병렬 세그먼트 흐름 열 조정과 멀티 플렉스 감지 활성화

이 HPLC 절차의 전반적인 목표는 멀티플렉스 검출이 가능하도록 병렬 분할 플로우 컬럼을 조정하는 것입니다. 이 방법은 건강 및 웰빙, 환경 과학, 법의학 및 바이오 디스커버리와 같은 복잡한 샘플 분석이 필요한 모든 분야의 주요 질문에 답합니다. 이 기술을 통해 포괄적인 시료 분석을 수행할 수 있을 뿐만 아니라 복잡한 혼합물에 있는 물질의 화학적 및 생체 활성 특성에 대한 정보를 얻을 수 있습니다.

또한 다중 검출 프로토콜을 통해 신속한 분석이 가능합니다. 이 방법을 사용하면 커피 및 와인과 같은 복잡한 혼합물의 화학적 지문을 정의하기 위한 전략을 개발할 수 있으므로 제조업체는 자사 제품과 값싼 위조 품종의 차이를 구별할 수 있습니다. 처음에는 정확한 분석을 위해 전체 샘플을 하나의 검출기로 보내지 않는 것이 이상하게 느껴질 수 있습니다.

그러나 각 유동 스트림 내의 분석물 농도는 기존 컬럼의 총 유동 흐름보다 높습니다. 먼저 이동상 A 및 B에 대해 각각 100%UE 물과 순수 메탄올로 HPLC 기기를 설정합니다. MS 검출기를 사용하는 경우 두 이동상에 0.1% 포름산을 첨가한 다음 제조업체의 지침에 따라 HPLC 펌프를 퍼지합니다.

MS UV VS. 조립 그리고 DPPH 검출기. 제조업체의 지침에 따라. 검출기 라인의 데드 볼륨(dead volume)이 최소화되도록 구성 요소가 적절하게 배열되었는지 확인합니다.

그런 다음 UV VISTA 검출기 파장을 여기에서 샘플에 특정한 파장으로 설정합니다. MS 검출기의 경우 280나노미터. 전체 이온 수 또는 전체 스캔 검출 방법과 함께 TIC 분석을 위해 포지티브 모드를 사용합니다.

MS 검출기의 온도와 가스 흐름을 다음 값으로 평형을 이룹니다. 기화기 온도 500°C, 모세관 온도 350°C, 보조 가스 유량 40개, 스윕 가스 흐름 5개, 칼집 가스 속도 60개, 스프레이 전압 3.5kV. DPPH 라디칼 시약을 준비하려면 먼저 250ml의 메탄올에 DPPH 라디칼 250mg을 부피 플라스크에 용해시킵니다.

용액에 250마이크로리터의 포름산을 넣고 용액을 10분 동안 초음파 처리합니다. 그런 다음 빛 노출을 방지하기 위해 플라스크와 호일을 덮습니다. 다음으로, DPPH 라디칼 시스템을 설정하기 위해 제조업체의 조언에 따라 DPPH 라디칼 용액으로 펌프를 퍼지합니다.

펌프 라인이 T피스의 입구에 고정되어 있는지 확인한 다음 100마이크로리터 반응 코일을 T피스의 출구에 연결합니다. 검출기를 반응 코일 ENC 케이스, 반응 코일 및 컬럼 히터의 다른 쪽 끝에 부착합니다. 마지막으로 DPPH 라디칼 UV V 검출기를 520나노미터로 설정합니다.

병렬 분할 흐름 또는 PSF 컬럼을 구성하려면 먼저 컬럼 주입구를 HPLC 기기에 연결합니다. 그런 다음 튜브 조각을 사용하여 중앙 포트를 MS 검출기에 연결합니다. 동일한 치수의 튜브를 사용하여 하나의 주변 컬럼 포트를 UV VS 검출기에 연결하고 다른 포트를 DPPH 라디칼 검출 시스템의 T 피스에 연결합니다.

사용하지 않는 주변 장치 포트를 컬럼 스토퍼로 차단합니다. 4.6mm, 내경 및 250mm 길이의 컬럼에 대해 HPLC의 유속을 100% 이동성 B상 B의 분당 1밀리리터로 조정합니다. 20분 동안 평형을 유지합니다.

PSF 시스템 조정을 시작하려면 먼저 빈 수집 용기를 뜯습니다. 이 바이알을 사용하여 UV VS에서 이동상을 별도로 수집합니다. 그리고 DPPH 라디칼 포트. 수집 기간을 기록하고 각 용기에 최소 500mg의 용매를 수집하십시오.

다음으로, 수집 용기의 무게를 측정하여 이동상의 질량을 측정하고 질량을 메탄올의 밀도로 나누어 각 포트에서 수집된 이동상의 부피를 계산합니다. 마지막으로, MS 검출기에 대한 유속을 결정하고 모든 검출기의 유량 비율을 텍스트 프로토콜에 명시된 총 유량의 백분율로 계산합니다. 유량 비율이 이상적인 값에서 크게 벗어나면 필요한 곳에 튜브를 추가하여 배압을 조정하고 수집 및 계산 프로세스를 반복합니다.

마지막으로 검출기에 연결된 출구 포트의 유량과 일치하도록 DPPH 라디칼 시약 펌프의 유량을 설정합니다. 커피 샘플에 대해 다중화 HPLC 분석을 수행했습니다. DPPH 라디칼 UV VS를 기록하는 기능. 또한 Ms.Chromatograms는 DPPH 라디칼에 양성으로 반응한 시료의 화합물

을 머무름 시간 정렬을 기반으로 하는 UV 대 MS 반응과 쉽게 일치시킬 수 있도록 하며

, MSS TIC 검출기에서 양성 반응이 보인 경우 피크의 분자량을 기록했습니다. 서로 다른 검출 프로세스 간의 피크를 쉽게 일치시킬 수 있어 커피와 같은 복잡한 샘플에 대한 빠르고 효율적인 형태의 스크리닝 및 특성화가 가능합니다.마스터하면 이 기술을 약 한 시간 만에 설정하고 이 절차에 따라 샘플 분석을 준비할 수 있습니다. 굴절률 형광과 같은 다른 검출기 및 화학 발광과 같은 화학 기반 검출을 사용하여 추가 시료 정보를 얻을 수 있습니다.

이 동영상을 시청한 후에는 복잡한 시료를 더 잘 이해하기 위해 멀티플렉싱 검출 프로세스의 중요성을 인식해야 합니다. 또한 병렬 분할 유동 컬럼을 사용한 다중 검출은 생물 탐사를 수행하는 매우 효율적인 방법입니다.