파라핀 함유 조직 절편의 H&E 염색: 헤마톡실린과 에오신 염료의 조합을 사용하여 간 조직 절편을 시각화하는 차등 염색 기법

0 views • 5:00 min • July 8th, 2025

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파라핀 포매 조직 절편이 포함된 유리 슬라이드를 채취하여 헤마톡실린 및 에오신 염색을 시작합니다. 슬라이드를 조직 주변의 파라핀층을 용해시키는 유기 용매인 자일렌이 함유된 탈파라핀화 용액에 담그고 후속 단계에서 얼룩에 접근할 수 있도록 합니다.

자일렌을 제거하기 위해 조직 절편을 무수 알코올로 처리합니다. 감소하는 알코올 농도에 조직을 담그십시오. 이 단계는 수용성 염료와의 상용성을 높이기 위해 알코올을 물로 대체하여 조직을 재수화합니다.

산화된 형태로 매염제(금속 양이온)에 결합하는 염기성 헤마트실린으로 조직을 염색합니다. 이 복합체는 게놈의 핵산에 정전기적으로 결합하여 핵을 보라색으로 염색합니다.

염색된 절편을 산성 분화 용액에 담그고 세포질에서 과도한 헤마톡실린을 제거하여 염료 보유 핵을 뚜렷하게 보이게 합니다. 유리산을 중화시키기 위해 알칼리성 블루잉제로 조직을 처리합니다. 이렇게 하면 보라색 염료 색상이 파란색으로 퇴행하여 핵 디테일이 향상됩니다.

슬라이드를 산성 에오신 용액에 담가 세포질의 기본 단백질 성분과 결합 조직 섬유를 빨간색에서 분홍색 음영으로 염색합니다. 과도한 에오신을 제거하기 위해 알코올로 조직을 처리하십시오. 조직을 탈수하기 위해 농도를 증가시키는 에탄올을 사용하십시오. 슬라이드를 자일렌에 담가 남아 있는 시약을 제거합니다.

이미징 시 조직 절편의 세포는 투명한 파란색 핵과 분홍색 세포질 영역을 보여줍니다.

슬라이드를 100% 자일렌에 매번 15분 동안 두 번 담가 탈파라핀합니다. 그런 다음 에탄올 구배를 통해 슬라이드를 재수화합니다. 각 용액에 대해 액체가 슬라이드에서 깨끗하게 흘러나올 때까지 담그고 담그면 2초 동안 8-10회 담그십시오. 슬라이드를 100% 여과된 Harris 헤마트실린에 4분 동안 넣습니다.

4분 후 탈이온수가 담긴 용기에 빠르게 다시 옮깁니다. 탈이온수를 섹션에서 가장 멀리 떨어진 용기의 뒤쪽 모서리로 흘립니다. 물이 더 이상 보라색이 아닐 때까지 주기적으로 용기를 비우십시오.

구즈넥 조명을 사용하여 해부 현미경에서 헤마톡실린 강도를 빠르게 확인합니다. 추가 염색이 필요한 경우 슬라이드를 100% 헤마톡실린으로 1분 동안 되돌립니다.

원하는 헤마트실린 염색이 얻어지면 슬라이드를 0.05% 염산에 두 번 담근 다음 즉시 깨끗한 탈이온수가 담긴 용기로 다시 옮깁니다. 용기를 비우고 물을 두 번 다시 채웁니다.

슬라이드를 각각 30초 동안 95% 에탄올이 담긴 두 개의 용기에 옮깁니다. 슬라이드를 에오신 Y 플록신-B 용액에 2분 동안 넣습니다.

2분 후 슬라이드를 이전 95% 에탄올 용기로 다시 옮긴 다음 해부 현미경으로 색상의 강도를 확인합니다. 염색이 충분하지 않으면 30초 동안 에오신 용액으로 되돌립니다. 필요에 따라 반복합니다.

원하는 강도의 염색이 얻어지면 슬라이드를 100% 이소프로판올로 15초 동안 옮깁니다. 신선한 100% 이소프로판올로 교체하고 슬라이드를 이소프로판올에 다시 15초 동안 넣습니다. 총 6번의 이소프로판올 세척에 대해 이 과정을 반복합니다.

100% 자일렌에 3분 동안 담근 후 슬라이드 1개를 제거하고 절편을 덮을 만큼 충분한 마운팅 매체를 추가한 다음 슬라이드를 100% 자일렌에 담그십시오.

슬라이드에 커버슬립을 바르고 가는 선만 보일 때까지 종이 타월에 여분의 장착 매체를 닦아냅니다. 그런 다음 티슈를 자일렌에 담그고 슬라이드 뒷면을 닦아 떨어진 배지를 제거합니다.

슬라이드를 판지 조각처럼 견고하지만 움직이는 표면에 평평하게 놓고 자일렌이 후드에서 10분 동안 증발하도록 합니다. 슬라이드를 실온에서 밤새 방치하여 이미징 전에 장착 매체가 경화되도록 합니다.

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Last updated: 11 July 2026