Three-chambered Array-based Impedance Assay: 전기 임피던스를 측정하여 암세포의 침습 가능성을 평가하는 실시간 분석 기법

암 관련 간질 세포는 조직 기저막에 상주하는 전이성 종양 세포를 유발할 수 있는 화학적 요인을 분비합니다. 결과적으로 암세포는 기저막을 침범하여 조직의 세포외 공간으로 이동합니다.

시험관 내에서 암세포의 침습 능력을 측정하려면 여러 개의 3챔버 어레이가 있는 멀티웰 플레이트로 시작합니다. 각 어레이에서 하단 챔버에는 간질 세포의 부착 배양이 있습니다. 융합 임피던스 측정 미세 전극(세포의 전기적 활동을 측정하는 소형 전극)이 있는 상단 챔버는 전극 위에 존재하는 세포외 매트릭스 코팅 미세 다공성 막에 부착되는 암세포로 덮여 있습니다.

임피던스 기반 분석기에서 배양하는 동안 간질 세포는 암세포 쪽으로 이동하는 화학주성 인자를 배지로 방출합니다. 이러한 요인은 중간 챔버의 하단에 존재하는 반투막을 통해 이동합니다.

간질 세포 분비 인자는 부착된 암세포에게 침습성 표현형으로 변형되도록 신호를 보냅니다. 이에 대한 반응으로 침습성 세포는 미세 다공성 막을 통해 이동하여 막의 반대쪽에 있는 삽입된 전극에 도달합니다.

시간이 지남에 따라 더 많은 암세포가 전극에 달라붙으면서 세포의 전류 흐름을 방해하는 세포 임피던스를 유발합니다. 세포 임피던스의 측정은 암세포의 침습 가능성을 나타냅니다.

3개의 멸균 챔버를 모두 조직 배양 후드에 놓습니다. 하부 챔버의 짧은 쪽에 있는 손잡이를 찾고 손잡이가 실험자를 향하도록 하부 챔버의 방향

을 지정합니다.

기포를 형성하지 않고 90마이크로리터의 배지에 30,000 내지 50,000개의 세포를 하부 챔버의 각 웰에 추가합니다. 세포 운동성에 대한 양성 대조군으로 2개의 하부 챔버에서 태아 소 혈청 보충 배지 5%를 사용하고 음성 대조군으로 0% 혈청 보충 배지를 사용합니다.

후드에서 90-10분 동안 가라앉힌 후 하부 챔버를 15도 회전합니다. 그런 다음 중간 챔버를 위에 놓아 하단 챔버의 손잡이가 중간 챔버의 노치로 미끄러지도록 합니다. 어셈블리의 각 긴 면에서 딸리는 소리가 들릴 때까지 챔버를 수직으로 아래쪽으로 밉니다.

160마이크로리터의 무혈청 배지를 중간 챔버의 모든 웰에 추가합니다. 웰이 채워진 후 돔 모양의 메니스커스가 보이는지 확인하고 전극이 아래를 향하도록 하는 상단 챔버를 중간 챔버에 배치하여 중간 챔버와 상단 챔버의 파란색 점을 정렬합니다. 어셈블리의 긴 쪽 각각에서 딸깍 소리가 들릴 때까지 챔버를 수직으로 아래로 밉니다.

20-50마이크로리터의 무혈청 배지를 상단 챔