인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과

이 혈구응집억제 분석법의 전반적인 목표는 관심 있는 특정 바이러스에 대한 항체 역가를 측정하는 것입니다. 이 방법은 다양한 인구 집단과 다양한 연령 및 환자 그룹 내에서 백신 매개 면역 및 보호에 대한 백신학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기법의 주요 장점은 정확하고 중화 항체의 존재 여부를 빠르게 역가를 측정할 수 있다는 것입니다.

이 방법은 인간 항체 역가에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만, 마우스 혈청에 대한 항체 역가와 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다. 먼저 96웰 마이크로타이터 플레이트에 적절한 실험 정보를 라벨링합니다. 그런 다음 플레이트를 수직 방향으로 돌리고 멀티 채널 피펫을 사용하여 하단 후면 적정 열의 첫 번째 웰을 제외한 모든 웰에 25마이크로리터의 PBS를 추가합니다.

새로 준비된 관심 항원 용액 50마이크로리터를 역 적정 열의 첫 번째 웰에 추가한 다음 RDE 처리된 혈청 샘플 25마이크로리터를 상위 10개 열의 첫 번째 웰에 추가합니다. 25마이크로리터의 적절한 항혈청을 11번째 줄의 첫 번째 웰에 양성 대조군으로 추가합니다. 각 행의 첫 번째 웰에서 연속적인 웰로 25마이크로리터를 이송하여 연속적인 2배 희석을 수행합니다.

각 희석 단계에 대해 10-15회 피펫팅을 위아래로 수행하여 마지막 웰에서 최종 25마이크로리터를 버립니다. 다음으로, 1열에서 11행까지의 각 웰에 항원 용액 25마이크로리터를 추가하고 후면 적정 열의 각 웰에만 25마이크로리터의 PBS를 추가합니다. 접시를 4면 모두 10번 조심스럽게 두드려 섞습니다.

그런 다음 실온에서 30분 동안 접시를 덮습니다. 배양이 끝나면 각 웰에 50마이크로리터의 적혈구 용액을 넣고 플레이트를 더 두드리며 혼합합니다. 그런 다음 접시를 다시 덮고 표에 설명된 대로 사용된 종에 따라 적혈구를 배양합니다.

플레이트에 적혈구를 추가한 후 분석에 사용된 혈액 유형에 맞는 적절한 배양 시간을 준수합니다. 배양이 너무 짧거나 너무 길면 결과가 잘못 해석될 수 있습니다. 배양이 끝나면 플레이트를 25초 동안 90도 기울여 혈구응집도를 평가하고 플레이트가 여전히 기울어져 있는 동안 96웰 플레이트의 인쇄된 구성표에 따라 각 웰에 대한 결과를 표시합니다.

이 실험에서는 2015년 인플루엔자 시즌 24일 이전에 인플루엔자 A/H1N1/California/2009, A/H3N2/Texas/2012 및 B/Massachusetts/O2/2012를 포함하는 불활성화 3가 인플루엔자 백신을 투여받은 26명의 건강한 지원자를 대상으로 백신으로 유도된 항체 반응을 평가했습니다. A/H3N2/Switzerland/2013 및 A/H3N2/Texas/2012 바이러스 균주에 대한 교차 반응 면역 반응이 관찰되었으며, 인플루엔자 A/H3N2/Texas/2012에 비해 인플루엔자 A/H3N2/Switzerland/2013에 대한 기하 평균 혈응집 억제 역가가 현저히 낮고 혈청 보호가 유도되었습니다. 백신 접종 후, A/H3N2/Switzerland/2013 균주가 백신에 없었음에도 불구하고 두 균주에 대한 항체 역가가 증가했습니다.

바이러스성 적혈구 응응집소는 적혈구 적혈구형성에 대한 종 의존적 잠재력을 보여줍니다. 흥미로운 점은, 기니피그의 혈액은 인플루엔자 B와 적절하게 혈구응집이 되지 않으며, 칠면조 혈액은 높은 역가와 낮은 교차 반응성을 동반한 혈구응집이 발생할 가능성이 있다는 것입니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 3시간 안에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 시도하는 동안 바이러스의 혈응집이 진행되는 동안 비특이적 억제제 및 비특이적 결합을 비활성화하기 위해 RDE와 함께 혈청을 사용하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 ELISA와 같은 다른 방법을 수행하여 개별 병원체 특이적 면역글로불린의 역할에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 바이러스 면역학 분야의 연구자들이 다양한 연령대의 건강한 환자와 면역 억제 환자의 백신 관련 면역에 대한 이해를 심화할 수 있는 길을 열었습니다.

이 동영상을 시청한 후에는 인플루엔자 균주 특이적 항체 역가를 대규모로 정량화하기 위해 혈응집 억제 분석을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 바이러스 항원, 동물 혈액 및 인간 혈청 샘플로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 BSL2 실험실에서 작업하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.