폴리솜이란 무엇인가요?

폴리솜은 단일 mRNA 가닥을 번역하는 여러 리보솜에 의해 형성된 복합체입니다.

왜 영상화에 원자력 현미경을 사용하나요?

AFM은 나노 스케일 해상도를 제공하여 생물학적 구조물을 상세하게 시각화할 수 있습니다.

폴리솜 영상화의 중요성은 무엇인가요?

폴리솜 영상화는 단백질 합성 및 조절의 메커니즘을 이해하는 데 도움이 됩니다.

AFM을 위한 샘플은 어떻게 준비되나요?

샘플은 폴리솜을 운모 시트에 부착하고 영상화를 위해 고정하여 준비합니다.

이 연구에서 중요한 영상화 매개변수는 무엇인가요?

주요 매개변수에는 최적의 영상화를 위한 스캔 영역, 해상도 및 Z-스케일 설정이 포함됩니다.

원자력 현미경을 사용하여 마우스 뇌에서 분리된 폴리솜 이미징

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:28 min • May 29th, 2025

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마우스 뇌 조직에서 분리된 부착된 폴리솜이 있는 운모 시트로 시작합니다.

폴리솜은 RNA 가닥에 부착된 여러 리보솜의 복합체입니다.

테이프를 사용하여 운모 시트를 샘플 홀더에 고정합니다.

샘플 홀더를 원자력 현미경 스테이지에 놓습니다.

미리 장착된 캔틸레버를 배치합니다. 이미징 중 정확한 신호 감지를 보장하기 위해 레이저와 검출기를 정렬합니다.

캔틸레버의 진동 주파수를 조정하여 샘플 무결성을 유지하면서 표면 형상의 감지를 최적화합니다.

캔

틸레버 팁을 샘플 표면 위로 진동시켜 이미징을 시작합니다.

팁이 폴리솜의 높은 표면을 만나면 레이저가 편향됩니다.

이러한 레이저의 편향은 검출기에 의해 캡처되어 나노 스케일 해상도의 이미지를 생성합니다.

적절한 소프트웨어를 사용하여 임의의 기울기 및 드리프트 효과를 수정하여 폴리솜을 시각화할 수 있습니다.

양면 테이프를 사용하여 준비된 샘플을 AFM의 샘플 홀더에 부착합니다. 그런 다음 제조업체의 지침에 따라 AFM 스테이지에 샘플 홀더를 삽입합니다. 교정 후 캔틸레버 팁이 표면에 맞물릴 때까지 샘플에 접근합니다.

2 x 2 미크론의 스캔 영역, 최소 512 x 512 픽셀의 해상도를 선택합니다. 라이브 배경 빼기 모드를 선택하고 20-25나노미터의 Z-스케일을 선택합니다. 그런 다음 이미지 획득을 시작합니다. 이미지를 검사하여 공중에서 이미지를 획득할 때 높이가 10나노미터에서 15나노미터 사이인 둥근 물체가 있는지 확인합니다.

그런 다음 날카로운 물체가 시각화될 때까지 설정점과 피드백 매개변수를 조정합니다. 배경은 2-4나노미터 높이의 물체가 있는 좋은 샘플에서 비교적 평평하게 나타나야 합니다. 이미지가 좋아 보이면 서로 다른 샘플 영역에서 여러 개의 2 x 2 미크론 스캔을 획득합니다.