유세포분석을 사용한 뉴런의 다중 미토콘드리아 파라미터 측정

0 views • 2:09 min • July 8th, 2025

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

고정 및 투과화된 뉴런을 튜브에 넣습니다.

비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 완충액을 추가합니다.

현탁액을 원심분리하고 상층액을 제거합니다. 그런 다음 뉴런을 완충액에 재현탁합니다.

탁액을 태그가 없는 1차 항체와 형광단 태그가 있는 1차 항체가 들어 있는 튜브에 균등하게 옮깁니다.

양하여 항체가 미토콘드리아 호흡 사슬 또는 MRC 복합체 서브유닛, 미토콘드리아 DNA 관련 단백질 및 뉴런 내의 미토콘드리아 외막 단백질에 특이적으로 결합할 수 있도록 합니다.

결합되지 않은 항체를 제거합니다.

태그가 지정되지 않은 1차 항체에 결합하는 형광단 태그가 지정된 2차 항체와 함께 배양합니다.

혼합물을 원심분리하고 상층액을 버립니다.

뉴런을 완충액에 재현탁하고 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

유세포 분석을 수행하여 MRC 복합 서브유닛의 발현 수준 및 상대적인 미토콘드리아 DNA 수준의 측정에 해당하는 표지된 뉴런의 형광 신호를 검출합니다.

샘플

을 1밀리리터의 차단 완충액으로 차단하고 시연된 대로 PBS로 원심분리하여 세포를 세척합니다. 다른 미토콘드리아 복합체 및 서브유닛을 검출하려면 텍스트 원고에 설명된 각각의 1차 항체와 함께 세포를 30분 동안 배양합니다. PBS로 세포를 한 번 세척한 후 2차 항체와 함께 세포를 30분 동안 배양합니다.

배양이 끝나면 시연된 대로 PBS에서 세포를 세척하고 재현탁합니다. 세포 현탁액을 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브에 옮기고 어둠 속에서 얼음 위에 보관합니다. 그런 다음 유세포 분석기에서 세포를 분석하고 신호를 감지하고 530/30 대역 통과 필터를 사용하여 하나를 필터링합니다.

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Last updated: 18 July 2026