Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

Chun A. Changou; Deanna L. Wolfson; Balpreet Singh Ahluwalia; Richard J. Bold; Hsing-Jien Kung; Frank Y.S. Chuang

doi:10.3791/50047

JoVE Journal
Biology

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Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

고급 3D 형광 현미경을 사용하여 자식 작용의 정량 분석

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09:59 min

May 3, 2013

DOI: 10.3791/50047-v

Chun A. Changou^1,2, Deanna L. Wolfson², Balpreet Singh Ahluwalia^2,3, Richard J. Bold^4,5, Hsing-Jien Kung^5,6, Frank Y.S. Chuang^1,2,5

¹Department of Biochemistry and Molecular Medicine,University of California, Davis , ²NSF Center for Biophotonics Science & Technology,University of California, Davis , ³University of Tromsø, ⁴Department of Surgery (Division of Surgical Oncology),University of California, Davis , ⁵UC Davis Comprehensive Cancer Center,University of California, Davis , ⁶Department of Biological Chemistry,University of California, Davis

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

자식 작용은 세포가 단백질과 세포 소기관을 분해하고 재활용 할 수있는 유비쿼터스 프로세스입니다. 우리는 시각화하고 작은 정량화 고급 형광 현미경을 적용하지만, autolysosomes로 형성과 autophagosomes와 리소좀의 배포, 자신의 융합 등 자식 작용의 유도와 관련된 필수, 물리적 변화.

이 절차의 전반적인 목표는 치료된 전립선 종양 세포의 정량적 이미지를 얻어 서로 다른 시점에서 자가포식의 정도와 정도를 측정하는 것입니다. 이는 먼저 아르기닌, 다제 또는 기타 실험용 시약으로 세포를 처리하여 자가포식 및/또는 세포 사멸을 유도함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 살아있는 세포를 이미징할지 아니면 고정 세포를 이미징할지 결정하고 그에 따라 샘플을 준비하는 것입니다.

다음으로, 광시야, 디콘볼루션 또는 구조화 조명 형광 현미경을 사용하여 살아 있거나 고정된 세포의 3D 형광 이미지를 얻습니다. 마지막 단계는 자가포식솜 크기 분포 및 다른 세포 내 구조와의 공동 국소화에 대한 통계 데이터를 수집하는 것입니다. 디지털 3D 이미지 분석 소프트웨어를 사용하는 이 접근 방식은 아르기닌 다아제에 의한 자동 파지 유도가 전립선 종양 세포 사멸을 유발할 수 있을 뿐만 아니라 이러한 세포가 세포사멸 및 괴사와 관련된 변화와 형태학적으로 구별되는 구조적 변화를 보인다는 결과를 얻을

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