Name: 마우스 췌장에서 RNA 격리 : 리보 뉴 클레아 풍부한 조직 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 배우세요 마우스 췌장에서 리보핵산 풍부한 조직으로부터 고품질 RNA를 격리하는 방법을. 이 기술은 유전자 발현 분석을 위한 RNA 무결성을 유지하며, 신속한 조직 처리와 RNase 억제제 사용이 핵심입니다.

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우리는 그들의 도움이 의견, 제안 및 자신의 프로토콜을 공유 지안 후아 링, 레이몬드 맥도날드, 갤빈 스위프트, 미셸 그리핀, 폴 Grippo 및 Satyanarayana Rachagani 감사합니다. 이 작품은 부여 U01CA111294와 오하이오 주립 대학 교내 연구 프로그램에서 아이디어 개발의 수상에 의해 지원되었다.

1. 준비 다음 사례는 기관의 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 설정된 정책을 준수. <ol><li> 그것은 특정 일에 더 이상 6 이상 마우스 췌장을 분리하는 것이 좋습니다. 깨끗하고 멸균 모든 수술 도구, 동물 당 하나의 집합이 있습니다. </li><li> 모든 마이크로 원심 튜브 레이블을 지정합니다. 동물 당 네 개의 2 ㎖ 튜브. </li><li> 얼음에 50 ㎖의 원심 분리기 튜브에 용해 시약 8 ㎖를 놓습니다. 주 : 정제 키트는 췌장의 분리에 적합한 구아니딘 티오 시아 네이트 페놀 시약와 함께 제공하지만, 용해 시약 때문에 격리 당 필요한 큰 볼륨으로 사용됩니다. </li><li> 균질의 블레이드 청소를 위해 15 ML의 원심 분리기 튜브에 다음과 같은 솔루션의 약 10 ㎖를 분배. 에탄올, 70 % (2 관), HPLC 등급 물 (1 관)과 약 200의 RNase ㎕의 비움 또는 이에 상응하는 리보 뉴 클레아 제 inactivator를 포함 HPLC 등급 물. </li></oL&gt; 2. 외과, 췌장의 해부 및 균질화 <ol><li> 면 거즈 나 종이 수건이 들어있는 항아리에 이소 플루 란의 1 ~ 2 ㎖를 놓습니다. 마우스는 이소 플루 란의 근원에 도달 할 수는없는 플랫폼에 배치됩니다. 이전에 각 마우스를 마취에 항아리에 신선한 이소 플루 란을 추가합니다. </li><li> 부드럽게 이소 플루 란을 포함하는 항아리에 마우스를 놓습니다. 항아리 뚜껑을 부드럽게 앞뒤로 항아리를 회전하여 마취의 효과를 모니터링 할 수 있습니다. 그것의 자신에 서 할 수 없습니다에 일단 동물은 마취. </li><li> 마취의 확인을 위해, 항아리에서 동물을 제거하고 회사 발가락 핀치를 적용합니다. 마우스가 발가락 핀치에 반응하지 않는 경우, 2.5 단계로 진행합니다. </li><li> 마우스가 발가락 핀치에 반응하는 경우, 다음 단계 2.3에 2.2를 반복합니다. </li><li> 발생하기 쉬운 위치에 벤치 위에 마취 동물을 놓습니다. 단단히 쥐의 자궁 경부의 왼쪽 손을 배치하여 마우스의 자궁 경부 탈구. 우리오른쪽 마우스의 꼬리를 잡고 빨리 자궁 경부 탈구에 약 위쪽으로 45 °의 각도를 끌어 보내고. </li><li> 25 게이지 피하 주사 바늘을 사용하여 평평한 표면에 동물의 네 발을 각각 관통하여 표면 (종이 타월로 덮여 스티로폼 수준의 조각)에 시체를 고정합니다. </li><li> 오픈 마우스의 중간 부분을 절단하고 신속하게 마우스의 췌장을 제거, 무균 수술 도구를 사용하여. 췌장을 보유하고 봄 가위를 사용하여 비장과 소장에서 잘라 집게를 사용합니다. 마우스에서 제거하는 동안 췌장을 스트레칭하지 않도록주의하십시오. 조직의 혼란은 리보 뉴 클레아 제를 해제 할 수 있습니다. 참고 : 마우스의 췌장을 제거하는 데 걸리는 시간이 중요합니다. 당업자는 약 1 분 이하로 췌장 해부를 할 수 있어야한다. </li><li> 차가운 얼음 용해 시약 8 ㎖를 포함하는 50 ML 튜브로 전체 췌장을 놓습니다. 튜브 캡을 간략하게 TI 젖어 흔들시약에 ssue 지체없이 다음 단계로 진행합니다. 조직에 용균 시약의 비율이 중요하다. 용해 시약의 다른 볼륨을 사용하여 격리 RNA 무결성의 비교 결과 섹션을 참조하십시오. </li><li> 5 초 동안 균질화한다. 그것은 조직이 효율적 균질화 블레이드로 당겨질 수 있도록 원심 관의 바닥에 균질 블레이드를 눌러야 중요하다. </li></ol> 소화되지 않은 조직의 3. 제거 참고 : 균질화에 따라, 조직의 작은 비트는 용해 시약에 남아 있습니다. 그것은 신속하게 균질화와 RNA의 위험 저하에보다는 소화되지 않은 일부 조직을 떠나는 조직을 용해하는 것이 더 중요합니다. <ol><li> 전송 2 ㎖ 마이크로 원심 튜브에 용해 췌장을 포함하는 세포 용해 시약 2 ㎖. 격리 당 균질의 두 마이크로 원심 튜브를 수집합니다. 미래 연구를위한 -80 ° C에서 나머지 균질 또는 상점을 폐기하십시오. </li><li> 센트4 ° C, 소화되지 않은 조직을 펠렛 5 분간 12,000 × g에서 rifuge. 이 가능성이 리보 뉴 클레아 제 (단계 5.13)로 샘플을 오염시킬 것 RNA의 후속 솔루션으로 소화되지 않은 조직의 이월 등의 중요한 단계입니다. </li><li> 2 ㎖ 마이크로 원심 분리 튜브에 이송 상등액 1 ㎖. 즉시 격리을 진행하고 향후 사용을 위해 -80 ° C에서 복제 튜브를 저장합니다. 다음 단계를 진행하는 동안 얼음물에 균질를 포함하는 모든 튜브를 놓습니다. </li><li> 적절한 화학 폐기물 용기에 남아있는 용해 시약을 폐기하십시오. </li></ol> 균질 블레이드 4. 청소 <ol><li> 다음 분리를 진행하기 전에, 70 % 에탄올 10ml에 넣어서 균질화 블레이드 청소. 블레이드에 잡힐 수 있습니다 조직의 덩어리를 제거하기 위해 20 초 동안 약의 균질화를 활성화합니다. </li><li> 균질 블레이드에 남아있는 조각을 제거하기 위해 200 μL 피펫 팁을 사용합니다. </lI&gt; <li> 물, 일반의 RNase inactivator 및 70 % 에탄올의 단계를 반복합니다 4.1. 깨끗한 김 균질 샤프트 닦아 건조. </li><li> 나머지 동물의 췌장 분리 단계를 반복 2.1, 오히려 RNA를 풀링보다 각 동물 별도의 분리 유지 RNA. </li></ol> 5. RNA 격리 다음 섹션에서는 정제 키트 프로토콜과 동일하다. 정제 키트의 장점은 작은 RNA를 포함하여 전체 RNA를 분리한다는 것이다. <ol><li> 냉동 균질 솔루션을 사용하는 경우, 5 분 동안 실온에서 스탠드를 얼음물에 해동 및하자. </li><li> 클로로포름 200 μl를 추가, 튜브 캡을 15 초 동안 손으로 격렬하게 흔들어. 튜브 2 ~ 3 분 동안 RT에 서 보자. </li><li> 12,000 XG, 4 ℃에서 15 분 동안 원심 분리 </li><li> microcentrifuge 관에 위 수성 레이어를 전송합니다. 이소프로판올 1.5 볼륨을 추가로 pipetting 아래로 여러 번 철저하게 섞는다. </li><li> 70까지 이동2 ML 수집 관에 위치 스핀 컬럼에 샘플의 0 μL. 실온에서 15 초 동안 8,000 XG에 원심 분리기 뚜껑을 닫습니다. </li><li> 흐름을 통해 폐기하십시오. </li><li> 반복 샘플의 나머지 부분을 사용하여, 5.5-5.6 단계를 반복합니다. </li><li> 스핀 컬럼에 700 μL 버퍼 RWT를 추가합니다. 8,000 X g에서 15 초 동안 원심 분리기. 흐름을 통해 폐기하십시오. </li><li> 스핀 칼럼에 피펫 500 μL 버퍼 RPE. 열을 씻어 8,000 XG에 15 초 동안 원심 분리기. 흐름을 통해 폐기하십시오. </li><li> 스핀 컬럼에 500 μL 버퍼 RPE를 추가합니다. 열을 건조하는 8,000 XG에서 2 분 동안 원심 분리기. </li><li> 1.5 ML의 microcentrifuge 관에 스핀 열을 전송합니다. 직접 스핀 컬럼 막 상 피펫 80 μL의 리보 뉴 클레아없는 물. RNA를 용출 8,000 XG에서 1 분 동안 원심 분리기. </li><li> RNA 용액 1 μL의 RNA 분해 효소 억제제를 추가합니다. -80 ° C에서 저장 또는 5.13로 진행합니다. </li><li> RNA의 무결성을 확인하려면 먼저 RNA의 conce을 계산분광 광도계를 사용하고 ntration 280분의 260 비. </li><li> 분자 생물학 수준의 물에 약 500 NG / μL로 RNA 용액의 일부를 희석. </li><li> 모세관 전기 영동 분석을 사용하여 RNA 무결성 (즉, RIN)를 확인합니다. RNA 용액을 약 5 μL는 분석에 충분하다. </li><li> C. -80 ° RNA 용액 (그림 2 참조) 및 저장소를 나누어지는 </li></ol>

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</ol>

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풍부한 리보 뉴 클레아하는 조직에서 RNA를 분리하는 것은 분자 생물학 실험에 대한 큰 도전을 나타냅니다. 각종 시약 및 키트는 주로 RNA 추출의 페놀 구아니딘 티오 시아 네이트 방법에 시판을 기반으로하는 그. 구아니딘 티오 시아 네이트는 단백질을 변성 따라서 리보 뉴 클레아 제의 활성을 감소시킨다. 그러나 췌장에서 리보 뉴 클레아 제의 깎아 지른듯한 크기는 RNA 분리의 표준 프로토콜을 추가로 수정해야합니다. 프로토콜 표준 구아니딘 티오 시아 네이트 방식의 기반이 여기에보고 아직 췌장 등의 리보 뉴 클레아 풍부한 조직에서 RNA의 성공적인 분리를위한 몇 가지 중요한 변경뿐만 아니라, 팁이 포함되어 있습니다. RNA 단리를위한 표준 지침에 유의해야한다. 이 기술은 더 적은 리보 뉴 클레아 풍부한 췌장보다 표본에서, RNA의 성공적인 분리에 매우 중요합니다. 몇 가지 예는 분자 생물학 등급 워싱턴을 사용하여 포함터, 리보 뉴 클레아없는 소모품 오히려 유리보다 일회용 플라스틱 ...

높은 무결성 RNA의 분리는 같은 북부 블로 팅 9, QRT-PCR 1 또는 5 프로파일 유전자 발현 같은 일상적인 분자 생물학 실험이 필요합니다. RNA 분리 대부분의 현대적인 방법을 구아니딘 티오 시아 네이트 프로토콜 (2)의 변형에 기초한다 3. 구아니딘 티오 시아 네이트는 강한 단백질 변성제이고 효과적으로 대부분의 조건에서 리보 뉴 클레아 제의 활성을 방해 할 것이다. Chomczynski 및 사키 3의 인기있는 방법은 약 4 시간에 분리 시간을 줄이고, 구아니딘 티오 시아 네이트 용해 용액에 페놀을 배합. 대부분의 시판되는 RNA 추출 시약은 Chomczynski와 사키 방법 3를 기반으로하고 있습니다. 같은 인간이나 마우스의 췌장 등의 리보 뉴 클레아 풍부한 조직은 RNA를 분리하는 추가 문제를 제공합니다. 마우스의 췌장은 그 중 일부는 운영 시간에만 출시 될 예정 리보 뉴 클레아 제 6의 최대 75 밀리그램을 포함 할 수있다G 조직의자가 분해의 결과로 췌장 조직의 파괴. 구아니딘 티오 시아 네이트 프로토콜의 수정은 성공적으로 높은 무결성 2, 4, 7, 10 높은 무결성 4, 7, 10와 RNA의 마우스 췌장 용이 분리로 RNA 안정화 시약. 주입 그러나 주입으로 췌장으로부터 RNA를 분리하는 데 사용되어왔다 췌장에 솔루션은 좋은 기술을 필요로 같은 해부 현미경 및 절차를 수행하는 동안 조직 구조를 방해하는 세포 용해 될 수 있습니다와 같은 전문 장비가 필요할 수 있습니다. RNA 안정화 시약과 조직을 관류하는 단백질 분리 및 조직 학적 염색 등의 다른 응용 프로그램을 방해 할 수 있습니다. 또한,이 기술은 인간의 췌장에서 RNA를 분리에는 적합하지 않다. 다른 프로토콜은 조사 (2)에 의해 특정 솔루션의 준비가 필요합니다. 우리는 마우스의 췌장에서 높은 무결성과 RNA를 분리하는 프로토콜을보고합니다. 일E 프로토콜은 이전에 발행 된 방법의 요소들을 사용하여 주로 표준 페놀 / 구아니딘 티오 시아 네이트 계 용해 시약 프로토콜에 기초한다. 이것은 특수한 용액의 제조를 필요로하지 않으며 이는 췌장에 시약의 주입을 요구한다. 성공적인 RNA 격리를위한 중요한 단계는 조직의 비율, 그 결과 RNA 용액에 분리 리보 뉴 클레아 제 억제제의 포함을 단계적으로 이전에 소화되지 않은 조직의 제거에 높은 페놀 / 구아니딘 계 용해 시약 있습니다. 이들 및 다른 변형을 사용하여, 우리는 일반적으로 12보다 큰 루틴 유전자 발현 해석에 사용하는 RIN으로 RNA를 분리.

<table><tbody><tr><td>파워 젠 500&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>14-261-03&nbsp;</td><td>균질 화기</td></tr><tr><td>5424R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>냉장 마이크로 centifuge</td></tr><tr><td>Trizol 시약</td><td>Invitrogen</td><td>15596018</td><td>Lysis 시약</td></tr><tr><td>Student Vannas 스프링 가위</td><td>Fisher</td><td>91500-09&nbsp;</td><td>부속 조직에서 췌장을 절단하는 데 사용</td></tr><tr><td>수술 용 가위, 6 인치</td><td>Fisher</td><td>08-951-20</td><td>마우스의 신을 자르는 데 사용</td></tr><tr><td>뭉툭한 끝 집게</td><td>Fisher</td><td>1381239</td> Isoflurane<td>을 해부하는 동안 췌장을 잡는 데 사용</td></tr><tr><td>USP</td><td>Abbott Labs</td><td>4/8/5210</td><td>마취</td></tr>제 <tr><td>Rnase out (40 U/&micro; l)</td> <td>Invitrogen</td><td>10777-019</td><td>Rnase inhbitor</td></tr><tr><td>Rnase Away</td><td>Ambion</td><td>10328-011</td><td>일반 Rnase inactivator</td></tr><tr><td>HPLC 등급 물</td><td>Fisher</td><td>W5-4</td><td>세척 균질화 블레이드</td></tr><tr><td>분자 생물학 등급 물</td><td>Hyclone</td><td>SH30538.03</td><td>RNA 용출</td></tr><tr><td>miRNeasy 미니 키트</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td>정화 키트</td></tr><tr><td>2 ml 마이크로 원심 분리기 튜브, 인증 Rnase Dnase 무료</td><td>USA Scientific Plastics</td><td>1620-2700</td><td></td></tr><tr><td>15 ml 원심 분리기 튜브</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>100% 에탄올</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>200 &micro; l 피펫 팁</td><td>Rainin</td><td>GPL200F</td><td>청소용 균질화 블레이드</td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>피셔</td><td>BP1145-1</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo</td><td>ND-1000</td><td>분광광도계</td></tr><tr><td>바이오분석기</td><td>Agilent</td><td></td><td>Capillary 전기영동 분석기 RNA 무결성</td></tr><tr><td>측정 RNAlater</td><td>Ambion</td><td></td><td>RNA 안정화 시약&nbsp;</td></tr><tr><td>RNeasy&nbsp; 스핀 칼럼&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td></td><td>스핀 칼럼&nbsp; miRNeasy Mini 키트의 일부로</td></tr><tr><td>Mice</td><td>Chales River</td><td>Strain C57BL/6</td><td>그들의 나이는 4개월에서 12개월 사이였습니다.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>생쥐&nbsp;</td><td>잭슨 랩</td><td>균주 129</td><td>그들의 나이는 4개월에서 12개월 사이였습니다.&nbsp; &nbsp;</td></tr></tbody></table>

마우스 췌장에서 rna 격리 : 리보 뉴 클레아 풍부한 조직

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

쥐 췌장과 같은 리보뉴클레아제가 풍부한 조직에서 고품질 RNA를 분리하는 것은 어려운 일입니다. 췌장의 주요 기능은 소화를 돕는 것이므로 쥐의 췌장에는 75mg의 리보뉴클레아제가 함유되어 있을 수 있습니다. 마우스 췌장에서 RNA를 분리하기 위한 표준 페놀/구아니딘 티오시아네이트 용해 시약 프로토콜의 변형을 보고합니다. 구아니딘 티오시아네이트는 강력한 단백질 변성제이며 대부분의 조건에서 리보뉴클레아제의 활성을 효과적으로 방해합니다. 그러나 리보뉴클레아제가 풍부한 조직에서 RNA를 성공적으로 분리하기 위해서는 표준 프로토콜에 대한 중요한 수정이 필요합니다. 주요 단계에는 높은 용해 시약 대 조직 비율, 상 분리 전에 소화되지 않은 조직 제거, RNA 용액에 리보뉴클레아제 억제제 포함이 포함됩니다. 이러한 변형 및 기타 변형을 사용하여 RNA 무결성 수(RIN)가 7보다 큰 RNA를 일상적으로 분리합니다. 분리된 RNA는 일상적인 유전자 발현 분석에 적합한 품질입니다. 췌장 외에 리보뉴클레아제가 풍부한 조직으로부터 RNA를 분리하기 위한 이 프로토콜의 적응은 쉽게 달성할 수 있어야 합니다.

용해 균질 1 ㎖에서 총 RNA의 수율은 20 ~ 40 μg이다. OD 280분의 260 비율은 일반적으로 약 2.0이며, RIN은 7.0 지속적으로 크다. RIN은 6 ≤ 경우 분리가 반복 될 필요가있을 것이다. 때때로, 8.0보다 높은 R​​IN은 달성된다. 종래 췌장의 제거에 마우스를 안락사의이 가장 일반적으로 사용되는 방법은 CO 2 질식 또는 이소 플루 란을 흡입한다. 두 기술은 자궁 경부 전위 다음에 있습니다. 그것은 화학 약품 및 / 또는 절차에 시간이 RNA 무결성, 두 기술을 비교 하​​였다하여 고립 된 마우스의 췌장 RNA의 RIN에 영향을 줄 수있는 가능성이 있기 때문이다. 마우스는 CO 2 질식 또는 이소 플루 란 흡입을 사용하여 마취; 두 기술은 자궁 전위에 의해 미행했다. 이전의 자궁 경부 전위에 동물을 마취의 시간은 isofl에 비해 CO 2 질식 약 1 ~ 2 분 이상했다urane. 이소 ...

우리는 리보뉴클레아제가 풍부한 쥐 췌장에서 높은 무결성을 가진 RNA를 분리하는 절차를 보고합니다.

마우스 췌장에서 RNA 격리 : 리보 뉴 클레아 풍부한 조직

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

이 절차의 전반적인 목표는 Ribonuclease ridge mouse pancreas에서 높은 무결성을 가진 RNA를 분리하는 것입니다. 이것은 안락사된 쥐의 사체에서 췌장을 신속하게 제거함으로써 이루어집니다. 다음으로, 췌장이 용해 시약에 잠기고 조직이 균질화됩니다.원심분리 후 표준 프로토콜을 사용하여 RNA를 상층액에서 분리하고 RNA 억제제 용액을 최종 RNA 용액에 첨가합니다. 마지막 단계는 블레이드에 걸린 조직 덩어리를 제거한 다음 일련의 에탄올 및 물 세척을 수행하여 균질화 장치 블레이드를 조심스럽게 청소하는 것입니다. 궁극적으로 이 절차를 통해 RNA 무결성 수가 7 이상인 마우스 췌장에 대한 RNA를 분리하여 일상적인 유전자 발현 분석에 사용할 수 있습니다.제 이름은 톰 슈미트(Tom Schmid)이고 저는 20년 넘게 RNA를 연구해 왔는데, 이 모든 시간 동안 쥐의 췌장을 위해 높은 무결성으로 RNA를 분리하는 것만큼 어려운 일을 경험한 적이 없습니다. 우리가 보여줄 기술은 쥐의 췌장을 위해 개발되었지만, 실제로 인간 세포의 조직, 세포주 또는 비장과 같은 갈비뼈 뉴클레아제가 풍부한 조직을 포함한 쥐의 다른 조직을 포함한 다양한 다른 조직에 사용되지 못할 이유가 없습니다. 이 프로토콜의 제안을 사용하면 마우스 췌장에서 높은 무결성을 가진 RNA를 분리할 수 있습니다.이는 QPCR, 유전자 발현 어레이 또는 RNA-Seq와 같은 많은 다운스트림 응용 분야에 사용할 수 있습니다. 올라 엘가말. 내 연구실의 선임 대학원생은 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 마우스를 안락사시킨 후 이 기술을 시연할 것입니다.멸균 수술 기구를 사용하여 25게이지 피하 주사 바늘을 사용하여 4개의 발로 각 동물을 평평한 표면에 뚫어 사체를 고정합니다. 마우스의 중간 부분을 잘라 열고 마우스에서 췌장을 빠르게 제거합니다. 집게를 사용하여 췌장을 잡고 스프링 가위를 사용하여 비장과 소장에서 잘라냅니다.마우스에서 제거하는 동안 췌장이 늘어나지 않도록 주의하십시오. 조직이 파괴되면 리보뉴클레아제가 방출될 수 있습니다. 췌장 전체를 8ml의 얼음 저온 용해 시약이 들어 있는 50입방센티미터 튜브에 넣습니다.튜브를 덮고 짧게 흔들어 조직을 시약에 담그고 지체 없이 즉시 다음 단계로 진행합니다. 다음으로, 5초 동안 췌장을 균질화합니다. 효율적인 균질화를 위해 조직이 블레이드로 당겨질 수 있도록 원심분리기 튜브의 바닥에 균질화기 블레

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Murine 췌장 아일릿 격리

마우스 작은 섬 격리에 대한 자세한 설명은 collagenase와 중성 단백 분해 효소를 정제의 조합의 현장 췌장 ductal cannulation 및 재관류에의 기술을 사용하여 설명되어 있습니다.

Langerhans 절연의 마우스 작은 섬은 정화의 Collagenase와 중성 단백 분해 효소의 조합을 사용하여

우리는 여기에서 제2형 당뇨병의 마우스 모델, Leprdb에서 섬을 분리하기 위한 프로토콜과 2개의 광자 현미경을 사용하는 온전한 섬에서 인슐린 분비를 측정하기 위한 라이브 셀 분석의 세부 정보를 제시합니다.

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

자기 갱신 성인 쥐의 췌장으로부터 분리 전구 세포의 분화를 검출하는 시험 관내 콜로니 검정 고안되어있다. 이러한 분석에서, 췌장 전구 세포가 메틸 - 함유 반고체 배지에서 3 차원 공간에서 세포 콜로니를 야기. 단일 세포와 개별 식민지의 특성을 처리하기위한 프로토콜이 설명되어 있습니다.

체외 식민지 분석 실험에서 트라이 강력한 전구 세포를 특성화를위한 성인 쥐 췌장에서 분리

우리는 신생아 쥐에서 그대로 섬을 분리 본원 프로토콜을 설명합니다. Pancreata 부분적으로 세척하고 손을 따기 다음, 콜라게나로 소화했다. 20-80 아일렛 클러스터 여러 섬 연구에 적합한 새로 태어난 쥐의 췌장에 따라 얻을 수있다.

신생아 마우스 췌장의 기능 독도의 효과적인 분리

이 섬 격리 프로토콜은 외분비 조직을 소화하기 위해 콜라게나아제 주사의 새로운 경로를 설명하고 마우스로부터 섬을 정화하기 위한 단순화된 그라데이션 절차를 설명했다. 효소 소화, 그라데이션 분리/정제, 그리고 아일렛 수작업 피킹이 포함됩니다. 성공적인 절연은 마우스당 250~350개의 고품질 및 완전한 기능을 갖춘 아일렛을 생성할 수 있습니다.

마우스에서 췌장 췌도 격리를 위한 간단한 고효율 프로토콜

단일 셀 RNA 시퀀싱 뒤 미 발달, 신생아 및 산 후 췌 내 분 비 세포의 격리 하는 방법을 설명 합니다. 이 방법을 사용 하면 분석 췌 장 내 분 비 계보 개발의 셀이 transcriptomic 역학.

마우스 췌 장 내 분 비 세포의 단일 셀 Transcriptomic 분석

여기서, 우리는 리보태그 시스템을 사용하여 성인 남성 마우스 생식세포의 선택집단으로부터 리보솜 및 관련 RNA의 면역침전을 기술한다. 전략적 번식과 신중한 면역 침전은 세균 세포 트랜스라토메에 알리고 돌연변이 표현형의 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하는 깨끗하고 재현 가능한 결과를 초래합니다.

남성 마우스의 생식 세포에서 리보태그 면역 강하

격리된 RNA의 순도와 무결성은 RNA 의존적 인 에세이에서 중요한 단계입니다. 여기서, 우리는 손상되지 않은 췌장 조직의 소량에서 RNA를 추출하는 실용적이고 빠르며 저렴한 방법을 제시합니다.

쥐 췌장 조직의 신속하고 비용 효율적인 RNA 추출

이 프로토콜은 전체 췌장에서 마우스 내피 세포를 분리하는 방법을 설명합니다.

마우스 췌장 내피 세포의 분리

이 연구는 마우스 췌장에서 기능성 원차 섬과 선반세포를 효율적으로 추출하는 단순화된 방법을 개발하여, 급성 췌장염 유발 당뇨병의 발병 기전에서 세포 간 소통을 연구하는 귀중한 도구를 제공하였습니다.

마우스에서 1차 섬과 1차 췌장 아시나세포를 동시에 분리하는 간단하고 신속한 방법

배우세요 마우스 췌장에서 리보핵산 풍부한 조직으로부터 고품질 RNA를 격리하는 방법을. 이 기술은 유전자 발현 분석을 위한 RNA 무결성을 유지하며, 신속한 조직 처리와 RNase 억제제 사용이 핵심입니다.

마우스 췌장에서 RNA 격리 : 리보 뉴 클레아 풍부한 조직

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