포스트 컬럼 유도체 화 반응 흐름 고성능 액체 크로마토 그래피 컬럼을 사용하여

이 방법의 전반적인 목표는 반응 흐름 컬럼을 사용하여 고성능 액체 크로마토그래피 포스트 컬럼 유도체화 또는 PCD 분석법의 효율성과 감도를 개선하는 것입니다. 이 방법은 제약, 생물의학 및 환경 과학과 같은 분야에서 HPLC 검출기에 대한 반응이 낮은 화합물을 분석하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 반응 코일이 필요하지 않다는 것입니다.

컬럼 폐수와 유도체화 시약의 혼합은 기존 방법보다 더 효율적으로 발생합니다. 이 방법은 항산화제, 아미노산 및 페놀이 대한 통찰력을 제공하는 데 사용되었습니다. 또한 티올, 금속, 항생제 및 독소와 같은 다른 계열 화합물에도 적용할 수 있습니다.

전체 샘플이 유도체화되지는 않았지만 낮은 띠 확장으로 인해 폐수 흐름 스트림 내 분석물의 농도는 기존의 컬럼 후 유도체화 분석보다 높습니다. 이 절차를 시작하려면 A 라인에 100% 물을 넣고 B 라인에 100% 메탄올을 이동상으로 사용하여 HPLC 기기를 준비하여 제조업체의 요구 사항에 따라 펌프를 퍼지합니다. HPLC 기기 구성 요소와 추가 유도체화 펌프를 설정합니다.

그런 다음 UV/VIS 검출기를 520나노미터의 파장에서 분석하도록 설정합니다. 반응 흐름의 입구 또는 RF 컬럼을 HPLC 기기에 연결합니다. 15cm 길이, 0.13mm 내경 튜브를 사용하여 배출구 주변 장치 포트를 UV/VIS 검출기에 연결합니다.

그런 다음 DPPH 펌프 라인을 RF 컬럼 배출구의 주변 장치 포트에 연결합니다. 컬럼 스토퍼를 사용하여 RF 컬럼의 배출구에서 사용하지 않는 주변 장치 포트를 차단합니다. 15cm 길이의 0.13mm 내경 튜빙을 RF 컬럼의 배출구 중앙 포트에 연결합니다.

HPLC 펌프의 유속을 100% 메탄올에서 분당 1mm로 가져옵니다. 그런 다음 10분 동안 컬럼을 100% 메탄올로 평형을 이룹니다. 이 시점에서 DPPH와 메탄올의 밀리리터당 0.1밀리그램 용액을 준비합니다.

DPPH 시약이 들어있는 플라스크를 10분 동안 초음파 처리합니다. 제조업체의 요구 사항에 따라 준비된 DPPH 시약으로 DPPH 펌프를 퍼지합니다. 그런 다음 두 개의 건조하고 깨끗한 용기를 가져 와서 하나는 중앙 "으로, 다른 하나는 주변 장치"로 표시하십시오.두 용기의 무게를 정확하게 측정합니다.

중앙 항구에서 나오는 폐수를 1분 동안 central"이라고 표시된 선박으로 수집합니다. 중앙 항구 선박의 무게를 재측정한 후 중앙 항구에서 흐름의 무게를 계산합니다. RF 컬럼의 주변 장치 포트에 연결된 UV/VIS에서 나오는 폐수에 대해 이전 단계를 반복합니다.

주변 포트 선박의 무게를 계산합니다. 다음으로, 중앙 및 주변 포트에서 오는 흐름의 백분율을 계산합니다. 유량비가 정확할 때까지 이전 단계를 반복한 다음 DPPH 펌프의 유량을 분당 0.5밀리리터로 설정합니다.

실행이 완료되면 유도체화 시약 펌프 흐름을 중지합니다. 주변 장치 포트에서 DPPH 시약 펌프 라인을 제거하고 포트를 스토퍼합니다. 컬럼을 저장해야 하는 이동상과 평형을 이루어 이동상이 10분 동안 분당 1mm의 속도로 컬럼을 통과할 수 있도록 합니다.

그런 다음 HPLC 기기에서 기포상 펌프의 흐름을 중지합니다. 마지막으로 DPPH 시약을 메탄올로 교체하고 추가 펌프를 퍼지합니다. 기존 PCD 및 RF-PCD 기기를 모두 사용하여 DPPH 라디칼로 유도체화된 리스트레토 커피 샘플의 두 가지 크로마토그램이 여기에 나와 있습니다.

RF-PCD 및 기존 PCD 모드 모두에서 분석된 각 아미노산에 대한 계산된 정량 및 검출 한계가 여기에 나열되어 있습니다. 기존 PCD 방법, RF-PCD 방법 및 RF-PCD 방법을 사용하여 분석된 4가지 아미노산의 크로마토그램이 여기에 나와 있습니다. 기존 PCD 및 RF-PCD 방법을 모두 사용하여 글리신과 류신으로 인한 피크에 대해 얻은 신호의 비교가 여기에 표시됩니다.

다음은 기존 PCD 방법, RF-PCD 방법 및 RF-PCD 방법을 사용하여 분석할 때 트립토판 피크의 피크 너비를 비교한 것입니다. 유도체화 계획에 대한 반응을 보이는 일부 성분과 그렇지 않은 성분을 포함하는 21개 성분으로 구성된 테스트 샘플이 분리, 유도체화 및 검출되었습니다. 동일한 혼합물도 분리되어 비교를 위해 유도체화되지 않은 상태로 검출되었습니다.

RF-PCD 컬럼을 사용하여 유도체화한 것과 유도체화되지 않은 파라크레졸의 피크 모양을 비교한 결과가 여기에 나와 있습니다. 이 기법을 완전히 익히면 기존의 컬럼 유도체화 후 분석과 동시에 설정할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때 가능한 한 규정된 유속 비율에 가깝게 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

이 절차에 따라 다른 화합물을 분석하기 위해 OPA, 닌히드린 또는 할로겐과 같은 다른 포스트 컬럼 유도체화 시약을 사용할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 반응 흐름 컬럼을 설정하고 조정하는 방법에 대해 잘 알게 되었을 것입니다.