Name: 흩뿌려진의 제목 셀 캡슐화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:09:54.000+00:00
Duration: 13 min 10 s
Description: 배우세요 3D 바이오프린팅을 이용한 세포 캡슐화 방법을 연구하세요. 솔레노이드 밸브와 다양한 배지 및 젤을 활용하여 세포 생존율을 높이는 조직 공학 기술을 탐구합니다.

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NIH3T3 세포 준비 : 탈출을위한 A. 셀 <ol><li> 다음 세포, 세포 매체와 희석 1시 1분, 그리고 T75 플라스크에서 15 ML 팔콘 튜브로 전송 Trypsinize </li><li> , centrifuging하여 펠렛으로 세포를 스핀 다운 뜨는을 기음과 DPBS로 세포를 씻어 </li><li> 다시 펠렛으로 세포를 스핀 다운 및 뜨는을 기음 </li><li> 미디어 Resuspend 세포 </li><li> hemocytometer (~ 200 T75 플라스크 당 X 10 4 셀 / ML)의 세포 밀도를 결정 </li><li> 원심 분리기 세포 솔루션은 뜨는 대기음 및 세포 농도 변화에 대한 미디어의 적절한 금액에 resuspend </li></ol> B. 세포 방출 <ol><li> 방출을 위해 사용하기 전에 소용돌이 세포 </li><li> 주사기로 세포 솔루션을 200 μL를 전송 </li><li> 펄스 발생기에 적절한 모드를 설정 <ol><li> 꺼내기 한 방울 여러 방울을 위해 (파열), &quot;E. 버&quot;모드로 펄스 발생기를 설정 </li><li> 연속 비말의 방출 들어, &quot;상식을 훨씬&quot;모드로 펄스 발생기를 설정 </li></ol></li><li> 신호 설정 변경 <ol><li> 5 V 및 LOL 0 V 및 확인 &quot;LIM&quot;LED가 켜져입니다 힐러리 : 높은 수준과 낮은 수준의 출력 전압을 설정 </li><li> 사각형 펄스로 신호를 설정 </li><li> ( &quot;의무&quot;) 솔레노이드 밸브가 &#39;졌 그나 &quot;에 대한 값을 변경하거나 듀티 사이클을 변경하여 비말의 방출을 위해 열려있는 시간을 변경 </li><li> &#39;PER&#39;에 대한 값을 변경하여 배출의 주파수를 변경 </li><li> &quot;버&quot;에 대한 값을 변경하여 버스트에 탈출 방울의 개수를 변경 </li></ol></li><li> 현미경으로 영상 준비 기판에 추출 세포 솔루션 </li></ol> C.의 스테 이닝 <ol><li> 0.5 μL calcein - AM 및 DPBS의 ML 당 2 μL ethidium의 homodimer로 염료 용액을 만들어 </li><li> 염색 용액에 담가 준비 기판 </li><li> 샘플 37 10 분 동안 부화 허용 ° 이미징하기 전에 C를 </li></ol> 실험 검증 <ol><li> 니콘 이클립스 TE - 2000 U 형광 현미경에서 <ol><li> 스팟 고급 소프트웨어 (진단 주식 회사) </li><li> 데드 / 라이브 어세이 </li></ol></li></ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

<table><tbody><tr><td>형광 현미경</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE-2000 U</td><td></td></tr><tr><td>솔레노이드 밸브 세포 이젝터</td><td></td><td></td><td></td><td>작동 주파수: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V 밸브 드라이버: 2.5 Amp 구동 전류</td></tr><tr><td>5갤런 휴대용 공기 탱크</td><td></td><td>Coleman</td><td>Powermate CT5</td><td>가압 공기: 30 PSI </td></tr><tr><td>압력 조절기</td><td></td><td>Marsh Bellofram</td><td></td><td></td></tr><tr><td>펄스 발생기</td><td></td><td></td><td>HP8112A</td><td>구동 주파수 생성: 50 MHz</td></tr><tr><td>XYZ-스테이지</td><td></td><td>Newmark Systems</td><td></td><td>스테핑 모터 포함: 6inch 이동 xy-스테이지(NLS4-6-25), 2.5inch 이동 z-스테이지(NLS4-2.5-25), 3축 컨트롤러(NSC-G3), 0.1um 분해능</td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>세포주</td><td></td><td></td><td>섬유아세포</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td></td><td></td><td></td><td>0.05% 용액</td></tr><tr><td>NIH 3T3 세포 배지</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>완충액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75</td><td></td><td></td><td></td><td>조직 배양 플라스크</td></tr><tr><td>플라스틱 원뿔형 튜브</td><td></td><td></td><td></td><td>15 ml, 조직 배양용</td></tr></tbody></table>

흩뿌려진의 제목 셀 캡슐화

Title Cell Encapsulation by Droplets

제 이름은 문항입니다. 저는 콘돔 전공 교수님과 함께 연구하고 있습니다. 저와 교수님은 XYJ 스테이지를 사용하여 세포의 3D 구조를 제작하는 연구를 수행하고 있습니다.안녕하세요, 저는 세포 캡슐화, 배지 및 겔을 이용한 세포 프린팅 프로젝트를 수행하고 있는 PE와 Lynn입니다. 이것은 세포 배지 위로 세포 및 세포 혼합물을 분사하기 위한 솔레노이드 밸브입니다. 이 솔레노이드 밸브는 두 개의 신호선에 의해 활성화됩니다.신호선은 여기 드라이 보드에서 나옵니다. 신호가 여기서 발생합니다. 해당 라인을 통해 연결되는 장치가 바로 함수 발생기입니다.먼저 프로그램된 방식으로 생성됩니다. 따라서 펄스를 변경하고 싶다면 해당 스위치 라인을 통해 프로그램을 변경하거나, 컴퓨터로 프로세스 생성기를 제어할 수 있습니다. 솔레노이드 밸브는 전기 신호에 의해 개폐되며, 세포는 해당 라인을 통해 공급됩니다.세포와 배지 또는 아그로 겔(agro gel)은 시린지를 통해 공급됩니다. 물속에 있는 시린지의 내부가 공기에 의해 가볍게 가압됩니다. 가압된 공기는 여기 라인과 같은 탱크에서 공급됩니다.따라서 작은 라인과 이온화된 공기가 공기 필터를 통해 흐릅니다. 공기 필터는 먼지와 기타 오염 물질을 걸러냅니다. 압력 생성기라고 불리는 장치는 솔라 공기 밸브를 열거나 닫는 데 사용되는 신호를 생성하며, 컴퓨터는 P-I-B-U-S-V 커넥터를 통해 연결됩니다.USB 포트를 컴퓨터 또는 노트북에 직접 연결하여 사용할 수 있습니다. 해당 포트는 이쪽에 연결되어 있으며, 여기 있는 제어용 노트북을 통해 조작할 수 있습니다.따라서 스테이지의 이동과 벨의 개폐 동작을 동기화하려면 노트북과 동일한 컨트롤러로 제어할 수 있습니다. 이를 통해 벨이 열리고 닫히는 시점과 스테이지가 이동하고 정지하는 시점의 타이밍을 조절할 수 있으며, 결과적으로 이동 동작과 벨의 개폐를 동기화할 수 있습니다.해당 스테이지는 전동 스테이지입니다. 이는 제어 신호 라인과 모터를 통해 자동으로 이동합니다. 모터 구동 정밀도는 0.1 micrometers입니다.따라서 이상적으로는 최대 100mm 길이의 선을 그릴 수 있습니다. 제트 축이 그와 같이 상하로 이동하며, 이를 통해 기판과 솔라 벨트 사이의 간격을 조절합니다.따라서 분사 높이를 조절할 수 있습니다. 해당 기질은 여기 있는 XY 스테이지, 즉 이쪽의 X축과 저쪽의 Y축에 연결되어 있습니다. 따라서 XY 평면을 따라 이동하게 됩니다.따라서 특징 데모의 오른쪽 단계는 X, Y, Z의 세 축으로 구성됩니다. 제트 축 또는 XY 축은 여기서 신호에 의해 제어됩니다. 신호선은 여기의 모션 컨트롤러에 연결되어 있습니다. 이 모션 컨트롤러는 수동으로 제어할 수 없으므로 수동 스위치가 전혀 없습니다.이는 노트북 컴퓨터를 통해 제어됩니다. 노트북 컴퓨터가 연결되어 있습니다. 컨트롤러 뒷면에는 XY jet 프린팅 셀을 위한 세 개의 x축이 있습니다.따라서 세 가지 서로 다른 종류의 신호를 독립적으로 생성합니다. 그 후 모션 컨트롤러는 rf 2, 3, 2 커넥터를 통해 통신하며, 이는 USV에 직접 연결됩니다. 그리고 USV는 노트북 컴퓨터에 연결됩니다.따라서 노트북으로 제어되는 보로우어(borrower)입니다. AutoCAD 프로그램을 사용하여 다음과 같이 G-코드 경로를 생성합니다. 그러면 이것이 기계어로 변환됩니다.따라서 기계어는 단순한 문자나 숫자와 같은 형태로 전송됩니다. 여기에는 X, Y, Z 스테이지와 관련된 각 위치가 있으며, 해당 프로그램이 포함된 파일을 선택한 다음 그런 방식으로 프로그램을 다운로드하여 엽니다. 그런 다음 파일에서 동일한 텍스트 파일을 선택합니다.텍스트 파일만 다운로드한 후, 텍스트 파일을 선택하여 노트북에서 com motion controller executive로 자동 다운로드합니다. 그러면 앞서 언급한 대로 BAM 문자가 나타납니다. 이 플라스크에는 NIH 3T3 마우스 섬유아세포가 들어 있습니다. 먼저 기존 배지를 흡입하여 제거하겠습니다.이 과정은 세포를 계대 배양하는 단계이며, 세포들은 플라스크 바닥에 부착되어 있습니다. 따라서 배지를 흡입하여 제거한 후, 효소인 트립신을 넣어줍니다. 트립신을 플라스크에 넣은 후, 세포가 플라스크 바닥에서 떨어질 때까지 3~5분 동안 기다려야 합니다.이제 배지를 넣고 세포를 원심분리 튜브로 계대 배양할 준비가 되었습니다. 희석 비율은 1:1입니다. 따라서 여기에 배지 6 mL를 넣고, 모든 세포가 계대 배양될 수 있도록 세포들을 가볍게 씻어내겠습니다.이제 이 튜브에 담긴 세포들을 원심분리할 준비가 되었습니다. 이 세포들을 1,000 RPM에서 3~5분 동안 원심분리하겠습니다. 세포들이 펠렛 형태로 가라앉았으므로, 상층액을 흡입하여 제거하겠습니다.이제 PBS로 세포를 세척하겠습니다. 이는 세포 염색을 위한 과정입니다. 우리가 사용할 염색약은 에스테라제 기질입니다.이제 다시 원심분리하여 세포를 펠렛 형태로 가라앉히겠습니다. 그런 다음 PBS를 흡입하여 제거하고, 세포 수를 측정하기 위해 배지로 다시 현탁하겠습니다.샘플을 채취할 때 튜브 전체에서 농도가 일정하도록 세포를 혼합하고 있습니다. 이제 세포 밀도를 측정하기 위해 세포액 100 µL를 취하겠습니다. 다음으로 염색액인 트립판 블루(trypan blue) 100 µL를 넣겠습니다.염색약이 죽은 세포막에 침투할 수 있도록 3~5분 동안 기다립니다. 세포 수를 측정할 때, 파란색으로 염색된 세포는 세지 않습니다. 이제 혈구계수기로 세포 수를 측정할 준비가 되었으며, 세포 혼합액 50 µL를 혈구계수기의 각 쪽에 옮겨 담겠습니다.이제 커버글라스를 덮겠습니다. 헤모사이토미터에는 두 개의 측정 구역이 있습니다. 먼저 첫 번째 구역을 세고, 양쪽 구역을 모두 센 후 평균값을 구한 다음, Trypan Blue를 이용해 1:1 희석을 했으므로 2를 곱해줍니다.따라서 기본적으로 세포 밀도는 135 × 10⁴ cells/mL가 됩니다. 본 실험에서는 0.5 × 10⁶ cells/mL 농도의 세포 용액을 사용할 것입니다. 현재 13.5 × 10⁶개의 세포가 있으므로, 27 mL의 배지에 세포를 재현탁하겠습니다.우리는 두 가지 서로 다른 유형의 염색약을 사용합니다. 이것은 molecular probes 사의 생사 분석(live dead assay)입니다. 첫 번째 염색약은 calcium am입니다.두 번째 염색법은 AUM 호모다이머(homodimer)로, 사멸 세포를 염색합니다. 녹색 형광을 얻기 위해서는 청색 여기광을 사용하고, 적색 형광을 얻기 위해서는 녹색 여기광을 사용합니다. 이 두 가지 염색의 이미징 단계에서 다이스(dice) 용액은 PBS로 준비합니다.먼저 5 mL의 PBS(인산완충생리식염수)를 튜브에 옮깁니다. 이는 염류 용액입니다. 이제 0.5 µL의 calcium am per mil을 추가하겠습니다.이제 튜브에 2.5 µL의 calcium am을 추가하고, 2 µL의 athe homodimer per mil of PBS를 추가합니다. 여기 btex 장비가 있습니다. 이 장비는 세포와 배지가 전체 부피에 걸쳐 잘 분산되도록 합니다.이제 200 µL의 세포 현탁액을 여기에 로딩합니다. 그런 다음 캡을 씌워 다음과 같이 단단히 밀폐합니다. 밸브를 열면 공기압이 유입되며, 그때 벨트를 다음과 같이 조정하여 압력을 변경합니다.따라서 조정합니다. 압력은 5 PSI입니다. 튜브 내부의 압력은 5 PSI입니다.여기서 여기까지, 구멍 내부의 이것을 통해 연결되었습니다. 여기서 벨을 열고 5 PSI 압력으로 세포를 주입한 다음 개방을 시작합니다. 그러면 솔레노이드 밸브가 작동하기 시작합니다.그런 다음 기판을 배치합니다. 기판은 단순한 슬라이드 글라스입니다. 그리고 적절한 양을 로딩한 후, 다음과 같이 스카치테이프를 붙여 기판을 고정합니다.그리고 간단히 고정합니다. 셀과 airy 밸브, 그리고 기판 전체를 설정하여 airy 작동 시 움직이도록 합니다. 따라서 전체 설정을 완료한 후 airy 밸브를 열어 시작합니다.그런 다음 스테이지를 그렇게 이동시키죠? 그리고 기판 위에 패턴을 만들면 바로 문자가 완성됩니다. 이제 앞서 제조한 염료 용액에 출력된 액적들을 침전시키겠습니다.이제 액적을 10분 동안 배양한 후 이미지를 촬영하겠습니다. 먼저 접안렌즈를 통해 이미지를 조정하겠습니다. 첫 번째 이미지는 단순한 명시야 이미지입니다.조명을 끄고 필터를 교체하여 청색 여기광을 조사하면 녹색 형광이 나타납니다. 세 번째로 촬영할 이미지는 Thm Homodimer 염색을 통한 사멸 세포의 모습입니다. 녹색광을 조사하면 적색 형광을 얻을 수 있습니다.

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리는 합성 hydrogels 내에서 세포의 3 차원 (3D) 캡슐에 대한 프로토콜을 제시한다. 캡슐화 절차는 캡슐화된 세포의 행동을 평가하는 두 가지 일반적으로 사용되는 crosslinking의 방법 (마이클 타입뿐만 아니라 가벼운 - 시작 자유 라디칼 메커니즘),뿐만 아니라 기술의 번호를 설명합니다.

조직 공학을위한 3D Hydrogels에서 셀룰러 봉지

세포 및 입자의 관성 주문과 monodisperse 드롭 생성을 결합하여, 우리는 kHz에서 속도에서 한 방울의 세포 또는 입자의 원하는 숫자를 캡슐하는 방법을 설명합니다. 우리는 두 번 단일 및 이중 입자 술을 정렬되지 않은 캡슐 분들을 초과 효율성을 보여줍니다.

높은 처리량 마이크로 캡슐 단일 셀 및 다중 셀

이 동영상은 3D 하이드로겔로 캡슐화된 세포를 면역 염색하는 기술을 보여줍니다. 신경전구세포를 포함하는 하이드로겔 배양액은 고정, 투과화 및 차단 용액으로 처리되어 비특이적 면역 염색을 방지합니다. 특정 단백질에 결합하기 위해 1차 항체 칵테일을 첨가한 다음 형광 표지된 2차 항체와 핵 염색을 추가합니다. 그런 다음 샘플을 슬라이드에 장착하고 컨포칼 현미경으로 관찰합니다.

3D 하이드로겔 시스템에 캡슐화된 세포의 면역염색

이 동영상과 원고는 단순 교반 용기를 사용하여 큰 배치로 생산할 수있는 0.5 % ~ 10 % 알긴산 염 비즈로 포유류 세포를 캡슐화하는 유제 기반 방법을 설명합니다. 캡슐화 된 세포는 시험 관내에서 배양 되거나 세포 치료 응용을 위해 이식 될 수 있습니다.

간단한 교반 용기를 사용하여 알긴산 염 비즈에서 포유류 세포 캡슐화

이 문서 시드 방울에 세포의 캡슐화 능률을 제공 하기 위해 물방울 미세 장치에 피 펫 팁을 사용 하 여 셀의 부족 한 인구를 위한 프로토콜을 제공 합니다.

피 펫 팁 드롭릿 미세 플랫폼 시드 셀에 대 한 메서드를 기반으로

여기에 제시된 것은 설치류 눈에 생물학적 제제의 장기 전달을 위한 불멸화된 세포의 미세 캡슐화에서 중합체로서 알긴산을 사용하기 위한 프로토콜이다.

마우스 아이에 생물학적 제제의 전달을 위한 캡슐화된 세포 기술

제시된 실험 프로토콜은 성공적인 약물 전달 및/또는 기타 생체 효과에 필요한 조건의 조사를 가능하게 하기 위한 목적으로 세포 배양 장치에서 캐비테이션 활성의 실시간 측정을 수행하는 데 사용될 수 있다.

캐비테이션 강화 치료 연구

물방울 분석은 분석 화학, 효소 진화 및 단일 세포 분석에 유용하지만 일반적으로 액적을 형성하기 위해 미세 유체학이 필요합니다. 여기서는 액적 저술을 수행하기 위한 미세유체없는 접근 방식인 입자 템플릿 유화제를 설명합니다.

입자 템플릿 유화제를 통해 미세 유체가 없는 물방울 분석을 가능하게 합니다.

이 기사는 동축 유동 초점 장치를 사용하여 인간 다능성 줄기 세포 (hPSCs)의 캡슐화를 설명합니다. 우리는이 미세 유체 캡슐화 기술이 hPSC 구상체의 효율적인 형성을 가능하게한다는 것을 보여줍니다.

인간 다능성 줄기 세포 구상체를 운반하는 코어-쉘 마이크로캡슐의 미세유체 제조

이 기사에서는 캡슐화 된 세포 골격 단백질로 거대한 unilamellar 소포를 신속하게 생산하기위한 간단한 방법을 소개합니다. 이 방법은 감금 및 세포골격-막 상호작용에서 세포골격 구조의 상향식 재구성에 유용한 것으로 입증된다.

거대한 Unilamellar 소포 안에 재구성 된 세포 골격의 신속한 캡슐화

이 초보자 가이드는 액적 전달 방법을 통해 GIV(Giant Unilamellar Vesicles)를 준비하기 위한 일반적인 프로토콜을 제시하고, 중요한 단계를 논의하고, 합성 생물학 및 마이크로로보틱스를 포함한 다양한 응용 분야에 필요한 가능한 조정에 도움이 되는 통찰력을 제공합니다.

액적 전달 방법을 사용하여 거대한 단층 소포를 안정적으로 준비

배우세요 3D 바이오프린팅을 이용한 세포 캡슐화 방법을 연구하세요. 솔레노이드 밸브와 다양한 배지 및 젤을 활용하여 세포 생존율을 높이는 조직 공학 기술을 탐구합니다.

흩뿌려진의 제목 셀 캡슐화

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