zodra dit is bereikt, worden de vissen overgebracht naar een normale levende tank die wordt gehandhaafd bij het verlaagde temperatuurbereik van 22 ° C - 24 ° C. Deze verlaagde temperatuur is van cruciaal belang voor een efficiënte inductie van hyperglykemie (diabetes mellitus, DM).
10. Hoewel hyperglykemie wordt gedetecteerd binnen 24 uur na de eerste injectie, om een langdurige toestand van zeer hoge hyperglykemie te induceren, vereisen de zebravissen een frequente injectie-inductiefase gevolgd door wekelijkse onderhoudsinjecties zoals hieronder weergegeven.

Week 1: 3 injecties (Dag 1, 3, 5), Week 2: 1 injectie (Dag 12), Week 3: 1 injectie (Dag 19), Week 4: (Dag 21) Voer een rentetest uit.

Op dit punt worden de zebravissen beschouwd als in een langdurige staat van hyperglykemie en vertonen ze de diabetische complicaties van retinopathie, nefropathie en ook verminderde vinregeneratie. Deze worden DM-vissen genoemd. Bovendien kan de vis indien gewenst in de hyperglycemische toestand worden gehouden met wekelijkse onderhoudsinjecties. Ongeveer 5% overlijden tijdens dit proces moet worden verwacht.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.