3 차원 수지 주조 및 마우스 포털 정맥 또는 Intrahepatic의 담즙 덕트 시스템의 이미징

이 절차의 전반적인 목표는 혈관 또는 관 조직의 3차원 캐스트를 생성하는 것입니다. 이것은 먼저 문맥과 같은 표적 구조를 준비하고 캐뉼러를 준비하고 캐뉼라를 제자리에 묶음으로써 수행됩니다. 다음으로, 수지를 준비하고 문맥에 주입하고 경화시킵니다.

그런 다음 간을 제거하고 조직을 고정하거나 침식시킵니다. 마지막으로, 간을 제거하고 주조 구조를 시각화합니다. 궁극적으로 결과를 얻을 수 있습니다.

이는 시각적 분석 또는 마이크로 CT에 의한 정량화를 통해 혈관 또는 관 구조의 구조 변화를 보여줍니다. 이 방법은 간 구조에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 뇌, 폐, 췌장 및 신장을 포함한 모든 기관의 혈관 또는 관 시스템에 적용할 수 있습니다.

손끝으로 캐뉼라를 준비하려면 PE 10 튜브의 1인치 길이 부분을 따뜻하게 하고 얇아지도록 부드럽게 당깁니다. 늘어난 튜브를 대각선으로 자릅니다. 베벨 팁을 생성하려면 튜브의 다른 쪽 가장자리를 잘라 5-6인치 세그먼트를 만듭니다.

32 게이지 반 인치 피하 주사 바늘을 튜브의 비스듬하지 않은 가장자리에 삽입합니다. 3 밀리리터 주사기에 PBS를 먼저 채우고 튜브로 바늘을 조여 준비합니다. 주사기에 기포가 없는지 확인하고 주사기를 튕기고 플런저를 밀어 바늘에 PBS가 채워졌는지 확인합니다.

작은 용기에 0.1g의 촉매를 담습니다. 그런 다음 1ml의 수지를 3ml 주사기에 넣습니다. 마지막으로 합자로 사용할 5인치 실크 봉합사 조각을 자릅니다.

성체 쥐를 희생 한 후 등을 대고 눕히고 복강을 엽니 다. 해부 현미경의 플랫폼에 마우스를 놓고 15ml 원추형 튜브를 마우스 아래에 수직으로 배치하여 간에 대한 가시성과 접근성을 높입니다. 면봉에 PBS를 적셔 간을 위쪽으로 뒤집어 간문, 정맥 또는 총담관과 함께 간의 등쪽 모습을 노출시킵니다.

문맥 깁스의 경우 실온으로 정맥을 씻어내어 혈액 응고를 방지합니다. PBS는 PBS로 채워진 3밀리리터 주사기에 바늘을 꽂고 간에서 가능한 한 멀리 떨어뜨립니다. 여분의 간 문맥에 삽입하십시오.

그런 다음 PBS를 문맥으로 부드럽게 밀어 넣습니다. 그런 다음 혈액 배출을 향상시키기 위해 필요한 경우 혈액을 배출하기 위해 일반적인 기본 정맥에 흠집을 내고 젖은 면봉을 사용하여 간을 마사지합니다. 개방형 시스템으로 작업하는 경우 시스템의 다른 쪽 끝에서 합자를 묶고 조이는 것이 도움이 될 수 있습니다.

총추기경을 열어 문맥에서 혈액을 빼내고 그 주위에 결찰을 묶어 문맥 내의 압력을 높이고 중앙 간정맥으로 수지가 누출되는 것을 방지하면 됩니다. 곡선형 집게를 사용하여 간에서 약 1/4인치 떨어진 두 구조 아래 수술용 봉합사 결찰을 통과시킵니다. 봉합사를 조이지 않고 느슨한 일반 매듭으로 묶습니다.

다음으로, 스프링 가위를 사용하여 봉합사 매듭 아래 약 1/4인치 아래의 문맥 또는 담관을 작게 자릅니다. 이 절단은 두 구조물의 직경의 절반 이상을 관통해서는 안 됩니다. 그런 다음 5번 집게를 사용하여 절단 부위의 문맥 또는 담관을 잡고 튜브의 비스듬한 끝을 삽입합니다.

튜브의 끝을 예쁜 합자를 지나 간 쪽으로 밉니다. 캐뉼러를 통해 PBS를 주입하고 문맥 또는 담관으로 들어가는지 관찰하여 캐뉼레이션 정확도를 테스트합니다. 합자를 조여 캐뉼라를 제자리에 고정합니다.

미리 측정된 0.1g의 촉매에 미리 측정된 1ml의 수지를 넣고 기포를 피하면서 완전히 혼합합니다. 수지 촉매 혼합물을 3 밀리리터 주사기에 다시 끌어 넣습니다. 주사기를 부드럽게 튕겨 기포를 배출하여 기포를 제거합니다.

PBS 함유 주사기를 주사기가 함유된 수지로 조심스럽게 교체하고 32게이지 바늘은 캐뉼라에 부착된 상태로 둡니다. 저항이 증가하고 간이 채워질 때까지 레진을 문맥 또는 담관에 천천히 부드럽게 밀어 넣습니다. 균일한 채우기를 장려합니다.

젖은 면봉을 사용하여 간을 부드럽게 마사지하고 캐뉼라를 제거한 다음 합자를 빠르게 다시 조여 수지 누출을 방지합니다. 레진이 경화되는 동안 마우스를 실온에서 20분 동안 평평하게 눕히고 간을 제거하여 두 개의 시각화를 위해 간을 제거하고 다음날 섭씨 4도에서 밤새 4% 파라폼 알데히드로 고정합니다. 붓고 PBS를 추가하십시오.

PBS로 최소 4시간 동안 간을 씻습니다. 원하는 경우 이 시점에서 간엽을 분리할 수 있습니다. 조직을 50% 메탄올로 탈수한 다음 100% 메탄올에서 각각 최소 4시간 동안 탈수합니다.

실온에서 흔들립니다. 벤조일 알코올과 벤조일 벤조에이트를 섞은 1-2용액으로 간을 최소 24시간 이상 세척합니다. 현장 이미징을 위해 세척 시간이 필요할 수 있습니다.

조직을 침식하는 대체 방법으로 유리 페트리 접시에 간을 BABB에 담그십시오. 동물에서 간을 제거한 후 물과 함께 50ml 원뿔형 튜브에 넣으십시오. 수지 경화가 완료될 때까지 1시간 정도 기다립니다.

물을 붓고 간을 유리병에 옮깁니다. 수산화칼륨 15%에 담그고 조심스럽게 흔들지 말고 실온에서 밤새 그대로 두십시오. 수산화칼륨을 붓고 증류수로 캐스트를 씻습니다.

튜브에서 유체를 추가하거나 제거할 때 캐스트를 방해하지 마십시오. 수지 캐스트가 깨끗해지면 김 물티슈에 부드럽게 올려 말리고 용기에 옮겨 보관합니다. 이 그림은 BABB 제거 후 현장에서 시각화된 문맥 캐스트를 보여줍니다.

여기에 표시된 것은 전체 왼쪽 간엽의 깁스와 캐스트의 모양 및 크기입니다. 이것은 간 주변부의 가장 작은 문맥 가지로 수지가 침투하는 것을 보여주는 동일한 캐스트의 근접 사진입니다. 여기에서 문맥 캐스트는 여기에 표시된 왼쪽 엽 전체와 함께 수산화칼륨 침용을 거쳤고 여기에 작은 주변 가지를 클로즈업했습니다.

일반적인 문제에는 불완전한 충전, 수지의 기포, 주변 시스템 또는 조직으로 넘침이 포함됩니다. 이 그림은 불완전한 채우기 기포와 문맥에서 중심 정맥으로 넘쳐나는 수지를 인식하는 방법을 보여주며, 수지로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있음을 잊지 마십시오. 이 절차를 수행할 때 항상 장갑을 착용하고 환기가 잘 되는 곳에서 작업하는 등의 예방 조치를 취해야 합니다.