인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과

본 혈구응집 억제 시험의 전반적인 목적은 관심 대상이 되는 특정 바이러스에 대한 항체가를 측정하는 것입니다. 이 방법은 백신으로 매개된 면역력 및 다양한 인구 집단, 연령대 및 환자군 전반의 보호 효과에 관한 백신학 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 정확도가 높으며 중화 항체의 존재 여부에 따른 항체가를 빠르게 결정할 수 있다는 점입니다.

이 방법은 인간 항체 역가에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 마우스 혈청이나 배양 상청액의 항체 역가와 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다. 먼저 96-웰 마이크로타이터 플레이트에 적절한 실험 정보를 라벨링하십시오. 그 다음 플레이트를 수직 방향으로 세우고 멀티채널 파이펫을 사용하여 가장 하단 뒷줄의 희석 행 첫 번째 웰을 제외한 모든 웰에 25 µL의 PBS를 추가하십시오.

새로 조제한 목적 항원 용액 50 µL를 역적정 행의 첫 번째 웰에 넣고, 이어서 RDE 처리된 혈청 시료 25 µL를 상위 10개 행의 첫 번째 웰들에 각각 추가합니다. 양성 대조군으로 적절한 항혈청 25 µL를 11번째 행의 첫 번째 웰에 추가합니다. 그 다음, 각 행의 첫 번째 웰에서 다음 웰로 25 µL씩 옮겨 2배 연속 희석을 수행합니다.

각 희석 단계마다 10~15회 피펫팅하고, 마지막 웰의 최종 25 µL는 버립니다. 다음으로, 1행부터 11행까지의 각 웰에 항원 용액 25 µL를 첨가하고, 역적정 행의 각 웰에는 PBS만 25 µL 첨가합니다. 혼합을 위해 플레이트의 네 면을 조심스럽게 10회씩 탭합니다.

그 다음 플레이트를 덮고 상온에서 30분 동안 방치합니다. 배양이 끝나면 각 웰에 적혈구 용액 50 µL를 첨가하고 플레이트를 가볍게 두드려 섞어줍니다. 다시 플레이트를 덮고 표에 명시된 사용 종에 따라 적혈구를 배양합니다.

플레이트에 적혈구를 첨가한 후, 분석에 사용된 혈액 유형에 맞는 적절한 배양 시간을 준수하십시오. 배양 시간이 너무 짧거나 길면 결과 해석이 부정확해질 수 있습니다. 배양 시간이 종료되면, 플레이트를 90도로 기울인 상태로 25초 동안 유지하여 혈구 응집 여부를 평가하고, 플레이트가 기울어진 상태에서 96웰 플레이트의 출력된 도식에 각 웰의 결과를 표시하십시오.

본 실험에서는 2015-24 인플루엔자 시즌 이전에 influenza A/H1N1/California/2009, A/H3N2/Texas/2012 및 B/Massachusetts/O2/2012를 함유한 불활성화 3가 인플루엔자 백신을 접종받은 26명의 건강한 지원자를 대상으로 백신으로 유도된 항체 반응을 평가하였습니다. A/H3N2/Switzerland/2013 및 A/H3N2/Texas/2012 바이러스 주에 대해 교차 반응성 면역 반응이 관찰되었으며, influenza A/H3N2/Switzerland/2013에 대한 기하 평균 혈구 응집 억제 역가와 유도된 혈청 보호 효과는 influenza A/H3N2/Texas/2012에 비해 유의하게 낮았습니다. 백신 접종 후, A/H3N2/Switzerland/2013 주가 백신에 포함되어 있지 않았음에도 불구하고 두 주 모두에 대한 항체 역가가 증가하였습니다.

바이러스 헤마글루티닌은 적혈구 응집에 있어 종 의존적인 잠재력을 보여줍니다. 흥미롭게도, 기니피그 혈액은 인플루엔자 B와 적절히 응집되지 않으며, 칠면조 혈액은 높은 역가와 낮은 교차 반응성으로 응집될 잠재력이 있습니다. 이 기술을 숙달하면, 적절히 수행했을 때 3시간 이내에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 수행할 때는 바이러스의 혈구응집 과정 중 비특이적 억제제 및 비특이적 결합을 불활성화하기 위해 혈청을 RDE로 처리하는 것이 중요하다. 이 절차 이후에는 ELISA와 같은 다른 방법을 수행하여 개별 병원체 특이적 면역글로불린의 역할에 관한 추가적인 질문에 답할 수 있다. 개발 이후, 이 기술은 바이러스 면역학 분야의 연구자들이 다양한 연령대의 건강한 환자 및 면역 억제 환자에서 백신 관련 면역에 대한 이해를 더욱 넓힐 수 있는 길을 열어주었다.

이 영상을 시청하고 나면, 대규모로 인플루엔자 균주 특이적 항체 역가를 정량화하기 위한 혈구응집 억제 시험을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 바이러스 항원, 동물 혈액 및 인간 혈청 샘플을 다루는 작업은 매우 위험할 수 있으며, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 BSL2 실험실에서 작업하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.