0 조회수 • 3:17 분 • July 8th, 2025
배지 및 연속적으로 희석된 수용체 파괴 효소 처리된 항혈청을 포유류 세포 단층에 추가하여 비특이적 바이러스 결합을 방지합니다.
인플루엔자 바이러스 현탁액을 추가합니다. 바이러스 단백질에 특이적인 항혈청 항체는 결합하여 바이러스를 중화하고 세포 침입을 방지합니다.
낮은 중화 항체 농도 또는 비중화 항체는 비효율적인 바이러스 항원 결합을 가능하게 하여 바이러스가 세포 수용체에 부착될 수 있습니다.
미디어를 버립니다. 셀룰로오스 함유 매체를 도포하여 반고체 오버레이를 형성합니다.
바이러스는 숙주 세포 기계를 사용하여 바이러스 입자를 형성하고 세포 용해를 일으킵니다.
오버레이는 바이러스 이동을 제한하여 국소 감염을 촉진하고 세포 단층에 구멍을 만듭니다.
오버레이를 제거합니다. 세포를 고정하고 투과시킵니다.
완충액으로 씻으십시오. 투과화된 세포 내에 바이러스 항원에 결합하는 항체를 추가합니다.
1차 항체에 결합하는 피펫 양 고추냉이 과산화효소 접합 2차 항체.
과산화효소 기질과 과산화수소를 도입하여 파란색 제품을 만듭니다.
항혈청 희석액에 대해 바이러스에 감염된 세포 집단을 정량화하기 위한 이미지 웰
.중화 역가를 결정하기 위해 감염된 세포 집단의 특정 감소를 나타내는 항혈청 희석액을 식별합니다.
바이러스 중화를 수행하려면 2-3일 전에 세포 단층을 준비한 다음 플레이트의 각 웰에 50마이크로리터의 VGM을 추가합니다. 11열과 12열은 각각 바이러스 대조군과 세포 대조군에 사용합니다. 수용체 파괴 효소 또는 RDE 처리 혈청의 1/20 희석액 50마이크로리터 분취량을 열 1 내지 10의 첫 번째 행에 추가합니다.
행A에서 행 H로 50마이크로리터를 옮기고 행 H에서 50마이크로리터를 버려 2배 연속 희석을 수행합니다. 그런 다음 세포 대조군 컬럼의 각 웰에 50마이크로리터의 희석제를 추가합니다. 세포 대조군 컬럼을 제외한 플레이트의 각 웰에 50마이크로리터의 바이러스를 추가합니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 2-3시간 동안 배양합니다. 그런 다음 접종물을 제거하고 각 웰에 오버레이를 추가합니다. 플레이트를 방해받지 않고 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 그런 다음 플레이트를 고정하고 염색합니다.
중화를 정량화하려면 평판 스캐너의 스캐닝 영역에 웰 플레이트를 놓습니다. 플레이트를 스캔하고 웰 플레이트 리더 소프트웨어를 실행하여 필요한 바이러스 역가를 계산합니다.
본 논문은 포유류 세포 단일층을 사용하여 바이러스 중화를 정량화하는 방법을 설명합니다. 이 과정은 수용체 파괴 효소로 처리된 항혈청을 적용한 후, 이어지는 바이러스 감염 수준을 측정하는 단계로 구성됩니다.
정량적 바이러스 중화 분석은 항바이러스 치료제 개발에서 항체 효능을 평가하는 데 중요한 데이터를 제공합니다. 이 이미징 기반 방법은 기능적 중화 역가를 측정함으로써 항바이러스 발굴 프로그램의 표적 검증 및 리드 물질 식별을 지원합니다. 본 분석법은 항체 결합과 기능적 바이러스 억제 간의 연관성을 밝힘으로써 기전적 리스크를 제거하며, 개발 초기 단계에서 추진 또는 중단 여부를 결정하는 근거를 제공합니다.
본 분석법은 초기 히트(hit) 검증부터 리드 최적화까지의 항바이러스제 발굴 워크플로우에 적합하며, 데이터 기반의 진행 결정을 지원합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026