Name: 인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: 학습하세요 인플루엔자 특이 항체 역가를 정량화하는 혈구응집억제 분석법을 통해 백신 매개 면역을 평가하는 방법을 배우세요. 이 기술은 다양한 인구집단에서 중화항체 존재를 신속하게 확인할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

없음입니다.

<ol><li>Prevention and control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62, Centers for Disease, C. & Prevention. RR-07 1-43 (2013).</li>
<li>Dominguez-Cherit, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critically+Ill+patients+with+2009+influenza+A%28H1N1%29+in+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico.</a> JAMA. 302 (17), 1880-1887 (2009).</li>
<li>Fox, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pandemic+influenza+%28H1N1%29%3A+impact+on+lung+transplant+recipients+and+candidates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Pandemic influenza (H1N1): impact on lung transplant recipients and candidates.</a> J Heart Lung Transplant. 29 (9), 1034-1038 (2010).</li>
<li>Piercy, J., Miles, A., Krankheiten, S. B. fG. S. V., Values, M. The Economic Impact of Influenza in Switzerland: Interpandemic Situation. , Swiss Federal Office of Public Health, Division of Epidemiology and Infectious Diseases, Section of Viral Diseases and Sentinel Systems. (2003).</li>
<li>Barclay, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+network+assortativity+of+influenza+vaccination+at+a+high+school%3A+implications+for+outbreak+risk+and+herd+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Positive network assortativity of influenza vaccination at a high school: implications for outbreak risk and herd immunity.</a> PLoS One. 9 (2), 87042(2014).</li>
<li>Baluch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+controlled+trial+of+high-dose+intradermal+versus+standard-dose+intramuscular+influenza+vaccine+in+organ+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Randomized controlled trial of high-dose intradermal versus standard-dose intramuscular influenza vaccine in organ transplant recipients.</a> Am J Transplant. 13 (4), 1026-1033 (2013).</li>
<li>Haralambieva, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Impact+of+Immunosenescence+on+Humoral+Immune+Response+Variation+after+Influenza+A%2FH1N1+Vaccination+in+Older+Subjects%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Impact of Immunosenescence on Humoral Immune Response Variation after Influenza A/H1N1 Vaccination in Older Subjects.</a> PLoS One. 10 (3), 0122282(2015).</li>
<li>Egli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants--understanding+molecular+mechanisms+to+improve+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Med+Wkly%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants--understanding molecular mechanisms to improve vaccines.</a> Swiss Med Wkly. 144, 13940(2014).</li>
<li>O'Shea, D., Widmer, L. A., Stelling, J., Egli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+face+of+vaccination+in+immunocompromised+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Infect+Dis+Rep%22%5BJournal%5D)">Changing face of vaccination in immunocompromised hosts.</a> Curr Infect Dis Rep. 16 (9), 420(2014).</li>
<li>Meulemans, G., Carlier, M. C., Gonze, M., Petit, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+hemagglutination-inhibition%2C+agar+gel+precipitin%2C+and+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+measuring+antibodies+against+influenza+viruses+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison of hemagglutination-inhibition, agar gel precipitin, and enzyme-linked immunosorbent assay for measuring antibodies against influenza viruses in chickens.</a> Avian Dis. 31 (3), 560-563 (1987).</li>
<li>Martins, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+internal+controls+for+the+Luminex+instrument+as+part+of+a+multiplex+seven-analyte+viral+respiratory+antibody+profile%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of internal controls for the Luminex instrument as part of a multiplex seven-analyte viral respiratory antibody profile.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (1), 41-45 (2002).</li>
<li>Webster, R., Cox, N., Stöhr, K. WHO Animal Influenza Manual. WHO/CDS/CSR/NCS. 2002.5, 1-99 (2002).</li>
<li>Mittelholzer, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cell+lines+used+in+a+micro+neutralization+test+for+measuring+influenza-neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human cell lines used in a micro neutralization test for measuring influenza-neutralizing antibodies.</a> Scand J Immunol. 63 (4), 257-263 (2006).</li>
<li>Hamilton, R. S., Gravell, M., Major, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+antibody+titers+determined+by+hemagglutination+inhibition+and+enzyme+immunoassay+for+JC+virus+and+BK+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of antibody titers determined by hemagglutination inhibition and enzyme immunoassay for JC virus and BK virus.</a> J Clin Microbiol. 38 (1), 105-109 (2000).</li>
<li>Kumakura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+hemagglutination+inhibition+assay+and+enzyme+immunoassay+for+determination+of+mumps+and+rubella+immune+status+in+health+care+personnel%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Lab+Anal%22%5BJournal%5D)">Comparison of hemagglutination inhibition assay and enzyme immunoassay for determination of mumps and rubella immune status in health care personnel.</a> J Clin Lab Anal. 27 (5), 418-421 (2013).</li>
<li>Ogundiji, O. T., Okonko, I. O., Adu, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+measles+hemagglutination+inhibiting+antibody+levels+among+school+children+in+Ibadan%2C+Nigeria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunoassay+Immunochem%22%5BJournal%5D)">Determination of measles hemagglutination inhibiting antibody levels among school children in Ibadan, Nigeria.</a> J Immunoassay Immunochem. 34 (2), 208-217 (2013).</li>
<li>Cwach, K. T., Sandbulte, H. R., Klonoski, J. M., Huber, V. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21883963">Contribution of murine innate serum inhibitors toward interference within influenza virus immune assay.</a> Influenza Other Respir Viruses. 6 (2), 127-135 (2012).</li>
<li>Lee, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+mimicry+by+antibody+F045-092+facilitates+universal+binding+to+the+H3+subtype+of+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Receptor mimicry by antibody F045-092 facilitates universal binding to the H3 subtype of influenza virus.</a> Nat Commun. 5, 3614(2014).</li>
<li>Blumel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+prevalence+of+cross-reactive+antibodies+against+influenza+A%28H3N2%29+variant+virus%2C+Germany%2C+2003+to+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Euro+Surveill%22%5BJournal%5D)">Age-related prevalence of cross-reactive antibodies against influenza A(H3N2) variant virus, Germany, 2003 to 2010.</a> Euro Surveill. 20 (32), 16-24 (2015).</li>
<li>Reber, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+Influenza+Vaccination+of+Children+Induces+Humoral+and+Cell-Mediated+Immunity+Beyond+the+Current+Season%3A+Cross-reactivity+with+Past+and+Future+Strains%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Seasonal Influenza Vaccination of Children Induces Humoral and Cell-Mediated Immunity Beyond the Current Season: Cross-reactivity with Past and Future Strains.</a> J Infect Dis. , (2016).</li>
</ol>

A.E.에 의해 지원 되었다 연구 보조금 (PZ00P3_154709), "SNSF Ambizione 점수" 프로그램에서 "Forschungsfond, Förderung strategischer Projekte" 바젤의 대학, Stiftungsinfektionskrankheiten 바젤, 및 Bangeter Rhyner 재단. L.K. 기술 대학의 그라츠, 오스트리아의 교부 금에 의해 지원 되었다. : J.L. 시스템 생물학 프로그램 (9번째 전화)에서 SystemsX.ch 이니셔티브의 iPhD 친교에 의해 지원을 인정합니다.

사전 및 사후 예방 접종 독감 바이러스 titers 특정 항 체의 정량화 백신 연구에 필요한 중요 한 도구입니다. Seroprotection 같은 바이러스 감염에 대 한 보호의 대리 측정에 따라 (> 1시 40분) 또는 혈 (4-fold titer 증가), 예방 접종 전략 수9에 최적화 된. 제공 된 프로토콜을 사용 하 여 확인할 수 있습니다: (i) 특정 바이러스, 및 (ii) 항 체 titers 관심의 바이러스에 대 한 hemagglutination 잠재력.
수정 및 문제 해결:
이 프로토콜은 WHO 표준12를 기반으로 합니다. 우리는 혈 청 준비 (단계 5 참조)에 대 한 PCR 튜브 스트립을 사용 하 여 프로토콜을 수정. 이 수정 도움을 크게 줄이고 작업 분석 결과의 처리량을 증가. 또한, 우리 비용 효과적인...

인플루엔자 바이러스 감염 상당한 질병 률, 사망률, 및 높은 의료 비용1,2,,34와 연결 됩니다. 특히, 신생아, 임산부, 노인과 만성 질병을 가진 환자는 더 심한 임상 결과 대 한 위험이 있습니다. 따라서, 순환 하는 인플루엔자 바이러스 변종에 대 한 예방 접종이 고 위험도 인구에 있는 질병의 부담을 줄이기 위하여 기본 척도 이다. 예방 접종, 예를 들면, 보호 임계값 이상 인플루엔자-특정 항 체 후 개별 면역 반응의 증가 감염의 개별 위험과 일반 인구 내에서 바이러스 성 전송의 가능성을 감소 5. 백신 유도 체액 면역 반응의 다른 인구에 다양 한 연령층에 걸쳐 자세한 이해는 중요 한 임상 질문6,,78 대답 하는 핵심 요소 , 9와 같은: 왜 일부 노인 환자 이전 예방 접종에도 불구 하 고 감염을 해야 합니까? "좋은"와 "충분 한" 백신 유도 보호는 무엇입니까? 얼마나 자주 백신 보호 titers 도달 immunosuppressed 환자에 게 적용 한다? 가장 효과적인 복용량 무엇입니까? 예방 접종 후 항 체 titers에 소설 보조의 영향 이란 무엇입니까? 백신 관련 항 체 생산의 측정 이러한 중요 한 질문에 대답 하 고 예방 접종 결과 개선 하는 데 도움이 있습니다.
바이러스 특정 항 체 titers의 정량화는 다양 한 면역 방법으로 수행할 수 있습니다. 이 고체 상10 또는 비드 기반 ELISA11 분석 실험,이 분석 결과12및 중화 분석 실험13포함 됩니다. ELISA 기반 메서드는 상대적으로 많은 양의 다양 한 항 원에 대 한 혈 청 샘플의 검사를 수 있습니다. 또한, 병원 체 관련 면역 글로불린 (Ig) M와 IgG 수 수 별도로 탐험. 항 원, 예를 들면, 선형 아미노산 시퀀스 또는 바이러스와 같은 입자의 특성 항 체의 바인딩을 영향을 미칠 수 있습니다, 비록 잠재적인 epitopes의 스펙트럼은 매우 광범위 하 고 여부 항 체에 정보를 제공 하지 않습니다. 응답 기능 관련이 있다.
반면, 중화 시험 기능 세포의 감염을 억제 하는 항 체의 잠재력을 결정 하 고 따라서 잠재적인 중립화를 반영 한다. 그러나,이 방법은 매우 노동 집약 이다, 라인 세포 및 바이러스, 라이브 특정의 경작 그리고 그러므로, 그것은 소모, 비싼, 특별 한 장비가 필요 합니다 필요 합니다.
이 문서에서는 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 세계 보건 기구 WHO 기반이 프로토콜12 는 단계별 설명. Hemagglutination은 적혈구의 교착을 선도 하는 일부 바이러스의 특성 효과 이다. 환자 혈 청이이 효과의 저해 중화 효과 반영 하는 억제 항 체 농도의 측정을 허용 한다.
우리는 동시에 여러 샘플의 효율적 처리 및 필요한 시간을 줄일 수 있도록 WHO 프로토콜의 워크플로 수정 했습니다. 첫 번째 프로토콜 특정 인플루엔자 항 원의 교착 잠재력의 결정을 설명합니다. 이 과정에서 두 번째 프로토콜에 대 한 올바른 인플루엔자 항 원 농도 결정 됩니다. 이 부분은 혈액의 각 배치 뿐 아니라 모든 새로운 바이러스 성 항 원, 반복 한다.
두 번째 프로토콜 인플루엔자-특정 항 체 titers 결정을 설명합니다. 그러나 제시 프로토콜 인플루엔자 바이러스와 인간 혈 청 샘플의 수사를 위해 최적화 된, 그것은 또한 적용할 수 마우스 혈 청 샘플 또는 셀 문화 supernatants 자극된 면역 세포, 예를 들어, 바이러스 특정 B 세포에서. 절대 측정된 titers로 결과 확인할 수 있습니다. 많은 백신 연구,은 titers 및 95% 신뢰 구간에는 각 특정 인구 표시 됩니다. 해석, seroprotection 또는 혈에 대 한 특정 바이러스 인구의 민감성을 설명 하기 위해 자주 사용 됩니다. Seroprotection 이상 4-fold titer 두 시간 점 (가장 일반적으로 사전 예방 접종과 30 일 사후 예방 접종에 사용 되는) 사이 seroprotective titers 달성과 증가의 ≥1:40, 그리고 혈 titer로 정의 됩니다.
두 프로토콜은 사용 하기 쉽게 하 고 그들은 연구 질문의 광범위 한 범위에 적용할 수 있습니다. 특히, 안정적이 고 신속 하 게 결정 하기 위해 사용할 수 있습니다 hemagglutination, 홍 역, polyomaviruses, 유행 성 이하선염, 또는 풍 진14,15,16 등에 대 한 용량을 가진 다른 다양 한 바이러스에 대 한 항 체 titers .

<table><tbody><tr><td>25ml 일회용 멀티채널 피펫 저장소</td><td>Integra</td><td>4312</td><td></td></tr><tr><td>8웰 PCR 튜브</td><td>브랜드 GMBH</td><td>781332</td><td>혈청 분취액</td></tr><tr><td>96웰 마이크로타이터 플레이트, U자형</td><td>TPP</td><td>92097</td><td>포유류 적혈구 사용 시 HI 분석용</td></tr><tr><td>96웰 마이크로타이터 플레이트, V자형</td><td>Corning Costar</td><td>3897</td><td>조류 적혈</td></tr><tr><td>구 사용 시 HI 분석용아쿠아 광고 iniect. Steril</td><td>Bichsel AG</td><td>1000004</td><td>인플루엔자 항원 및 콜레라 여과액 용액 제조용</td></tr><tr><td>닭 RBC(10%)</td><td>Cedarlane</td><td>CLC8800</td><td>Alsever의 용액에서 닭 적혈구 10% 현탁</td></tr>액 <tr><td>콜레라 여과액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8772</td><td>수용체 파괴 효소(RDE)로 사용</td></tr><tr><td>Dulbecco의 PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>혈청 시료, 적혈구 및 항원 희석용</td></tr><tr><td>Eppendorf Multichannel pipette, 12-channel, 10-100 &micro; l</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z683949</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 멀티채널 피펫, 8채널, 10-100 &마이크로; l</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z683930</td><td></td></tr><tr><td>Guinea Pig RBC (10%)</td><td>Cedarlane</td><td>CLC1800</td><td>Alsever의 용액에서 기니피그 적혈구의 10% 현탁</td></tr>액 <tr><td>Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>14/134&nbsp;</td><td>HI 분석에서 positive control로 사용</td></tr><tr><td>인플루엔자 Anti-A/Switzerland/9715293/2013-like HA serum&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>14/272</td>는 <td>HI 분석</td></tr><tr><td>Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum에서</td> 양성 대조군으로 사용됩니다.<td>NIBSC</td><td>13/178</td><td>HI 분석</td></tr><tr><td>Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum&nbsp에서</td> 양성 대조군으로 사용됨;<td>NIBSC</td><td>13/254&nbsp;</td><td>HI 분석에서 positive control로 사용</td></tr><tr><td>인플루엔자 Anti-B/Massachusetts/02/2012 HA 세럼&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>13/182</td><td>HI 분석에서 양성 대조군으로 사용됨</td></tr><tr><td>인플루엔자 항원 A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181)&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>12/168</td><td>비활성화, 부분 정제 A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181)&nbsp; 바이러스 (ca. 46&micro; gHA/ml)</td></tr><tr><td>인플루엔자 항원 A/스위스/9715293/2013 (NIB88)</td><td>NIBSC</td><td>14/254</td><td>불활성화, 부분 정제 A/스위스/9715293/2013 (NIB88) 바이러스 (ca. 55&micro; gHA/ml)</td></tr><tr><td>인플루엔자 항원 A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223)</td><td>NIBSC</td><td>13/112</td><td>불활성화, 부분적으로 정제된 A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) 바이러스 (ca. 74&micro; gHA/ml)</td></tr><tr><td>인플루엔자 항원 B/Brisbane/60/2008</td><td>NIBSC</td><td>13/234</td><td>불활성화, 부분 정제 B/Brisbane/60/2008 바이러스(ca. 42&micro; gHA/ml)</td></tr><tr><td>인플루엔자 항원 B/Massachusetts/02/2012</td><td>NIBSC</td><td>13/134</td><td>불활성화, 부분적으로 정제된 B/Massachusetts/02/2012 바이러스(ca. 35&micro; gHA/ml)</td></tr><tr><td>혈청 튜브</td><td>S-Monovette, Sardstedt</td><td>01.1601.100</td><td>응고 활성제를 사용한 혈청 추출용</td></tr><tr><td>단일 기증자 인간 적혈구, 유형 0</td><td>혁신적인 연구</td><td>IPLA-WB3&nbsp;</td><td>Alsever's solution에서 단일 기증자 인간 적혈구의 현탁액(약 26%)</td></tr><tr><td>터키 RBC (10 %)</td> <td>Cedarlane</td><td>CLC1180</td> Alsever의 용액 인산염 완충 식염수 (PBS)<td>에서 칠면조 적혈구의 10 % 현탁</td></tr>액<tr><td></td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

인플루엔자-특정 항 체 titers 계량에 최적화 된 hemagglutination 억제 (hi) 분석 결과

An Optimized Hemagglutination Inhibition (HI) Assay to Quantify Influenza-specific Antibody Titers

항 체 titers 인플루엔자와 다른 병원 체에 대 한 혈 청 학적인 보호에 대 한 대리 표식으로 일반적으로 사용 됩니다. 사전 및 사후 예방 접종 항 체 생산의 상세한 지식은 백신 유도 면역을 이해 해야 합니다. 이 문서에서는 인플루엔자-특정 항 체 titers를 확인 하는 신뢰할 수 있는 포인트 프로토콜을 설명 합니다. 첫 번째 프로토콜 hemagglutination, 두 번째 프로토콜 (hemagglutination 분석 결과, 분석 결과 HA)에 후속 사용 농도 표준화에 필요한 항 원 금액을 지정 하는 방법을 설명 합니다. 두 번째 프로토콜 인간의 혈 청 또는 셀 문화 supernatants (hemagglutination 저해 분석 결과,이 분석 결과)의 직렬 희석을 사용 하 여 다른 바이러스 성 긴장에 대 한 인플루엔자-특정 항 체 titers의 정량화를 설명 합니다.
적용 예를 들어, 우리는 trivalent inactivated 인플루엔자 백신을 접종 하는 건강 한 코 호트의 항 체 응답을 보여줍니다. 또한, 다른 인플루엔자 바이러스 사이의 분 표시 되 고 동물 적혈구 (Rbc)의 다른 종류를 사용 하 여 분을 최소화 하는 방법을 설명 했다. 토론 하이라이트 장점과 제시 분석의 단점 및 어떻게 인플루엔자-특정 항 체 titers 결정 백신 관련 면역의 이해를 향상 시킬 수 있습니다.

인플루엔자 A H3N2에 대 한 사전 및 사후 예방 접종 유도 항 체 응답 백신 유발 항 체 응답 26 건강 한 자원 봉사자는 사 3가 소 단위 독감 백신을 접종, 포함 된 인플루엔자 A/H1N1/캘리포니아/2009 A/H3N2/텍사스/2012, B/매사 추세 츠/02/2012는 2014 이전에 평가 되었다 / 2015 독감 시즌입니다. 그림 6 2 백신 수령인의 대표적인 예를 보여 줍니다. 흥미롭게도, 그 특정 독감 시즌 동안 A/H3N2/텍사스/2012는 순환 하지, 그리고 시즌 다소 다른 바이러스 성 긴장을 포함 하는 대신: A/H3N2/스위스/2013. A/H3N2/텍사스/2012 A/H3N2/스위스/2013의 바이러스 성 조류 97% 순서 신원 표시 하 고 단지 11 아미노산 ( 표 4참조), 그 위치는 그...

제시 프로토콜 인플루엔자 백신 받는 사람 혈 청 샘플에서 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 hemagglutination 억제 시험을 수행 하는 방법을 설명 합니다. 첫 번째 분석 결과 hemagglutination에 의해 최적의 바이러스 성 항 원 농도를 결정합니다. 두 번째 분석 결과 hemagglutination 저해 하 여 인플루엔자-특정 항 체 titers 단정.

인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과

Antibody titers are commonly used as surrogate markers for serological protection against influenza and other pathogens. Detailed knowledge of antibody ...

본 혈구응집 억제 시험의 전반적인 목적은 관심 대상이 되는 특정 바이러스에 대한 항체가를 측정하는 것입니다. 이 방법은 백신으로 매개된 면역력 및 다양한 인구 집단, 연령대 및 환자군 전반의 보호 효과에 관한 백신학 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 정확도가 높으며 중화 항체의 존재 여부에 따른 항체가를 빠르게 결정할 수 있다는 점입니다.이 방법은 인간 항체 역가에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 마우스 혈청이나 배양 상청액의 항체 역가와 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다. 먼저 96-웰 마이크로타이터 플레이트에 적절한 실험 정보를 라벨링하십시오. 그 다음 플레이트를 수직 방향으로 세우고 멀티채널 파이펫을 사용하여 가장 하단 뒷줄의 희석 행 첫 번째 웰을 제외한 모든 웰에 25 µL의 PBS를 추가하십시오.새로 조제한 목적 항원 용액 50 µL를 역적정 행의 첫 번째 웰에 넣고, 이어서 RDE 처리된 혈청 시료 25 µL를 상위 10개 행의 첫 번째 웰들에 각각 추가합니다. 양성 대조군으로 적절한 항혈청 25 µL를 11번째 행의 첫 번째 웰에 추가합니다. 그 다음, 각 행의 첫 번째 웰에서 다음 웰로 25 µL씩 옮겨 2배 연속 희석을 수행합니다.각 희석 단계마다 10~15회 피펫팅하고, 마지막 웰의 최종 25 µL는 버립니다. 다음으로, 1행부터 11행까지의 각 웰에 항원 용액 25 µL를 첨가하고, 역적정 행의 각 웰에는 PBS만 25 µL 첨가합니다. 혼합을 위해 플레이트의 네 면을 조심스럽게 10회씩 탭합니다.그 다음 플레이트를 덮고 상온에서 30분 동안 방치합니다. 배양이 끝나면 각 웰에 적혈구 용액 50 µL를 첨가하고 플레이트를 가볍게 두드려 섞어줍니다. 다시 플레이트를 덮고 표에 명시된 사용 종에 따라 적혈구를 배양합니다.플레이트에 적혈구를 첨가한 후, 분석에 사용된 혈액 유형에 맞는 적절한 배양 시간을 준수하십시오. 배양 시간이 너무 짧거나 길면 결과 해석이 부정확해질 수 있습니다. 배양 시간이 종료되면, 플레이트를 90도로 기울인 상태로 25초 동안 유지하여 혈구 응집 여부를 평가하고, 플레이트가 기울어진 상태에서 96웰 플레이트의 출력된 도식에 각 웰의 결과를 표시하십시오.본 실험에서는 2015-24 인플루엔자 시즌 이전에 influenza A/H1N1/California/2009, A/H3N2/Texas/2012 및 B/Massachusetts/O2/2012를 함유한 불활성화 3가 인플루엔자 백신을 접종받은 26명의 건강한 지원자를 대상으로 백신으로 유도된 항체 반응을 평가하였습니다. A/H3N2/Switzerland/2013 및 A/H3N2/Texas/2012 바이러스 주에 대해 교차 반응성 면역 반응이 관찰되었으며, influenza A/H3N2/Switzerland/2013에 대한 기하 평균 혈구 응집 억제 역가와 유도된 혈청 보호 효과는 influenza A/H3N2/Texas/2012에 비해 유의하게 낮았습니다. 백신 접종 후, A/H3N2/Switzerland/2013 주가 백신에 포함되어 있지 않았음에도 불구하고 두 주 모두에 대한 항체 역가가 증가하였습니다.바이러스 헤마글루티닌은 적혈구 응집에 있어 종 의존적인 잠재력을 보여줍니다. 흥미롭게도, 기니피그 혈액은 인플루엔자 B와 적절히 응집되지 않으며, 칠면조 혈액은 높은 역가와 낮은 교차 반응성으로 응집될 잠재력이 있습니다. 이 기술을 숙달하면, 적절히 수행했을 때 3시간 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때는 바이러스의 혈구응집 과정 중 비특이적 억제제 및 비특이적 결합을 불활성화하기 위해 혈청을 RDE로 처리하는 것이 중요하다. 이 절차 이후에는 ELISA와 같은 다른 방법을 수행하여 개별 병원체 특이적 면역글로불린의 역할에 관한 추가적인 질문에 답할 수 있다. 개발 이후, 이 기술은 바이러스 면역학 분야의 연구자들이 다양한 연령대의 건강한 환자 및 면역 억제 환자에서 백신 관련 면역에 대한 이해를 더욱 넓힐 수 있는 길을 열어주었다.이 영상을 시청하고 나면, 대규모로 인플루엔자 균주 특이적 항체 역가를 정량화하기 위한 혈구응집 억제 시험을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 바이러스 항원, 동물 혈액 및 인간 혈청 샘플을 다루는 작업은 매우 위험할 수 있으며, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 BSL2 실험실에서 작업하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

an-optimized-hemagglutination-inhibition-hi-assay-to-quantify

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

간단한 슬롯 얼룩 방법은 생물 정보학 분석을 통해 확인된 그들의 가장 보존 시퀀스를 대상으로 보편적인 항체를 사용하여 인플루엔자 바이러스 적혈구응집소과 neuraminidase의 부량 위해 개발되었습니다. 이 혁신적인 접근 방식은 모든 바이러스 적혈구응집소과 neuraminidase의 양적 결정에 유용한 대안을 제공할 수 있습니다.

모든 독감의 양적 분석 간단한 슬롯 얼룩 Assays에서 유니버설 항체를 사용하는 바이러스성 Hemagglutinins 및 Neuraminidases를 입력하십시오

이 방법은 높은 감도에 감염된 생쥐들의 bronchioalveolar 세척 (BAL) 유체에서 H1N1의 탐지를위한 적외선 염료 기반 이미징 시스템의 사용을 설명합니다. 이 방법론은 96에서 수행할 수 있습니다 - 또는 판 384 자, 시험 물질 &lt;10 μl 볼륨이 필요하고 여러 병원체의 동시 상영을위한 잠재력을 가지고 있습니다.

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

이 비디오는 특정 항원에 대한 혈청 항체를 검출하기 위한 혈응집 억제 분석을 보여줍니다. 테스트 웰에서의 적혈구 응집 억제 및 대조군 웰에서의 적혈구 응집의 확인은 뚜렷한 시각적 패턴을 통해 달성됩니다. 이 분석은 면역 반응, 백신 효과를 평가하고 바이러스학 및 면역학에서 바이러스 감염을 연구하는 데 중요한 역할을 합니다.

표적 항원에 대한 혈청 항체를 검출하기 위한 Hemagglutination Inhibition Assay

이 비디오는 중화 인플루엔자 바이러스 단클론 항체의 탈출 변종을 생성하는 기술을 보여줍니다. 항체 중화 바이러스 현탁액을 배아 계란에 주입하여 탈출 변이체를 선택적으로 증식시킵니다. 그 결과 주로 탈출 변이체의 바이러스 집단이 발생하며, 이는 Hemagglutination 분석을 통해 확인되었습니다.

중화 항체에 대한 인플루엔자 바이러스 탈출 변이의 생성

이 동영상은 혈청 샘플에서 인플루엔자 뉴라미니다아제(NA) 억제 항체 역가를 측정하는 분석을 보여줍니다. NA에 대한 항체를 포함하는 혈청 샘플을 페투인(fetuin)으로 코팅된 마이크로웰 플레이트에 첨가합니다. 바이러스를 추가하면 항체가 바이러스 NA가 fetuin을 쪼개고 갈락토오스 부분을 노출시키는 것을 방지합니다. 그런 다음 과산화효소(peroxidase-conjugated lectin)가 첨가되어 노출된 갈락토스에 결합합니다. NA 억제 항체 역가는 비색 테스트를 사용하여 측정되며, 여기서 과산화효소 기질은 고정된 렉틴 접합 과산화효소에 의해 절단되어 색상을 생성합니다.

인플루엔자 뉴라미니다아제 억제 항체 역가를 측정하기 위한 분석

인쇄된 글라이칸 마이크로어레이 전략을 사용하여 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌 열성 및 시알산 함유 수용체에 대한 특이성을 분석하기 위해 기존의 96웰 플레이트 분석을 소형화했습니다.

인플루엔자 바이러스 Hemagglutinins의 결합력 및 특이도를 평가하기위한 소형화 글리 칸 마이크로 어레이 분석

혈청에서 인플루엔자 뉴라미니다아제(NA) 억제 항체 역가를 측정하기 위한 효소 결합 렉틴 분석법(ELLA)을 설명합니다. 이 분석은 땅콩 응집소를 사용하여 NA가 fetuin으로 코팅된 96웰 플레이트에서 시알산을 제거할 때 접근할 수 있는 갈락토오스 잔류물을 정량화합니다.

효소 결합 렉틴 분석에 의해 인플루엔자 뉴 라미니다 아제 억제 항체가를 측정

우리는 우리가 대상으로 인플루엔자 A 바이러스의 바이러스 성 조류 인간 또는 murine 단일 클론 항 체의 바인딩을에 필요한 중요 한 잔류물을 식별 하는 방법을 설명 합니다. 프로토콜은 다른 바이러스 표면 glycoproteins 그리고 그들의 해당 중화 항 체에 적용할 수 있습니다.

인플루엔자 바이러스 단일 클론 항 체를 중화의 탈출 변종의 생성

항 체에 의해 그 대상 인플루엔자 바이러스 조류 Fc 중재 effector 기능 활성화를 측정 하는 방법을 설명 합니다. 이 분석 결과 또한 Fc 중재 면역 유도의 단일 클론 항 체 또는 polyclonal 세라 다른 바이러스 표면 glycoproteins를 대상으로 능력을 평가 하기 위해 적응 수 있습니다.

독감 조류 특정 항 체에 의해 유도 된 Fc 중재 Effector 기능을 평가 하는 방법

인플루엔자 중화 항 체는 인플루엔자 감염의 보호와 연관. Microneutralization 분석 실험 인간 혈 청의 중화 항 체를 측정 하 고 자주 독감 인간의 혈 청 학에 대 한 사용 됩니다. 인플루엔자 예방 접종 또는 감염 다음 현대 3C.2a 및 3C.3a A(H3N2) 바이러스 중화 항 체 titers 측정 MDCK-SIAT1 세포를 사용 하 여 microneutralization 분석 결과 설명 합니다.

사용 하 여 MDCK SIAT1 세포 분석 실험 측정 인플루엔자 항 체 응답 Microneutralization에 의해 인간의 세라에 A(H3N2) 바이러스를 중화

이 기사는 뉴캐슬병 바이러스 혈청학적 검사를 위해 4개의 혈구응집소 항원을 준비하는 간단한 방법을 제시합니다. 보다 엄격한 역적정 방법 및 잘 정의된 조정 프로세스와 결합하여 항원의 혈구응집역가를 정확하게 측정함으로써 테스트 효율성을 높이고 위양성을 줄이며 가금류의 질병 감시를 개선합니다.

뉴캐슬 질병 바이러스 혈청학의 혈구 응집 억제 분석을 위한 항원 준비의 최적화

학습하세요 인플루엔자 특이 항체 역가를 정량화하는 혈구응집억제 분석법을 통해 백신 매개 면역을 평가하는 방법을 배우세요. 이 기술은 다양한 인구집단에서 중화항체 존재를 신속하게 확인할 수 있습니다.

인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과

더 많은 동영상 탐색