Name: 3 차원 수지 주조 및 마우스 포털 정맥 또는 Intrahepatic의 담즙 덕트 시스템의 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 배우세요 마우스 간문맥 및 담도계의 3차원 수지 주조 기법을 통한 혈관 구조 시각화 방법을. 이 기법은 복잡한 혈관계의 입체적 구조를 정량적으로 분석하여 혈관생물학 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 TJW에 분자 의학 HHMI / 밴더빌트 대학 인증 프로그램을 통해 하워드 휴즈 의학 연구소 (HHMI) (GRDOT56006779)에서 SSH에 대한 건강 (NIH)의 국립 연구소에서 보조금 (R01-DK078640)에 의해 지원되었다 밴더빌트 당뇨병 연구 및 교육 센터 (P30-DK020593)와 밴더빌트 소화기 질환 연구 센터 (P30-DK058404)는 코어 서비스를 제공합니다.

1. 캐뉼라 준비 <ol><li> 손끝으로 PE10 튜브의 1 인치 긴 부분을 따뜻하게하고 튜브는 얇은 될 수 있도록 그것을 스트레칭. 참고 : cannulated 할 용기 또는 덕트의 크기가 필요한 스트레칭에 노출 된 정도를 확인하는 것입니다. 캐뉼라는 담즙 덕트 캐스트에 대해 잘 늘어나해야 만 적당히 큰 포털 정맥 내에 맞게 늘어 될해야 할 수 있습니다. </li><li> beveled 팁을 생성하는 대각선에서 신장 튜브를 잘라. </li><li> 5-6 인치 세그먼트를 만들 수있는 튜브의 다른 가장자리를 잘라. </li><li> 튜브의 비 beveled 가장자리에, ½ 인치의 피하 주사기 바늘을 32 게이지를 삽입합니다. </li></ol> 2. PBS로 주사기 준비 <ol><li> PBS로 3 ML의 주사기를 채우십시오. </li><li> 첨부과 피하 주사기 바늘에 주사기를 망치는 PE10 튜브는 이전에 다음 ID로 준비 꺼냈다. </li><li> 그 PBS을 위해 영화의 주사기와 푸시 주사기 플런저는 바늘과 튜브 등을 작성하고 있습니다주사기에 공기 거품이 없습니다. </li><li> 모델링 점토 밖으로 모양의 주사기 보유자에 PBS로 준비된 주사기를 삽입합니다. 튜브가 덕트에 삽입되어있는 동안이 홀더는 주사기는 꾸준히 할 것입니다. </li></ol> 3. 기타 설정 <ol><li> 작은 용기, 예를 들어, 24 잘 접시의 잘 하나에 촉매 0.1 g을 무게. </li><li> 3 ML의 주사기에 1 ML 수지를 당겨. 참고 : 촉매와 수지의 상대적 금액은 경화 시간을 변경 조정할 수 있습니다. 촉매 5 월의 양을 감소하지만, 수축을 캐스팅하고 덜 바람직 캐스트로 이어질 향상시킬 수 있습니다. 참고 : 수지를 취급 할 때, 수지 상당량의 연료를 수지 또는 흡입과 접촉을 피하기 위해 예방 조치를. 항상 장갑을 착용하고 화학 퓸 배출 후드 등 환기가 잘되는 지역에서 수지를 포함한 단계를 수행 </li><li> 끈으로 사용할 약 5 인치 5.0 실크 봉합 한 조각을 잘라 버릴거야. </li></ol> 4. 마우스를 준비합니다 <ol&gt; <li> 성인 마우스를 희생. 그 뒷면에 마우스를 배열하고 복강을 엽니 다. </li><li> 범위 플랫폼을 해부 마우스를 놓는다. 간으로 가시성 및 접근성을 높이기 위해 마우스 아래에 수직 15 ML 원뿔 튜브를 놓습니다. </li><li> PBS와 면봉 습식 및 이상과 너 한테서 extrahepatic 포털 정맥 또는 일반적인 담즙 덕트와 함께 간의 등보기를 노출 간 뒤집기를하는 데 사용합니다. </li><li> 포털 정맥 캐스트를 들어, 방 온도를 PBS로 정맥를 플러싱하여 혈액 응고를 방지 할 수 있습니다. PBS로 가득 3 ML의 주사기에 바늘을 첨부 등 멀리 간에서 extrahepatic 포털 정맥에 바늘을 삽입합니다. 부드럽게 포털 정맥으로 통해 PBS를 누르십시오. 피를 배출 할 수있는 공통 기본 정맥에서 닉을 만듭니다. 혈액 배수를 강화, 마사지 간에 젖은 면봉을 사용합니다. 이 단계는 담즙 덕트에 대한 권장하지 않습니다, 모든 혈관 시스템에 필요하지 않을 수 있습니다. 참고 :이 단계는 perfo 수대신 PBS의 4 % paraformaldehyde로 rmed. 4 % paraformaldehyde를 사용 특별히 작은 혈관 구조의,보다 정확한 주물에 혈관 무결성 및 결과를 증가시킬 수있다. </li></ol> 5. Extrahepatic 포탈 정맥 혹은 일반적인 담즙 덕트를 Cannulate <ol><li> 간에서 약 ¼ 인치, 포털 정맥 또는 담즙 덕트 아래에 수술 봉합 봉합사를 통과하는 곡선 포셉을 사용합니다. </li><li> 느슨한 일반적인 매듭으로 봉합을 묶어주세요. 매듭을 조여하지 마십시오. </li><li> 당신이 개방형 시스템으로 작업하는 경우, 시스템의 다른 쪽 끝에서 끈을 묶고 강화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 당신은 포털 정맥에서 혈액을 배출하는 일반적인 기본 정맥를 개설 한 경우, 포털 정맥 내 압력을 증가시키고 중앙 간정맥에 수지 누설을 방지하기 위해 주위 끈을 묶어. </li><li> 약 ¼ 인치 봉합 매듭 아래의 포털 정맥 또는 담즙 덕트의 작은 컷을 만들기 위해 봄 가위를 사용합니다. 이 세제곱t는 중간 포털 정맥 또는 담즙 덕트의 직경을 통해보다 더 이상 침투 없습니다. </li><li> # 5 포셉을 사용하여 컷의 사이트에서 포털 정맥 또는 담즙 덕트를 개최하고 담즙 덕트에 튜브의 beveled 끝을 삽입합니다. </li><li> 미리 묶어 끈 과거와 간 대한 튜브의 끝을 밀어 넣습니다. </li><li> 캐뉼라를 통해 PBS를 주입하고 포털 정맥 또는 담즙 덕트를 입력하는지 관찰하여 cannulation 정확도를 테스트합니다. </li><li> 장소에 캐뉼라를 잡아 끈을 조인다. </li></ol> 6. 수지는 포털 정맥 또는 Intrahepatic의 담즙 덕트를 던져 <ol><li> 사전 측정 된 0.1 g의 촉매로 미리 측정 한 ML 수지를 추가하고 철저하게 섞는다. 기포를 생성하지 마십시오. </li><li> 3 ML의 주사기에 다시 수지 촉매 혼합물을 그립니다. 부드럽게 주사기를 flicking과 거품을 추방하여 기포를 제거합니다. 참고 : 작은 구조를 주조을 위해, 그것은 일의 매우 작은 기포를 제거하기 위해 진공 챔버를 사용하는 것이 도움이 될 수 있습니다전자 수지와 주조의 품질을 향상시킬 수 있습니다. 이 단계를 수행 할 시간을 허용하기 위하여, 수지 경화를 늦출하기 위해 위의 제안 그에서 촉매 / 수지 비율을 감소 할 필요가 있습니다. </li><li> 조심스럽게 삽입 관에 부착 된 32 게이지 바늘을두고, 수지 - 함유 주사기와 PBS 함유 주사기를 교체하십시오. </li><li> 저항 증가 및 간이 가득 될 때까지 천천히 부드럽게 포털 정맥 또는 담즙 덕트에 수지를 밀어. </li><li> 부드럽게 간을 마사지하고도 채움을 장려하기 위해 서부 유럽 표준시 면봉을 사용합니다. </li><li> 구조에서 캐뉼라를 제거하고 빠르게 수지 유출을 방지하기 위해 끈을 다시 조입니다. </li><li> 수지 치료​​ 한 다음 간을 제거하는 동안 마우스를 20 분 동안 실온에서 평면 레이아웃 할 수 있습니다. </li><li> 중 간을 삭제하거나 macerating로 진행합니다. </li></ol> 7. 현장의 시각화에 대한 삭제 간 <ol><li> 4 ° C, 요동에서 밤새 4 % paraformaldehyde에 간 문제를 해결했습니다. </li><li> 간을 씻어최소한 네 시간, 흔들를위한 PBS 인치 원하는 경우이 시점에서, 당신은 간 엽 (叶)을 분리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 실온에서 흔들, 최소한 네 시간마다 50 %의 메탄올을 입력 한 다음 100 % 메탄올의 탈수. </li><li> 최소 24 시간, 락에 대한 벤질 알코올 및 벤질 벤조산 (BABB)의 1시 2분 솔루션에 간을 해제합니다. 긴 세탁 시간이 필요 할 수 있습니다. 간 완전히 2~3일 이후 명확하지 않을 경우, 다시 24 시간에 100 % 메탄올로 이동 BABB 개간를 반복합니다. </li><li> 현장에서 영상의 유리는 배양 접시에 BABB에 잠기 간. </li></ol> 8. 간 조직을 물에 담가서 부드럽게 <ol><li> 마우스에서 간을 제거하고 50 ML 원뿔 튜브를 물에 넣어. 전체 수지 경화에 1 시간을 기다립니다. 경우 별도의 간 엽이 원하는. </li><li> 물을 부어과 유리 병으로 간을 이동합니다. 15% 코에 잠기. 실온에서 하룻밤 둡니다. 락하지 마십시오. </li><li> 조심스럽게 코를 부어하고 증류수에 깁스를 씻는다. 참고 : 캐스트 버전입니다Y되기 쉬운는 극단적 인주의해서 취급해야합니다. 관에서 유체를 추가하거나 제거 할 때 캐스트를 방해하지 마십시오. </li><li> 수지 캐스트가 깨끗하면, 부드럽게 건조 할 수있는 Kimwipe에 누워 다음, 저장 할 수있는 용기에 전송할 수 있습니다. </li></ol> 9. 대표 결과 포털 정맥 또는 담즙 덕트의 성공적인 캐스트 hilum에서 간 주변에 확장 점차적으로 작은 가지의 연속 네트워크를 표시합니다. 그림 1은 포털 정맥은 BABB 삭제 해보세요. 그림 1A는 전체 왼쪽 간 엽의 주물과 주물의 모양과 크기를 보여줍니다 후 원위치에서 시각화에 캐스팅. 그림 1b는 같은 캐스트의 근접보기를 보여을 보여주는 표시 간 주변에있는 작은 포털 정맥 지점에 수지의 침투. 그림 2는 코 교장 마쳤습니다 포털 정맥 캐스트를 보여줍니다ceration. 그림 2A는 전체 왼쪽 간 엽과 그림 2B는 작은 주변 지점의 가까이에 있습니다 보여줍니다. 이 기술은 성공적으로 intrahepatic의 담즙 덕트에 적용하고 BABB 개간과 코를 물에 담가서 부드럽게 함 기술 1,2,7를 모두 사용하여 게시되었습니다. 일반적인 문제가 채워 불완전 포함 주변 시스템 또는 조직에 수지와 오버 플로우에 거품. 그림 3은에 포털 정맥에서 불완전 채우기 (그림 3A), 거품 (그림 3A) 및 수지의 오버플로를 인식하는 방법을 보여줍니다 중앙 정맥 (그림 3B). 모든 이미지는 Leica MZ 16 FA의 입체경을 사용하고 RETIGA 4000R 카메라를 QImaging 이동합니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig1.jpg" /> 그림 1간장의. BABB - 해제 수지 캐스트 엽 포털 정맥을 떠났다. A. 수지 캐스트 hilum에서 간 주변에 확장 계층 분기 구조를 보여줍니다. 수지 캐스트 블루 썬팅 간 엽에서 노란색으로 나타납니다. B.이 가까이가 수지 채우기은 간 주변의 작은 가지에 확장을 보여줍니다. 수지는 삭제 간을 통해 약간 흰 있습니다. 스케일 바 = 1 음. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig2.jpg" /> 그림 2. 간장의 조직 - 분해 수지 캐스트 엽 포털 정맥을 떠났다. 전체 간 엽의 캐스팅 A. 수지는 다양한 크기의 여러 가지를 보여줍니다. B. 주변 업 간 주변의 작은 가지를 보여줍니다. 작은 가지의 모양을 페더 링은 정현파 공간의 충전 수지를 대표하고 또는 수지에 보이지 않을 수도 있습니다 캐스트 만약 존재한다면 명백한 지점 밀도를 증가 할 것이다. 수지 색 흰색입니다. 스케일 바 = 1 음. 그림 3. 수지 캐스트로 일반적인 문제. A.은 왼쪽 엽 포털 정맥의 완전 충전은 간 주변에 연장 실패 일부 또는 전부 주조 가지들에 의해 명백합니다. 이 캐스트는 연속 주조 (화살표)의 중단으로 보이는 거품을 표시합니다. 일부 지역은 포털 정맥 및 중앙 정맥 가지의 근접으로 인해 B.은 포털 정맥 수지는 종종 입력하고 중앙 정맥을 채울 것입니다. 두 개의 hilar 가지 (화살표)와 다른 패턴과 중복 둘 분기 구조가 때를 인식 할 수 있습니다. 기술 오류와 진실 형태학의 변경 사이의 차별은 두 가지 방법으로 수행 할 수 있습니다. 첫째, 주조 구조는 2 차원 분석 또는 기타의 방법에 따라 예상 구조에 비해되어야합니다. 둘째, 여러가 복제 수행하는 것이 중요하며, 가능한 경우, 구조체을 수량화우레와 재현성을 결정하기 위해 통계 분석을 수행하고 사이 다른 실험 및 제어 팔을 내 통계적으로 유의미한 형태학의 변경이있는 경우.

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</ol>

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우리는 포털 정맥과 간 intrahepatic의 담즙 덕트 시스템은 주조 할 수있는 방법에 대한 구체적인 예를 설명했지만,이 기술은 약간의 적응과 거의 다른 ductal이나 혈관 시스템에 적용 할 수 있습니다. 이전 작품 10,11을 오리 쌔끼 마우스 1,2,7-9 등 다양한 종,,, 토끼 12,13, 개 14, 그리고 돼지 15과 코 선 14 등 많은 기관,이 기술의 가능성을 입증 심장 16, 방광 12,13, 그리고 간 1,2,7,8. 이 캐스트는 동일한 조직, 다른 발달 단계 5에서 동일한 구조, 또는 유전 또는 환경 변경 또는 영향 1-4의 구조에 미치는 영향에서 여러 시스템을 (예를 들어, 포털 정맥 및 담즙 덕트) 비교하는 데 사용할 수 있습니다 , 6,7. 종 장기에 걸쳐이 기술의 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> PE10 폴리에틸렌 관 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 1417012P </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 수술 검은 색 편조 실크 </td><td> Roboz 외과 </td><td> SUT-15-1 </td><td></td></tr><tr><td> Steriject 32 G X 13mm 바늘 </td><td> 에어 tite </td><td> TSK3213 </td><td></td></tr><tr><td> 봄 가위 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 15000-08 </td><td></td></tr><tr><td> 5 번 포셉 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> Mercox II 키트 </td><td> 래드 연구 </td><td> 21,247 </td><td></td></tr><tr><td> 벤질 알코올 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 1816-04 </td><td> Only는 BABB-개간에 필요한 </td></tr><tr><td> 벤질 벤조산 </td><td> MP Biomedicals, LLC </td><td> 154839 </td><td> 만 BABB - 개간에 필요한 </td></tr><tr><td> 인산 버퍼 생리 (PBS) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 모델링 점토 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 규모 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 연구소 가위 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 ML 캡 폴리 프로필렌 튜브 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 % paraformaldahyde </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 % 수산화 칼륨 (코) </td><td></td><td></td><td> 만 물에 담가서 부드럽게 함 필요 </td></tr><tr><td> 면도날 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 100 % 메탄올 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 ML luer 잠금 주사기 </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

3 차원 수지 주조 및 마우스 포털 정맥 또는 intrahepatic의 담즙 덕트 시스템의 이미징

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

장기에 혈관과 ductal 구조의 올바른 아키텍처는 적절한 생리적 기능에 필수 불가결하며, 이러한 구조의 형성 및 유지 보수는 매우 규제 과정입니다. 이러한 복잡한 3 차원 구조의 분석은 크게 섹션 또는 염료 분사 연구에서 중 2 차원 검사에 의존하고 있습니다. 이 기술은, 그러나, 그들은 명료하게하다하기위한 것입니다 ductal 또는 혈관 구조의 완벽하고 객관적 표현을 제공 할 수 없습니다. 또한, 3 차원 플라스틱 수지 캐스트의 성격은 시스템의 영구적 인 스냅 샷을 생성하고 3 차원 구조와 네트워크를 시각화하고 정량화를위한​​ 소설 널리 유용한 기술입니다. 수지 주조 시스템의 중요한 장점은 혈관이나 덕트의 온전하고 연결 또는 통신, 구조를 결정하는 기능입니다. 혈관과 둑의 구조할거야, 네트워크는 장기의 기능에 중요한 있으며,이 기술은 여러 가지 방법으로 혈관과 ductal 네트워크의 연구에 도움을 수있는 가능성이 있습니다. 수지 주조는 luminal 구조의 일반적인 형태 및 기능 구조를 분석 발달 morphogenetic 변경 사항을 식별하고 정상과 질병 상태 사이의 조직 구조의 형태학의 차이를 발견하는 데 사용할 수 있습니다. 이전 작업은 예를 들어, 공부 주조 수지를 활용했다 구조 1,2의 2 차원 분석에 반영되지 않은 마우스 intrahepatic의 담즙 덕트 시스템 내의 건축 및 기능 결함, 알츠하이머 병 마우스 모델 3 뇌 vasculature의 변경 , 포털 고혈압과 cirrhotic 마우스 4,지나 성인 폐 사이 쥐 림프 성숙의 발달 단계 5, 화학 부상에 대한 응답으로 쥐 간, 췌장 및 신장의 즉각적인 microvascular 변화에 포털 정맥 이상6. 여기 우리는 포털 정맥과 intrahepatic의 담즙 덕트에 특별히 초점을 맞추고 마우스 혈관이나 ductal 네트워크의 3 차원 수지 주물을 생성하는 방법을 제시한다. 이 캐스트는 조직을 삭제하거나 macerating으로 시각화 할 수 있으며 다음 분석 할 수 있습니다. 이 기술은 거의 모든 혈관이나 ductal 시스템에 적용 할 수 있으며 3 차원 ductal 또는 혈관 구조의 개발, 기능, 유지 보수, 또는 부상에 문의하는 연구에 직접 적용 할 것입니다.

시각화 및 마우스 간문맥 정맥 또는 intrahepatic의 담즙 덕트의 3 차원 구조를 정량화하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 수지 주조 기술은 다른 ductal이나 혈관 시스템에 적용이 가능 할 수 있습니다<em&gt; 현장에서</em&gt; 시스템의 손상 통신 아키텍처의 시각화 및 정량화.

3 차원 수지 주조 및 마우스 포털 정맥 또는 Intrahepatic의 담즙 덕트 시스템의 이미징

장기에서 혈관 및 도관 구조의 정확한 아키텍처는 적절한 생리적 기능에 필수적이며, 그 형성 및...

본 절차의 전체적인 목적은 혈관 또는 도관 조직의 3차원 캐스트를 제작하는 것입니다. 이는 먼저 문맥과 같은 표적 구조물을 준비하고 캐뉼라를 삽입한 뒤, 캐뉼라가 고정되도록 묶어줌으로써 수행됩니다. 그다음 레진을 준비하여 문맥에 주입하고 경화시킵니다.그 다음 간을 제거하고 조직을 고정하거나 마쇄합니다. 마지막으로 간을 투명화하여 캐스트 구조를 시각화합니다. 최종적으로 결과물을 얻을 수 있습니다.이는 시각적 분석이나 micro ct를 이용한 정량화를 통해 혈관 또는 도관 구조의 건축적 변화를 보여줍니다. 이 방법은 간 구조에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 뇌, 폐, 췌장, 신장을 포함한 모든 장기의 혈관 또는 도관 시스템에도 적용될 수 있습니다.캐뉼라를 준비하기 위해 손끝으로 PE 10 튜브의 1인치 길이 부분을 가열한 후, 튜브가 가늘어질 때까지 조심스럽게 잡아당깁니다. 늘어난 튜브를 대각선으로 절단하십시오. 베벨 팁(beveled tip)을 만들기 위해 튜브의 반대쪽 끝을 절단하여 5~6인치 길이의 세그먼트를 생성합니다.32 gauge 1/2인치 피하 주사 바늘을 튜브의 비스듬하지 않은 가장자리에 삽입합니다. 3 mL 시린지를 PBS로 먼저 채운 뒤, 튜브가 연결된 바늘을 나사식으로 결합하여 준비합니다. 시린지를 가볍게 쳐서 공기 방울을 제거하고 플런저를 밀어 바늘 내부까지 PBS가 가득 채워졌는지 확인합니다.소형 용기에 촉매 0.1 grams를 계량하여 넣습니다. 그런 다음 3 mL 주사기에 레진 1 mL를 흡입합니다. 마지막으로 결찰사로 사용할 5인치 길이의 실크 봉합사를 자릅니다.성체 마우스를 희생시킨 후, 마우스를 등으로 눕히고 복강을 엽니다. 해부 현미경의 플랫폼 위에 마우스를 놓은 다음, 간의 가시성과 접근성을 높이기 위해 15 milliliter 원심 분리 튜브를 마우스 아래에 수직으로 배치합니다. 면봉에 PBS를 적신 후, 이를 사용하여 간을 위쪽 및 바깥쪽으로 젖혀 간의 등쪽 모습과 함께 간외 문맥 또는 총담관이 드러나게 합니다.간문맥 캐스트(portal vein casts) 제작 시, 실온의 PBS로 혈관을 세척하여 혈액 응고를 방지하십시오. PBS가 채워진 3mL 주사기에 바늘을 연결하고, 간에서 가능한 한 멀리 떨어진 간외 문맥(extra hepatic portal vein)에 삽입하십시오.다음으로, PBS를 문맥으로 조심스럽게 밀어 넣습니다. 그 후, 필요에 따라 혈액 배출을 원활하게 하기 위해 총심장정맥에 절개창을 내어 혈액을 배출시키고, 젖은 면봉을 사용하여 간을 마사지합니다. 개방형 시스템을 사용하는 경우, 시스템의 반대쪽 끝을 결찰선으로 묶어 조이는 것이 도움이 될 수 있습니다.간문맥 내의 압력을 높이고 중심 간정맥로 레진이 누출되는 것을 방지하기 위해, 간문맥에서 혈액을 배출하도록 총경정맥을 개방한 후 그 주변을 결찰합니다. 곡선 鉗子(forceps)를 사용하여 간에서 약 1/4인치 떨어진 지점에서 두 구조물 중 어느 하나 아래로 수술용 봉합사를 통과시킵니다. 봉합사를 세게 조이지 말고 느슨한 일반 매듭으로 묶습니다.다음으로, 스프링 가위를 사용하여 봉합 매듭에서 약 1/4인치 아래의 문맥 또는 담관에 작은 절개를 만듭니다. 이 절개는 두 구조물의 직경의 절반을 넘지 않아야 합니다. 그런 다음 5번 포셉을 사용하여 절개 부위의 문맥 또는 담관을 잡고 튜브의 베벨 끝부분을 삽입합니다.튜브의 팁을 고정된 결찰사를 지나 간 쪽으로 밀어 넣습니다. 캐뉼라를 통해 PBS를 주입하여 간문맥이나 담도로 유입되는지 확인함으로써 캐뉼라 삽입의 정확도를 테스트합니다. 결찰사를 조여 캐뉼라를 제자리에 고정합니다.미리 측정한 1 mL의 레진을 미리 측정한 0.1 g의 촉매에 넣고 기포가 생기지 않도록 충분히 혼합합니다. 레진-촉매 혼합물을 3 mL 주사기로 다시 빨아들입니다. 주사기를 가볍게 튕겨 기포를 제거한 후, 기포를 밖으로 밀어내어 제거합니다.PBS가 들어 있는 주사기를 레진이 들어 있는 주사기로 조심스럽게 교체하되, 32게이지 바늘은 캐뉼라에 부착된 상태로 둡니다. 저항이 느껴지고 간이 가득 찰 때까지 레진을 문맥이나 담관으로 천천히 부드럽게 주입합니다. 이는 균일한 충전을 돕기 위함입니다.젖은 면봉을 사용하여 간을 부드럽게 마사지하고, 캐뉼라를 제거한 뒤 결찰사를 빠르게 다시 조여 레진 누출을 방지합니다. 레진이 경화되는 동안 마우스를 실온에서 20분간 평평하게 눕혀 둔 후, 간 내부 시각화를 위해 간을 적출하여 정리하고 4% Paraformaldehyde에 담가 4°C에서 하룻밤 동안 고정합니다. 다음 날, 고정액을 따라내고 PBS를 추가합니다.PBS로 간을 최소 4시간 동안 세척합니다. 필요에 따라 이 단계에서 간엽을 분리할 수 있습니다. 조직을 50% methanol에서 탈수시킨 후, 다시 100% methanol에서 각각 최소 4시간 동안 탈수시킵니다.실온에서 흔들어 줍니다. 벤조일 알코올과 벤조일 벤조에이트의 1:2 용액에서 최소 24시간 이상 간을 투명화합니다. in situ 이미징을 위해 세척 과정이 필요할 수 있습니다.조직을 마쇄하는 대체 방법으로, 유리 페트리 접시에 담긴 BABB에 간을 잠기게 합니다. 동물로부터 간을 적출한 후, 물이 들어 있는 50 milliliter 원뿔형 튜브에 넣습니다. 수지가 완전히 경화될 때까지 한 시간 동안 기다립니다.물을 따라내고 간을 유리 병으로 옮깁니다. 15% 수산화칼륨에 담근 후, 흔들리지 않도록 주의하여 실온에서 하룻밤 동안 둡니다. 수산화칼륨을 따라내고 증류수로 캐스트를 세척합니다.튜브에서 액체를 추가하거나 제거할 때 캐스트가 손상되지 않도록 주의하십시오. 레진 캐스트가 깨끗해지면 킴와이프 위에 조심스럽게 올려 건조시킨 후, 보관 용기로 옮기십시오. 이 그림은 BABB 투명화 처리 후 in situ 상태로 시각화한 문맥정맥 캐스트를 보여줍니다.여기에는 왼쪽 간엽 전체의 주형과 그 주형의 모양 및 크기가 표시되어 있습니다. 이는 동일한 주형의 확대 보기이며, 간 주변부의 가장 작은 문맥 분지까지 레진이 침투했음을 보여줍니다. 여기에서는 수산화칼륨 침침법을 거친 문맥 주형의 모습이며, 왼쪽 엽 전체와 주변부의 작은 분지들에 대한 확대 모습이 각각 제시되어 있습니다.일반적인 문제로는 불완전한 충전, 수지 내 기포 발생, 그리고 주변 계통이나 조직으로의 수지 유출 등이 있습니다. 이 그림은 불완전한 충전, 기포, 그리고門脈(portal vein)에서 중심정맥(central vein)으로의 수지 유출을 식별하는 방법을 보여줍니다. 수지 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행할 때는 항상 장갑을 착용하고 환기가 잘 되는 곳에서 작업하는 등 주의 사항을 반드시 준수해야 함을 잊지 마십시오.

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이 문서에서는, 우리는 수행하기 쉽고 이미지가 성인 마우스 뇌의 혈관 트리를 활용할 수 뇌혈관 캐스팅에 대한 간단한 실용적인 기술을 제시한다.

3D 이미징 및 형태학의 분석을위한 성인 마우스 뇌혈관 캐스팅

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혈관 재생을 시각화하는 데 사용되는 도구에는 혈관 나무를 대조하는 방법이 필요합니다. 이 필름은 혈관 나무의 최적 대비를 달성하는 데 사용되는 섬세한 주입 기술을 보여주고 μCT 및 조직학적 연속 절편을 사용하여 결과 표본의 자세한 분석으로 인한 잠재적 이점을 설명했습니다.

일반 마우스의 70 % 부분 간 절제술 후 혈관 및 실질 재생의 시각화

문맥 주사를 통해 유선종양 세포를 쥐 간으로 전달하는 수술이 개발되었습니다. 이 모델을 사용하면 간의 종양 세포 유출, 파종, 생존 및 전이성 성장을 포함하여 완전히 면역이 있는 숙주에서 간 전이의 후기 단계를 조사할 수 있습니다.

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

이 기술의 목적은 폐 인플레이션과 폐 동맥을 통해 무선 불투명 한 폴리머 기반 화합물의 주입을 통해 초기 산후 및 성인 마우스의 폐 동맥 네트워크의 전 생체 시각화입니다. 캐스팅된 조직에 대한 잠재적 응용 프로그램도 논의됩니다.

Micro-CT 화상 진찰을 위한 성인 및 초기 산후 마우스 폐의 혈관 주조

결장직장암(CRC) 오가노이드의 포털 정맥 주사는 스트로마가 풍부한 간 전이를 일으킨다. CRC 간 전이의 이러한 마우스 모델은 종양-스트로마 상호작용을 연구하고 아데노-관련 바이러스-매개 유전자 요법과 같은 신규한 스트로마-지시 치료제를 개발하는데 유용한 도구를 나타낸다.

간 전이 스트로마를 연구하기 위해 대장암 오가노이드의 포털 정맥 주사

이중 수지 주조 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 또는 덕트(DUCT)는 두 관 시스템의 시각화, 디지털화 및 세분화를 동시에 통해 장기 아키텍처의 3D 분석을 용이하게 합니다. 덕트(DUCT)는 두 개의 방사성파크 수지의 전 생체 주입 을 결합한 다음, 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 스캐닝 및 지형 데이터의 세분화를 결합합니다.

덕트: 3D 간 분석을 위한 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 다음에 이중 수지 주조

현재 프로토콜은 비알코올성 지방간염(NASH) 동안 세포외 기질(ECM) 리모델링의 역학을 시각화하기 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼을 구축하기 위해 간 상피내 관류/탈세포화 및 이광자 현미경 방법을 최적화합니다.

비알코올성 지방간염 마우스 모델에서 간 세포외 기질의 3D 이미징

우리는 담도 폐쇄증(BA)에 대한 바이러스 유발 간 섬유증 기계론적 연구에 적합한 동물 모델과 향후 BA 치료를 위한 플랫폼을 제공하는 만성 간 섬유증의 마우스 모델을 확립했습니다.

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이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

이 프로토콜은 생체 마우스의 인체 현미경(IVM)을 위한 최첨단 재사용 간 영상 도구(RHIT)를 도입하여 신속하고 급성 실험을 위한 조직 안정성을 향상시킵니다. RHIT의 3D 프린팅 설계는 비용 효율적인 생산, 확장성, 다재다능함을 제공하여 다양한 크기의 쥐에서 대사 과정을 장기간 관찰할 수 있게 합니다.

재사용 간 영상 도구: 간내 현미경을 위한 재사용 가능한 3D 프린팅 도구

배우세요 마우스 간문맥 및 담도계의 3차원 수지 주조 기법을 통한 혈관 구조 시각화 방법을. 이 기법은 복잡한 혈관계의 입체적 구조를 정량적으로 분석하여 혈관생물학 연구에 활용됩니다.

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