포르말린 고정 파라핀 포매 종양 샘플의 준비: 비소세포폐암(NSCLC)의 조직 및 세포학 샘플을 보존하기 위한 프로토콜

JoVE Encyclopedia of Experiments

암 연구

0 조회수 • 3:39 분 • April 30th, 2023

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- 먼저, 폐 종양 표본을 조직 표본 또는 기관지 세척제(기도 내부의 세포를 포함하는 식염수 세척)에서 세포학 표본으로 얻습니다. 조직 샘플을 준비하려면 새로 절부된 폐 조직을 임베딩 카세트로 옮깁니다. 적절한 농도의 포르말린으로 조직을 고정하고 보존합니다.

세포학 검체를 준비하려면 먼저 기관지 세척제를 DL-dithiothreitol로 처리하여 균질화합니다. 분리기를 분리하여 상층액을 제거합니다. 다음으로 점액을 액화하고 세포를 분리하기 위해 점액 용해액으로 처리합니다. 세포를 펠릿화하고 포르말린으로 고정하는 원심분리기. 적절한 세포 차단 준비 시약으로 세포를 처리하여 작은 펠릿 부피로 작업하면서 샘플을 농축합니다.

펠릿을 임베딩 카세트로 옮깁니다. 두 가지 샘플 유형을 일련의 등급이 매겨진 알코올 수조를 통해 탈수하여 처리합니다. 적절한 세척제를 사용하여 알코올을 제거한 다음 왁스 침투를 수행합니다. 카세트를 액체 파라핀 왁스에 넣고 응고시킵니다. 이것은 조직 주위에 층을 형성하여 표본을 제자리에 고정합니다.

마이크로톰을 사용하여 얇게 썬 부분을 얻습니다. 접착을 용이하게 하기 위해 양전하를 띤 유리 슬라이드에 섹션을 놓습니다. 건조하고 염색하여 현미경으로 슬라이드를 관찰하십시오. 다음 프로토콜에서는 폐 종양 조직 및 세포학 샘플에서 검체 준비 기술을 보여줍니다.

먼저 종양 조직을 카세트에 10% 중성 완충 포르말린으로 고정하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 카세트를 파라핀에 삽입합니다. 용융된 파라핀으로 채워진 곰팡이 안에 침투된 조직을 삽입합니다. 파라핀이 응고될 때까지 조직을 금형에 그대로 두십시오. 그런 다음 마이크로톰을 사용하여 파라핀이 포함된 조직을 3마이크로미터 두께로 절단합니다.

파라핀 리본을 양전하를 띤 유리 현미경 슬라이드로 옮깁니다. 그런 다음 슬라이드를 섭씨 37도에서 1시간 동안 건조시킵니다. 먼저 기관지 세척액을 방부액에 모으십시오. 세척액을 50ml 원추형 튜브로 옮깁니다. DL-디티오트레이톨 2g을 넣고 30분 동안 튜브를 소용돌이치십시오. 그런 다음 실온에서 5분 동안 250회 g으로 원심분리합니다.

상층액을 제거하고 점액 용해액 10ml를 첨가합니다. 샘플을 중간 속도로 20분 동안 흔든 다음 실온에서 5분 동안 250배 g으로 원심분리합니다. 그 후, 상등액을 제거하고 세포 펠릿을 10% 중성 완충 포르말린이 함유된 수집 튜브에 증착합니다.

세포 블록 준비제 4방울을 추가합니다. 세포 펠릿을 카세트로 옮깁니다. 파라핀 포매 및 절단을 위해 이전에 종양 조직 샘플을 준비하기 위해 설명한 프로세스를 사용하여 세포 펠릿을 고정합니다.

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