Name: 의 검출을위한 더 민감하고 특정 원체 한천 배지의 개발 장염 비브리오 균 및 기타 비브리오 종 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: 학습하세요 새로운 크로모제닉 배지를 사용하여 Vibrio parahaemolyticus를 검출하고 분리하는 방법을. 기존 배지보다 민감도와 특이도가 향상되어 식품 안전 및 환경 미생물학 연구에 유용합니다.

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우리는이 프로젝트에 대한 그들의 지원 M. Channey, E. 차우 및 K. 토마스 감사합니다. 프로젝트 공급이 부분적으로 캘리포니아 폴리 테크닉 주립 대학에 의해 투자되었다.

1. 미디어 및 미생물 균주의 배양 참고 : 모든 실험에서 사용 무균 기술. 멸균 재료를 사용합니다. 사용하기 전에 모든 용기, 도구 및 시약을 소독. 그들은 생물학적으로 간주되기 때문에 이전의 처분에 모든 폐기물을 압력솥. 다음 절차의 모든 압력솥 온도와 시간의 조합 ≥121 ° C X ≥15 분. <ol><li> ~ 1 L 트립신 콩 한천 (TSA)하려면, 먼저 자기 교반 막대를 함유하는 2 L 삼각 플라스크에 탈 이온수 1 L를 추가한다. 최종 부피보다 2 배 이상 큰 플라스크를 사용합니다. 트립신 간장 국물 분말 30 g을 플라스크에 과립 한천 20g을 추가합니다. 참고 : 사용 2 % 한천 대신 1.5 %가 일부 비브리오 종의 득시글 거리는을 제한합니다. <ol><li> 교반기 설정하여 철저히 섞는다. 교반하면서, 혼합물을 끓여 열을 켭니다. 혼합물이 비등하기 시작하자마자 히터에서 플라스크를 제거합니다. 느슨하게 번째 커버주석 호일 전자 플라스크. 오토 클레이브를하기 전에 플라스크에 고정하는 포일 테이프입니다. </li><li> 트립신 콩 국물 (TSB)를하려면, 단계 1.1의 조리법에서 한천을 생략합니다. 참고 : 대신 삼각 플라스크의 병을 사용할 수 있습니다. </li><li> 2 % 염화나트륨 또는 염화나트륨 (TSAS)이 보충 된 트립신 콩 한천을하기 전에 교반 및 가열 혼합물에 염화나트륨 20g을 추가한다. 2 %의 NaCl (TSBS)로 보충 트립신 간장 국물을 만들려면, 한천을 생략하기 전에 교반 및 가열 혼합물에 염화나트륨 20g을 추가합니다. </li></ol></li><li> 뇌 심장 주입 (BHI) 한천을 BHI 분말 37g 정제 물 1 L에 15g 한천 과립을 일시 중단합니다. 자주 교반 열은 분말을 용해한다. 압력솥. BHI 국물을 할 수있는 한천을 생략합니다. </li><li> , TCBS 한천을 증류수 1 L에 TCBS 분말 89g을 중단한다. 1 분 동안 자주 교반 및 종기와 열은 완전히 분말을 용해한다. 오토 클레이브하지 마십시오. </li><li> 모든 한천 미디어, 45-5로 뜨거운 한천을 냉각수욕 0 ° C. 5 ~ 6 판의 스택 빈 페트리 접시를 정렬합니다. 스택의 바닥에서 시작, 반 전체에 도달하는 각 페트리 접시에 용융 한천을 부어. 주입 후 페트리 접시 뚜껑을 닫습니다. 한천이 판은 실온에서 앉을 수 있도록함으로써 응고 할 수 있습니다. <ol><li> 한천 플레이트 다음날 또는 12 시간 후를 사용합니다. 최대 2 주 동안 냉장고에 사용하지 않는 접시를 저장합니다. 사용하기 전에 냉장고에서 플레이트를 제거하고 적어도 15 분 동안 실온에서 평형을. 참고 : 하나 리터 한천 ~ 45 한천 판을 만든다. 한천 플레이트를 제조 당일에 충분히 건조, 효과적으로 콜로니의 확산을 감소시키기 위해 냉장 보관 한 후, 실온으로 평형하도록 허용. </li></ol></li><li> 초콜릿과 발색 한천 플레이트를 구하여 각 실험 전에 실온에서 그들을 평형. </li><li> 표 1마다 몇 다에 표시된 모든 54 미생물 균주를 배양YS. <ol><li> 냉동 재고 또는 BHI, TSB / TSA 또는 초콜릿 한천 등의 비 선택적 미디어에 이전 배치에서 문화를 전송하는 멸균 접종 루프를 사용합니다. 염성 비브리오 종을 성장. TSBS / TSAS합니다. </li><li> 문화의 순도를 확인하려면, 연속 고립 된 식민지의 관찰을 허용 할 패턴의 모든 변종. 예를 들어, 최종적으로 절연 콜로니를 수득 작은 양의 박테리아의 대량 희석 삼상 줄무늬 패턴을 사용한다. </li></ol></li><li> 최대 48 시간 동안 35-37 ℃에서 판에 거꾸로 품어. 캄 필로 박터 종의 경우., 튜브 또는 접시를 품어 가스 주머니를 포함하는 덮개가 닫힌 병에서 호기성 환경을 생성한다. 부화 후 식민지 형태를 관찰한다. 순수 문화는 비슷한 식민지 형태를 나타내는 식민지를 산출한다. 주 : COL에 떨어지는 뚜껑의 밑면에 형성된 응축수 방울을 방지하기 위해 모든 플레이트를 거꾸로 부화onies. </li></ol> PCR에 의한 2 종 결정 <ol><li> V.의 신원을 확인하기 위해 TLH - PCR을 실시 비브리오 균주. 사용 프라이머는 -F (5 &#39;AAA GCG GAT TAT GCA GAA GCA CTG 3&#39;)와 TLH의 -R (5 &#39;GCT ACT TTC 태그 CAT TTT CTC TGC 3&#39;)이 thermolabile의 용혈 유전자 (20)의 450 bp의 단편을 증폭 TLH . <ol><li> 각 V. 몇 절연 콜로니를 전송하는 무균 접종 루프를 사용하여 TSAS에서 TSBS 5 ㎖에 비브리오 균주. 16 ~ 24 시간 동안 35-37 ° C에서 품어. </li><li> 원심 분리기 문화 1 분 14,000 XG에. 상등액을 제거하고 인산 완충 식염수 (PBS)로 두 번 펠렛을 세척 하였다. 세포 용 해물을 수득 3 분 동안 현탁액을 끓인다. 참고 : V. 비브리오 균은 용해되기 쉽다. 따라서 용해 시약이 필요하지 않습니다. 주형으로 직접 콜로니의 비트를 사용하는 것도 가능하다. </li><li> 25 ㎕의 반응 절에서 PCR을 수행olume. 1X PCR 완충액의 최종 농도는 1.5 밀리미터의 MgCl 2, 각각의 dNTP 100 μM, 각 프라이머 1 μM, 1 U의 Taq 중합 효소 및 세포 용 해물 1 μl를 함유하는 반응 혼합물을 준비한다. 30 초, 30 초 동안 58 ° C, 60 초 21 72 ° C, 94 ° C의 증폭 35주기를 실행하여 5 분 동안 94 ℃에서 예비 인큐베이션 단계 후에. </li><li> 1.5 % 아가 로스 젤에서 5 μL 앰플 리콘의 부하 분취. 전기 영동을 시작 전원을 켭니다. 에 티듐 브로마이드 염색 후 UV 조명 하에서 증폭의 유무를 시각화. </li></ol></li></ol> 선택 및 차등 미디어 3. 성장 <ol><li> 2 ~ 4 일 실험 전에 행진 식민지 격리를 위해 비 선택적 매체 (TSAS, BHI 또는 초콜릿 한천)에 표 1에 나타난 모든 미생물 균주. 48 시간 동안 35-37 ° C에서 번호판을 품어. 부화 후 식민지 형태를 관찰하여 문화의 순도를 확인. 순수 문화는 비슷한 식민지 형태를 나타내는 식민지를 산출한다. </li><li> 국물 5 ㎖로 단계 3.1에서 몇 격리 식민지를 전송합니다. 16 ~ 24 시간 동안 35-37 ℃에서 튜브를 품어. 주 : 이하 사일 오래 사용 젊은 식민지은 모든 실험에서 하룻밤 문화를 준비 할 수 있습니다. </li><li> 킬 콜로니 분리를위한 선택 및 차등 미디어 (TCBS와 발색 한천)에 하룻밤 문화의 백금이. 최대 96 시간 동안 35-37 ° C에서 번호판을 품어. </li><li> 접시에 배양 밀도와 격리 식민지의 크기를 모두 검사하여 모든 균주의 전체 성장을 기록합니다. 주변 및 / 또는 UV 조명 아래 식민지의 색상을 기록합니다. 이러한 상승, 마진과 형태로 고립 된 식민지의 다른 특성을합니다. </li></ol> 4. 복구 분석 <ol><li> V.의 대표 하위 집합을 선택 비브리오 균주 다른 혈청 형과 분리의 기원을 포함 (N = 14) <s&gt; 22입니다. TSBS 5 ㎖로 판에서 젊은 문화를 접종한다. 16 ~ 24 시간 동안 35-37 ℃에서 튜브를 품어. </li><li> 아래에 설명 된대로 하룻밤 문화의 표준 플레이트 카운트 방법을 실시한다. <ol><li> 소용돌이 잘 하룻밤 문화를 혼합합니다. 900 ㎕의 PBS를 함유하는 튜브에 밤새 배양 100 ㎕를 전달함으로써 10 배 또는 10 -1 희석 만든다. 소용돌이는 잘 혼합한다. </li><li> 900 ㎕의 PBS를 포함하는 다른 튜브에 10 -1 희석 튜브에서 100 μl를 전송하는 새로운 피펫 팁을 사용합니다. 소용돌이는 잘 혼합한다. 이 10-2 희석을 구성한다. 10-7 희석액을 수득하는 공정을 순차적으로 반복한다. </li><li> 10 -4 -7 (10)에 희석 튜브를 사용하여, 발색, TCBS 및 TSAS 한천 플레이트에 100 ㎕를 각각의 접시. 참고 : 접시에 희석 계수 (DF)이 10-5 각각 -8 10이된다. </li><li> t에 균등하게 분취 확산그는 표면 한천. 참고 : 가장 희석 나누어지는 처음 확산되는만큼, 동일한 매체에 변형 당 같은 스프레더를 사용하는 것이 좋은 (즉, 10-8 -5 ~ 10에서). 다른 매체에 대해 동일한 스프레더를 사용하지 마십시오. </li><li> 최대 96 시간 동안 35-37 ° C에서 번호판을 품어. 접시에 식민지를 계산합니다. 너무 계산하는 많은 (tntc) 또는 / ㎖ 다음에 따라 25 계산 CFU보다 작은 식민지를 베어링 판을 무시 : <img alt="식 (1)" src="/files/ftp_upload/54493/54493eq1.jpg" /> 어디에 N은 희석 튜브에 세포의 수 = / g CFU / ㎖ 또는 CFU로 표현 C는 25-300 콜로니지지 플레이트에 콜로니를 계수의 총 수 = n은 1 카운트 콜로니 하부 DF 출신 판 (들)의 개수 = N이 카운트 콜로니 후속 10 배 희석 출신 판 (들)의 개수 = 디f는 저급 희석 계수 = (즉, 높은 농도의 희석) </li></ol></li><li> 다른 매체들 사이 CFU / mL로 비교합니다. 100 %로 TSAS에 CFU / ㎖를 사용 V.의 % 복구를 계산 비브리오 균은 발색과 TCBS 한천에 성장. </li></ol> 5. 경쟁 분석 <ol><li> 발색과 TCBS 한천에 다른 식민지 형태학을 나타내는 균주의 하위 집합을 선택합니다. 참고 :이 방법은 식민지 V.에서 유래 계산하는 것이 가능할 것이다 접종에 다른 종의 존재에도 불구하고 만 비브리오 균,. <ol><li> V. 선택 각각 TCBS와 발색 한천에 예상 터키석과 시안 식민지를 산출 비브리오 균주. </li><li> 비 V.를 선택 비브리오 균과 이들 매체 중 하나에 성장, 또는 다른 식민지 색을 나타내지 않는 비 비브리오 종. 참고 : 예를 들어, V. 메 치니 코비는 O를 매우 약하게 성장N TCBS는합니다. 발색 한천에 성장하지 않았다 시겔 라 sonnei는 TCBS에 성장하지만 발색 한천에 마젠타 식민지를 산출하지 않습니다. </li></ol></li><li> 위의 균주의 선택, 비 선택적 미디어에 성장 격리 식민지를 사용하여 밤새 국물 문화를 준비합니다. <ol><li> V.의 야간 문화를 만들기 비브리오 균 및 V. TSAS에서 TSBS 5 ㎖로 약간 고립 된 식민지를 전송하여 메 치니 코비. 16 ~ 24 시간 동안 35-37 ° C에서 품어. </li><li> BHI 배지 5 ㎖에 BHI 한천에서 몇 고립 된 식민지를 전송하여 시겔의 sonnei의 야간 문화를합니다. 16 ~ 24 시간 동안 35-37 ° C에서 품어. </li></ol></li><li> 각 균주를 들어, 단계 4.2.1과 4.2.2 유사한 희석 시리즈를 수행합니다. TSAS 또는 BHI 플레이트에 적합한 희석 단계 4.2.5에 도시 된 수학 식을 사용하여 밤새 배양 CFU / ㎖를 결정한다. 참고 : 일반적으로 10 -5 10-7 희석 100 μL튜브는 대부분의 문화에 대해 작동합니다. 다음 단계에서 사용 된 세포의 정확한 양을 계산하기 위하여 백업 CFU / ml의 값을 사용한다. 다음 단계, 단계 5.3와 동일한 날짜에 수행 되더라도 산출 용액 CFU / 값은, 인큐베이션 후 얻어진다. </li><li> 단계 5.2 및 5.3에서 밤새 배양하고 희석 튜브를 사용하여, V. 상이한 양 믹스 비브리오 균주 및 비 V. 비브리오 종. 예를 들어, V.의 10-5 희석 튜브 500 μL를 혼합 V.의 하룻밤 문화의 500 μL와 비브리오 균 메 치니 코비. 참고 :이 혼합물은 높은 미생물의 배경을 재현합니다. 낮은 미생물 배경을 시뮬레이션 두 종에서 500 μL에게 10-5 희석 튜브의 각을 혼합합니다. </li><li> 발색, TCBS 및 TSAS 한천 플레이트의 혼합물 100 ㎕를 각각 확산. </li><li> 35-37 ° C에서 부화 후 96 시간까지, V.의 식민지를 계산하기위한 parahaemolyticuS 및 비 V. 발색 및 TCBS 한천 성장과 콜로니 형태에서의 차이에 기초하여 비브리오 종. 참고 : 예를 들어, 비 V. 비브리오 종은 모든 식민지 V. 될 것입니다, 발색과 TCBS 한천에 성장하지 않습니다 비브리오. 비 V. 경우 비브리오 종은 모두 미디어에 성장, 발색 한천에 TCBS 및 시안 식민지 만 청록색 식민지 V. 될 것입니다 비브리오. 비 V. 비브리오 종 또는 V. 유사한 식민지 형태를 나타내지 않을 수있다 TSAS에 비브리오. <ol><li> 비 V. 경우 비브리오 종 V. 유사 성장 이 비 선택적 매체에 비브리오 균은 V.에 대한 번호를 얻기 위해 두 가지에 의해 식민지 카운트를 분할 만 비브리오. 단계 5.3로부터 유도 된 예상 된 수와 실제의 콜로니 수를 비교한다. </li></ol></li></ol> 6.하여 Eff굴 균질 ECTS <ol><li> 고기와 술을 포함한에서 ≥12 연체 동물 조개 ≥50 g 굴 고기의 무게를. <ol><li> 굴 고기와 술에 PBS의 동일한 금액을 추가합니다. 90 초 동안 고속 혼합 블렌드. 이것은 2-1 희석 굴 파쇄를 구성한다. </li><li> PBS의 400g에 2 -1 희석 굴 균질의 100g을 추가합니다. 무게가 아니라 부피를 측정하기위한 스케일을 사용한다. 1 분 동안 고속 혼합 블렌드. 굴 균질를 압력솥. 참고 :이 급상승에 사용되는 굴 균질 될 것입니다. </li></ol></li><li> 굴 파쇄의 존재 복구 분석 (단계 4)를 반복한다. <ol><li> 500 그램 굴 균질가 식은 후에, V. 100 μl를 추가 여기에 TSBS에서 재배 야간 문화를 비브리오. V.의 실제 양을 결정 단계 4.2에 설명 된 표준 플레이트 카운트 절차를 수행하여 접종에서 비브리오 균 세포. </li></ol></li><li> 대표굴 파쇄의 존재 경쟁 분석 (단계 5)을 먹는다. <ol><li> 500 그램 굴 균질가 식은 후에, V.의 하룻밤 문화의 각 μL (100)를 추가 비브리오 균 및 비 V. 그것 비브리오. 세균의 실제 양을 결정 표준 플레이트 카운트 절차를 수행하여 접종 세포 단계 4.2에 설명 </li></ol></li><li> 또한 호모 게 나이저를 사용해 굴 파쇄와 균체 섞는다. 참고 : 혼합 한 후, 호출되는 의도적으로 첨가 세포를 포함하는 굴 균질는 굴 균질 아군. </li><li> 스파이크 굴 균질 희석 단계 4.2.2에 기재된 절차에 따라서, 10-1 10-3로 희석 튜브를 얻을 수 있도록. 발색, TCBS 및 TSAS 한천에 각 희석 100 μl를 확산. 최대 96 시간 동안 35-37 ° C에서 번호판을 품어. </li><li> 전으로 발색 및 TCBS 한천의 실제 콜로니 수를 비교예견했던 식민지 수는 6.2.1과 6.3.1 단계에서 추론. 참고 : 예를 들어, V.의 튜브 비브리오 균 하룻밤 문화는 10 8 CFU가 / ㎖, 100 μL의 접종은 10 7 세포 5 × 104 세포 / g를 산출, 굴 균질의 500 g에 첨가하는 것을 의미가 포함되어 있습니다. 희석 및 도금 후, 플레이트는 DF를 갖는 = 10-2 500 콜로니를 수득한다; 이 갖는 안양 동안 = 10-3 (50) 식민지를 산출한다. 이러한 예상 식민지 수가 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Yeung, P. S., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology%2C+pathogenesis%2C+and+prevention+of+foodborne+Vibrio+parahaemolyticus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiology, pathogenesis, and prevention of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections.</a> Foodborne Pathog. Dis. 1 (2), 74-88 (2004).</li>
<li>Yeung, P. S. M., Boor, K. J. Epidemiology, molecular biology, and detection of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYeung%2C+PSM+%22Foodborne+and+Waterborne+Bacterial+pathogens%3A+Epidemiology%2C+Evolution+and+Molecular+Biology%22">Foodborne and Waterborne Bacterial pathogens: Epidemiology, Evolution and Molecular Biology</a>. Faruque, S. M. , Caister Academic Press. 153-184 (2012).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+Signs%3A+Incidence+and+Trends+of+Infection+with+Pathogens+Transmitted+Commonly+Through+Food+-+Foodborne+Diseases+Active+Surveillance+Network%2C+10+U.S.+Sites%2C+1996-2010%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Vital Signs: Incidence and Trends of Infection with Pathogens Transmitted Commonly Through Food - Foodborne Diseases Active Surveillance Network, 10 U.S. Sites, 1996-2010.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 10, 1996-2010 (2011).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. Summary of human Vibrio cases reported to CDC, 2008. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://stacks.cdc.gov/view/cdc/21591">https://stacks.cdc.gov/view/cdc/21591</a> (2008).</li>
<li>Scallan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foodborne+illness+acquired+in+the+United+States+-+major+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Foodborne illness acquired in the United States - major pathogens.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (1), 7-15 (2011).</li>
<li>Baross, J., Liston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+Vibrio+parahaemolyticus+and+related+hemolytic+vibrios+in+marine+environments+of+Washington+State%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Occurrence of Vibrio parahaemolyticus and related hemolytic vibrios in marine environments of Washington State.</a> Appl. Microbiol. 20 (2), 179-186 (1970).</li>
<li>Baross, J., Liston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Vibrio+parahaemolyticus+from+the+Northwest+Pacific%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Isolation of Vibrio parahaemolyticus from the Northwest Pacific.</a> Nature. 217 (5135), 1263-1264 (1968).</li>
<li>Kueh, C. S., Chan, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+in+bivalve+shellfish+with+special+reference+to+the+oyster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Bacteria in bivalve shellfish with special reference to the oyster.</a> J. Appl. Bacteriol. 59 (1), 41-47 (1985).</li>
<li>Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bad+Bug+Book%2C+Foodborne+Pathogenic+Microorganisms+and+Natural+Toxins%22">Bad Bug Book, Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins</a>. , Second Edition, (2012).</li>
<li>Qadri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+and+inflammatory+immune+responses+in+patients+infected+with+strains+of+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Adaptive and inflammatory immune responses in patients infected with strains of Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Infect. Dis. 187 (7), 1085-1096 (2003).</li>
<li>Food and Drug Administration. Quantitative risk assessment on the public health impact of Vibrio parahaemolyticus in raw oysters. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/ResearchAreas/RiskAssessmentSafetyAssessment/ucm050421.htm">http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/ResearchAreas/RiskAssessmentSafetyAssessment/ucm050421.htm</a> (2005).</li>
<li>Food and Drug Administration. Bacteriological analytical manual online. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070830.htm">http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070830.htm</a> (2004).</li>
<li>MacFaddin, J. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMacFaddin%2C+JF+%22Media+for+isolation-cultivation-identification-maintenance+of+medical+bacteria%22">Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria</a>. 1, Williams & Wilkins. Baltimore, Md. (1985).</li>
<li>Bottone, E. J., Robin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+parahaemolyticus%3A+suspicion+of+presence+based+on+aberrant+biochemical+and+morphological+features%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio parahaemolyticus: suspicion of presence based on aberrant biochemical and morphological features.</a> J. Clin. Microbiol. 8 (6), 760-763 (1978).</li>
<li>Lotz, M. J., Tamplin, M. L., Rodrick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiosulfate-citrate-bile+salts-sucrose+agar+and+its+selectivity+for+clinical+and+marine+vibrio+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Clin.+Lab.+Sci%22%5BJournal%5D)">Thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose agar and its selectivity for clinical and marine vibrio organisms.</a> Ann. Clin. Lab. Sci. 13 (1), 45-48 (1983).</li>
<li>Hara-Kudo, Y., Nishina, T., Nakagawa, H., Konuma, H., Hasegawa, J., Kumagai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+detection+of+Vibrio+parahaemolyticus+in+seafood%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved method for detection of Vibrio parahaemolyticus in seafood.</a> Appl. Environ. Microbiol. 67 (12), 5819-5823 (2001).</li>
<li>Eddabra, R., Piemont, Y., Scheftel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+new+chromogenic+medium%2C+chromID+Vibrio%2C+for+the+isolation+and+presumptive+identification+of+Vibrio+choleare+and+Vibrio+parahaemolyticus+from+human+clinical+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Microbiol.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a new chromogenic medium, chromID Vibrio, for the isolation and presumptive identification of Vibrio choleare and Vibrio parahaemolyticus from human clinical specimens.</a> Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 30 (6), 733-737 (2011).</li>
<li>Kodaka, H., Teramura, H., Mizuochi, S., Saito, M., Matsuoka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Compact+Dry+VP+method+for+screening+raw+seafood+for+total+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food.+Prot%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Compact Dry VP method for screening raw seafood for total Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food. Prot. 72 (1), 169-173 (2009).</li>
<li>Su, Y. C., Duan, J., Wu, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectivity+and+specificity+of+a+chromogenic+medium+for+detecting+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Selectivity and specificity of a chromogenic medium for detecting Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food Prot. 68 (7), 1454-1456 (2005).</li>
<li>Bej, A. K., Patterson, D. P., Brasher, C. W., Vickery, M. C., Jones, D. D., Kaysner, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+total+and+hemolysin-producing+Vibrio+parahaemolyticus+in+shellfish+using+multiplex+PCR+amplification+of+tl%2C+tdh+and+trh%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl, tdh and trh.</a> J. Microbiol. Methods. 36 (3), 215-225 (1999).</li>
<li>Yeung, P. S. M., DePaola, A., Kaysner, C. A., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PCR+assay+for+specific+detection+of+the+pandemic+Vibrio+parahaemolyticus+O3%3AK6+clone+from+shellfish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">A PCR assay for specific detection of the pandemic Vibrio parahaemolyticus O3:K6 clone from shellfish.</a> J. Food Sci. 68 (4), 1459-1466 (2003).</li>
<li>Yeung, P. S. M., Hayes, M. C., DePaola, A., Kaysner, C. A., Kornstein, L., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+phenotypic%2C+molecular%2C+and+virulence+characterization+of+Vibrio+parahaemolyticus+O3%3AK6+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative phenotypic, molecular, and virulence characterization of Vibrio parahaemolyticus O3:K6 isolates.</a> Appl. Environ. Microbiol. 68 (6), 2901-2909 (2002).</li>
<li>Duan, J., Su, Y. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+a+chromogenic+medium+with+thiosulfate-citrate-bile+salts-sucrose+agar+for+detecting+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">Comparison of a chromogenic medium with thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose agar for detecting Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food Sci. 70, M125-M128 (2005).</li>
<li>Pinto, A. D., Terio, V., Novello, L., Tantillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+thiosulphate-citrate-bile+salt+sucrose+%28TCBS%29+agar+and+CHROMagar+Vibrio+for+isolating+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Comparison between thiosulphate-citrate-bile salt sucrose (TCBS) agar and CHROMagar Vibrio for isolating Vibrio parahaemolyticus.</a> Food Control. 22 (1), 124-127 (2011).</li>
<li>Canizalez-Roman, A., Flores-Villaseñor, H., Zazueta-Beltran, J., Muro-Amador, S., Leòn-Sicairos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+a+chromogenic+agar+medium-PCR+protocol+with+a+conventional+method+for+isolation+of+Vibrio+parahaemolyticus+strains+from+environmental+and+clinical+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of a chromogenic agar medium-PCR protocol with a conventional method for isolation of Vibrio parahaemolyticus strains from environmental and clinical samples.</a> Can J Microbiol. 57 (2), 136-142 (2011).</li>
<li>Kriem, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+Vibrio+spp.+in+raw+shrimps+%28Parapenaeus+longirostris%29+and+performance+of+a+chromogenic+medium+for+the+isolation+of+Vibrio+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Lett+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of Vibrio spp. in raw shrimps (Parapenaeus longirostris) and performance of a chromogenic medium for the isolation of Vibrio strains.</a> Lett Appl Microbiol. 61 (3), 224-230 (2015).</li>
<li>Food Drug Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+guidance+on+reporting+results+from+studies+evaluating+diagnostic+tests%5BTitle%5D)+AND+%22http%3A%2F%2Fwww.fda.gov%2FRegulatoryInformation%2FGuidances%2Fucm071148.htm%22%5BJournal%5D)">Statistical guidance on reporting results from studies evaluating diagnostic tests.</a> http://www.fda.gov/RegulatoryInformation/Guidances/ucm071148.htm. , (2007).</li>
<li>Burd, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+laboratory-developed+molecular+assays+for+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Validation of laboratory-developed molecular assays for infectious diseases.</a> Clin Microbiol Rev. 23 (3), 550-576 (2010).</li>
<li>World Organisation for Animal Health. Principles and methods of validation of diagnostic assays for infectious diseases. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf">http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf</a> (2013).</li>
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일부 미디어는 캘리포니아주 산타마리아에 있는 Hardy Diagnostics에서 아낌없이 제공했습니다. Thorsen은 캘리포니아 폴리테크닉 주립대학교에 재학 중일 때 이 연구를 수행했습니다. 그는 현재 Hardy Diagnostics의 직원입니다.

이 연구는 배양 배지 개발 및 평가에 초점을 맞추고 있습니다. 종래 TCBS 인 선택적 및 매체 V. 분리 및 검출을 위해 사용되는 차동 비브리오 균, V. 콜레라 및 V. 불 니피 쿠스 균 (12). 그러나, 이러한 제한은 V. 구별 할 수 없다는,이 매체에 대해보고 된 다른 비브리오 종에서 콜레라. 자당 및 pH를 표시 TCBS의 분화 에이전트입니다. 따라서, 자당 발효기에 의한 산 생산 배지의 색상 변화를 야기한다. 이 콜로니 형태의 관찰을 불명료하게 할 수 있으므로, 매체의 착색 TCBS의 단점이다. 새로 개발 된 발색 매체는 많은 선박 샘플에서 발견 된 비 비브리오 종의 증식을 억제하는 높은 pH 및 염분을 이용한다. 새로운 발색 매체는 8.6 ± 0.2의 최종 pH가 있습니다. 탈 이온수 리터당는 펩톤 10 g의 바다 염 혼합물 10g, 황소 담즙 10g, 나트륨 10g 이루어져효모 추...

비브리오 속, V.의 구성원 비브리오는 그람 - 음성, 비 - 포자 형성, 곡면, 봉상 세균이다. 그것은 액체와 반고체 환경 모두에서 높은 운동성을 나타낸다. 대부분의 V. 비브리오 균주는 인간에게 비 병원성, 아직 병원성 하위 유형은 많은 나라 1, 2에 따라서이 종은 중요한 식품 매개 병원체로 간주됩니다 전염병과 전염병을 야기했다. 미국에서 비브리오 감염의 발생 빈도는 2000 3 년 이후 상승 추세를 보이고있다. 비브리오 종 중., V. 비브리오 균은 미국 4,5에서 질병을 일으키는 가장 빈번하게보고 된 종입니다. 기타 임상 관련 종 V. 포함 alginolyticus, V. 불 니피 쿠스 균, V. 콜레라 등 질병의 작은 비율은 동시에 여러 종에 의해 발생합니다. V. 비브리오 균은 자연 전입니다해양 물 nhabitant 때문에 널리 하구를 포함하여 전 세계적으로 해양 물에 분산. 종은 일본에서 식중독의 발생 다음 1950 년에 발견되었다. 미국의 경우, 종 먼저 퓨젯 사운드 지역 6,7 해수, 퇴적물, 어패류에서 격리되었다. 같은 조개 조개 등 해양 서식지에서 필터 피더는, V. 항구 수 있습니다 자연 식물 8의 일환으로 비브리오. 같은 V.로 인간의 비브리오 균 감염은 주로 오염 된 해산물, 특히 원시 또는 덜 익힌 조개의 소비에 연결되어 있습니다. 열린 상처 피부 감염으로 이어지는, 해수에 노출되었을 때 항목의 덜 일반적인 경로가 발생합니다. 대부분의 V. 비브리오 균주는 인간의 질병을 유발하지 않는, 아직 같은 내열성 직접 용혈 (TDH)와 같은 독성 요소를 품고 특정 서브 타입은 병원성입니다. 인성 V.의 가장 일반적인 증상 비브리오 균 감염은메스꺼움, 구토, 발열 다음에 설사와 복통,. 두통과 오한도보고됩니다. 평균 잠복기는 15 시간이지만, 병원성 균주 (9) 충분한 양의 소비 후 96 시간에 할 수 있습니다. 질병은 2 ~ 3 일에서 지속됩니다. V.로 인한 위장관 증상 비브리오 균은 주로 자기 제한하고, 따라서 특별한 치료는 필요하지 않습니다. 위장염의 가벼운 경우 효과적으로 구강 수분 보충에 의해 처리 될 수있다. 더 심각한 질병은 테트라 사이클린이나 시프로플록사신 (10)과 같은 항생제로 치료 될 수있다. 사망률 위장염 케이스에 대해 2 %이지만, 혈류 감염 패혈증을 개발하는 사람들에게 29 %만큼 높을 수있다. 해수에 노출 열린 상처 해산물을 소비하거나이있는 사람은 V. 위험에 비브리오 균 감염. 질병, 생명을 위협하는 패혈증의 더 심각한 형태는, 기본 의료 협력과 하위 집단에서 더 일반적이다알콜 중독, 간 질환, 당뇨병, 신장 질환, 악성 종양, 및 약화 된 면역 반응으로 이어지는 다른 조건을 포함하는 nditions 11. 특히, 개인의이 그룹은 V.에 의한 심각한 질병을 계약에 대한 위험이 높은도 V. 유사한 자연 서식지에서 찾을 수 있습니다 불 니피 쿠스 균, 비브리오. V. 비브리오 균은 일상적으로 선택 및 차등 매체로 티오 - 구연산 - 담즙 염 - 자당 (TCBS) 한천을 사용하여 격리됩니다. 알칼리 펩톤 물에 농축는 TCBS 한천에 격리 앞에있다. TCBS에 추정 콜로니는 상기 종 특이 유전자의 존재를 타겟팅 생화학 검사 및 / 또는 분자의 배열 분석법에서 테스트한다. PCR 기반의 방법들은 종종 V.의 신원을 확인하는 데 사용 12 TLH는 thermolabile 용혈 유전자 증폭 비브리오. 에 관계없이 채널의확인 방법 OICE, V.를 분리 및 구별 할 수있는 효과적인 매체 것이 중요 처음에 다른 해양 vibrios에서 비브리오. TCBS 일상적 수크로오스 12 발효 능력에 따른 비브리오 속에서 종을 구별하기 위해 사용되었다. 포지티브 발효 반응은 pH를 지표 브로 모티 몰 블루의 색 변화를 동반한다. V. 비브리오 균 식민지 녹색 색상에 파란색을 전시, TCBS에 상당히 독특한입니다. 그러나이 매체는 쉽게 구별 V. 없다 alginolyticus 및 V. 콜레라. 자당-발효 테우스 종 V.를 닮은 노란색 식민지를 생성 할 수있다 콜레라 나 V. alginolyticus 13. TCBS, V.에 초기 격리에 비브리오 균은 모나스의 hydrophila, Plesiomonas의 shigelloides 및 슈도모나스 종 (14)로 잘못 식별 할 수있다. 지연 자당 FERM와 균주[슬라이드 쇼]는 V.를 포함 비브리오 (13) nonfermenting 다른 크로스와 혼동 될 수있다 비브리오. TCBS는 다른 사람의 사이에서 대장균, 슈도모나스 putrefaciens 상대로하지 민감한 것으로 밝혀졌다. 다른 몇몇 종은 잠재적 V.과 혼동되어 회색 식민지 녹색 산출 비브리오 균이나 V. 불 니피 쿠스 균 15. 그 결과, 검출 V. 분리 향해 나은 민감도와 특이 대체 배지를 개발하는 것이 바람직하다 비브리오 균 및 기타 밀접하게 관련 종. 여러 대안 매체가 최근 개발되었다. 선택적 제제를 포함하는 것 외에도, 대부분이 차동 효소 활성에 기초하여 종을 구별 할 발색 기질을 통합한다. 예를 들어, indoxyl-β 글루코 시드와 indoxyl-β-갈 락토는 V. 차별화 발색 기질로 사용되어왔다 파라V.과는 (푸른 빛이 도는 녹색으로 표시) 해 몰리 식민지 그들의 차동 능력에 (보라색) 콜레라는 β - 글루코시다 제 및 β - 갈 락토시다 제 (16)를 생성한다. 여러 그룹에서 개발 한 발색 한천의 다른 제형은 평가되었으며에 상대적으로 또는 TCBS 17,18,19보다 더 나은 수행하는 것으로보고되었다. 발색 매체를 사용하는 장점은 주변 매질의 착색함으로써 특정 콜로니 분리를 용이 최소화한다는 것이다. 본 연구에서, 우리는 V.를 검출하고 분리하는 신규 제형 발색 매체의 능력을 평가 콜레라, V. 비브리오 균 및 V. 불 니피 쿠스 균; V. 차별화 할 수있는 능력에 특별한 초점을 다른 종에서 비브리오.

<table><tbody><tr><td>Reagent/Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0140-15-4</td>는 <td>다른 브랜드의</td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td>를</td> 사용할 수 있습니다. 모든 <td></td><td></td></tr><tr><td>BHI 분말</td><td>, Fisher Scientific</td><td>DF0418-17-7</td>은 <td>다른 브랜드</td></tr><tr>의<td>Blender</td><td></td><td></td>를 사용하여 <td>굴 고기를 혼합할 수</td></tr> 있습니다. <tr><td>CampyGen 가스 발전기</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>CN035A</td><td>는 마이크로에로필릭 분위기를 제공하며; 다른 브랜드</td></tr>의 <tr><td>초콜릿 아가 플레이트</td>를 사용할 수 있습니다. <td>Hardy Diagnostics</td><td>E14</td>는 <td>다른 브랜드</td></tr>의 일반 <tr><td>PCR 시약(dNTPs, MgCl2, Taq Polymerase)</td><td>를 사용하거나</td><td></td><td>PCR 비드(Fisher Sci 46-001-014)</td></tr><tr><td>배양 튜브</td>를 사용할 수 있습니다. <td>Fisher Scientific</td><td>S50712</td>는 <td>다른 브랜드</td></tr>의 <tr><td>Eppendorf 튜브</td>를 사용할 수 있습니다. <td>Fisher Scientific</td><td>S348903</td>는 <td>다른 브랜드를 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>Gel doc</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HardyChrom Vibrio 한천 플레이트</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>G319</td><td>이 연구는 이 매체</td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td></td><td></td><td></td></tr>를 평가합니다. 모든 <tr><td>접종 루프</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-606</td><td>이 연구에서는 10 마이크로 리터 크기가 사용되었습니다</td></tr><tr><td>: NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td>는 다른 브랜드의 굴을 <td>사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td></td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>R23701</td>은 <td>다른 브랜드</td></tr>의 <tr><td>페트리 접시</td>를 사용할 수 있습니다 <td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td>는 다른 브랜드의 <td></td></tr><tr><td>피펫 및 팁을</td> 사용할 수 있습니다 <td>모든</td><td></td><td>멸균 팁</td></tr><tr><td>tlh</td><td>IDT DNA</td><td></td><td></td>스케일용 프라이머</tr><tr><td></td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spreader</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-100-11</td><td>Beads can be used instead.</td></tr><tr><td>Stomacher blender</td><td>Stomacher</td><td>400</td><td>Samples는 200 rpm에서 30초 동안 균질화되었습니다. 다른 균질화기를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>블렌더용 멸균 필터 백</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-5</td><td></td></tr><tr><td>TCBS 분말</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>265020</td><td>이 연구는 이 매체</td></tr><tr><td>Thermocycler</td>를 평가합니다. <td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TSB 분말</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0370-07-5</td>는 <td>다른 브랜드의</td></tr><tr><td>UV를</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr>사용할 수 있습니다.<td>수조</td><td>모든</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Name</td><td>출처</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Bacterial species and strains</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aeromonas hydrophila</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Candida albicans</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>캄필로박터 jejuni</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Proteus mirabilis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>황색포도상구균</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>살모넬라균 콜레라수이스</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella boydii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella flexneri</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella sonnei</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Vibrio alginolyticus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. cholerae (혈청형에는 O139, O1, non O1, El Tor biovars)</td><td></td>><><><><><><><><가 <td></td><td></td>포함됩니다</tr>.<tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> </td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. hollisae</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. metschnikovii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. mimicus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. parahaemolyticus (혈청형은 O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, etc.)</td><td>ATCC, FDA, CDC, 환경</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. 단백질 분해</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. vulnificus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

의 검출을위한 더 민감하고 특정 원체 한천 배지의 개발<em&gt; 장염 비브리오 균</em&gt; 및 기타<em&gt; 비브리오</em&gt; 종

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

비브리오 종에 의한 미국의 식품 매개 감염은 상승 추세를 보여 주었다. 속에서 비브리오, V. 비브리오 균은 비브리오 -associated 감염의 대부분을 담당합니다. 따라서, 비브리오 종 중 정확한 차별화. 및 V.의 검출 비브리오는 우리의 식량의 안전성을 보장하기 위해 매우 중요하다. 분자 기술이 점점 더 일반적입니다 만, 문화 따라 방법은 여전히 ​​정기적으로 완료하고 특정 상황에서 표준 방법으로 간주됩니다. 따라서, 새로운 발색 한천 배지는 고립과 임상 적 비브리오 종의 분화를위한 더 나은 방법을 제공하는 것을 목표로 테스트했습니다. 프로토콜은 V.의 검출에 대한 민감도, 특이도 및 검출 한계 비교 새로운 발색 매체와 종래의 매체와 비브리오. 다양한 V. 비브리오 균주 (N = 22) 재다양한 혈청 형과 기원의 소스를 제시하는 사용되었다. 그들은 이전에 식품의 약국 (FDA)와 질병 통제 예방 센터 (CDC)에 의해 식별 및 추가 TLH - PCR에 의해 우리의 실험실에서 확인되었다. 적어도 네 개의 별개의 실험에서, 이들 균주를 24 35-37 ℃에서 인큐베이션 발색 한천 티오 - 구연산 담즙 염 - 자당이 종 배양 권장 매체 (TCBS) 한천에 접종 -96의 시간. 세 V. 성장이 있다면 비브리오 균주 (13.6 %)은 그럼에도 불구하고, TCBS에 최적 성장 녹색 식민지를 전시하지 않았다. 두 균주 (9.1 %)을 발색 한천 예상 시안 콜로니를 산출하지 않았다. 비 V. 비브리오 균주 (N = 32) 또한 발색 한천의 특이성을 결정하기 위해 시험 하였다. 이 균주 중 31 성장 또는 다른 식민지 형태학을 전시하지 않았다. V.의 평균 회복 chromoge에 비브리오 균NIC 한천은 1 ~ 2 % NaCl로 보충 트립신 콩 한천에 96.4 %의 상대였다. 결론적으로, 새로운 발색 한천 V.를 검출하는 효과적인 매체 비브리오 균과는 다른 vibrios 구별합니다.

본 연구에서는 54 균주는 V. 내에서 22 균주를 포함하는 조립했다 비브리오 종 19 개 비브리오 종 (13) 비 비브리오 종 (표 1). 대부분의 V. 비브리오 균주 중 하나를 FDA, CDC 또는 기타 국가 건강 부서 받았습니다. 그들은 다양한 혈청 형과 절연 소스를 나타냅니다. 이 균주는 이전에 규제 기관에 의해 확인되었다. 우리는 또한 이러한 V.의 신원을 확인 TLH - PCR (21, 22)을 실시하여 비브리오 균. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"> 종 </td><td ...

임상적으로 관련된 Vibrio 종의 검출 및 분리에는 선택적이고 차등적인 배양 배지가 필요합니다. 이 연구는 V. parahaemolyticus 및 기타 관련 종을 감지하고 식별하는 새로운 발색 매체의 능력을 평가했습니다. 새로운 배지는 기존 배지보다 더 나은 민감도와 특이도를 갖는 것으로 밝혀졌습니다.

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

이 절차의 전반적인 목표는 기존 배지와 비교하여 Vibrio parahaemolyticus를 검출하고 분리하는 새로운 발색 배지의 민감도와 특이도를 평가하는 것입니다. 이 방법은 식품 및 환경 내 Vibrio 종의 유병률은 어느 정도인가와 같이 식품 및 채취 환경 미생물학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 본 절차의 주요 장점은 식품 매질이 존재하는 상황을 포함하여 많은 세균 분리균을 사용할 수 있다는 점입니다.박테리아를 배양하기 전, 모든 한천 배지를 오토클레이브로 멸균하십시오. 그 다음 항온수조에서 한천을 45-50 °C로 냉각하십시오. 한천이 준비되면 빈 페트리 접시를 5~6개씩 쌓아 정렬하십시오.그런 다음, 쌓아둔 플레이트의 맨 아래쪽부터 시작하여 각 플레이트의 약 절반이 찰 때까지 용융된 한천을 붓고, 부은 후에는 뚜껑을 다시 닫습니다. 한천이 실온에서 최소 12시간 동안 굳도록 둡니다. 미생물 균주 배양을 준비하기 위해, 한천이 준비되면 멸균된 백금이를 사용하여 배양물을 적절한 비선택 한천 플레이트로 옮기고, 단일 콜로니를 관찰할 수 있는 패턴으로 박테리아를 스트리킹합니다.모든 콜로니의 도말이 완료되면, Campylobacter 종을 제외한 배양물을 35~37°C에서 최대 48시간 동안 뒤집힌 상태로 배양합니다. Campylobacter 종의 경우, 미호기성 환경을 조성하기 위해 가스 팩이 들어 있는 밀폐 용기 안에서 배양해야 합니다. 배양이 끝난 후 콜로니 형태를 관찰합니다. 순수 배양물은 모두 유사한 콜로니 형태를 나타내야 합니다.선택 및 감별 배지에서 관심 콜로니를 배양하려면, 몇 개의 독립된 콜로니를 5 mL의 적절한 액체 배지로 옮기고 35~37 °C에서 16~24시간 동안 다시 배양합니다. 다음 날, 하룻밤 배양한 배양액을 루프 한 번 분량만큼 Thiosulfate-Citrate-Bile-Salts-Sucrose(TCBS) 한천 배지와 발색 한천 배지에 각각 최소 한 개씩 도말하고, 35~37 °C에서 최대 96시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 배지의 배양 밀도와 독립된 콜로니의 크기를 조사하여 균주의 전반적인 성장 정도를 결정하고, 상황에 따라 가시광선 또는 UV 광원 아래에서 콜로니의 색상을 기록하며 콜로니의 다른 중요한 특성들을 함께 기록합니다.회복 분석(recovery assay)을 수행하려면, 2% 염화나트륨이 첨가된 tryptic soy broth(TSB

development-more-sensitive-specific-chromogenic-agar-medium-for

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Google은 최근은 간단 세균 검출을위한 형광 분석 "을 믹스 앤 읽기"를 설정하는 데 적용할 수있는 형광 DNAzyme 프로브를 생성하기위한 새로운 접근 방식을보고했습니다. 이러한 특별한 유전자 프로브는이를 형광 신호 생성에 세균 검출을 번역 특정 세균에 의해 생산되는 원유 세포외 혼합물 (CEM)의 앞에서 발색단 - 수정의 DNA-RNA 키메라 기판의 절단을 catalyze. 이 보고서에서 우리는 "RFD-EC1"표시된 특정 DNAzyme 프로브는 모델 박테리아의 탐지를 위해 고용되는 핵심 실험 절차를...

형광 DNAzymes을 사용하여 박테리아의 탐지

출처: Heering, J., et al. Vibrio parahaemolyticus 수영 및 떼 세포의 세포 분화 유도 및 단일 세포 이미징. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 특별히 준비된 한천 배지를 사용하여 Vibrio parahaemolyticus 에서 군집 세포 분화 유도를 보여줍니다. 철분 고갈, 칼슘 보충 및 표면 접촉과 같은 환경 신호를 조작함으로써 박테리아는 수영 형태에서 측면 편모가 있는 길쭉한 떼 세포로 전환하도록 자극됩니다. 이러한 분화된 세포는 고체 표면 전체에 퍼져 성공적인 형태학적 변화를 의미하는 특징적인 군집 플레어를 형성합니다.

Vibrio parahaemolyticus의 군집 세포로의 분화 유도

근원: Heering, J., 외., 세포 분화 유도 및 Vibrio parahaemolyticus 수영 및 떼 세포의 단일 세포 이미징. J. Vis. 경험. (2017).이 비디오는 형광 이미징을 위해 Vibrio parahaemolyticus 콜로니에서 군집 세포를 준비하는 방법을 보여줍니다. 이 박테리아는 수영 세포에서는 단극성으로, 길쭉한 군집 세포에서는 양극성으로 국한되는 형광단 태그 단백질을 발현하도록 유전자 조작되어 시각적 분화를 가능하게 합니다. 현미경 슬라이드 위에 아가로스 패드를 준비하고, 그 위에 콜로니 섹션을 배치하고 제거하여 부착 세포를 남긴 다음 이미징을 위해 커버슬립으로 덮습니다.

이미징을 위한 Vibrio parahaemolyticus Swarmer 세포의 준비

출처: Yeung, M., et al. Vibrio parahaemolyticus 및 기타 Vibrio 종의 검출을 위한 보다 민감하고 특이적인 발색 한천 배지 개발. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 비브리오 종을 식별하기 위한 배양 기반 방법을 보여주며, 일반적으로 사용되는 티오황산염-구연산염-담즙염-자당 또는 TCBS 한천에 대한 보다 정확한 대안으로 발색성 한천을 강조합니다. 발색 한천은 종 특이적 효소 활성을 검출하여 비브리오 균주의 우수한 분화를 제공합니다.

비브리오 종의 신속한 검출을 위한 새로운 발색 배지

출처: Brumfield, K. D. 외, Vibrio 콜레라의 생물형 유지 및 구분을 위한 임상 및 환경 분리 실험실 기법. J. Vis. 경험 (2017).이 영상은 콜 레라 균의 세 가지 생물형인 고전형, 야생형 엘 토르, 그리고 엘 토르 변종을 구별하기 위한 보게스-프로스카우어(VP) 검사를 시연합니다. 각 배양액은 포도당 함유 배지에 접종되어 배양 후 α-나프톨과 수산화칼륨으로 처리하여 아세톤 존재를 검출합니다. 분홍빛이 도는 붉은색은 양성 VP 반응을 나타내며, 야생형 엘 토르 생물형에서만 관찰되어 고전형과 변종형과 구별됩니다.

비브리오 콜레라 생물형 구별을 위한 보게스-프로스카우어 검사법

많은 양의 농업용수에서 식품 매개 병원체의 통합 농도, 농축 및 종말점 비색 검출과 관련된 프로토콜이 여기에 제시되어 있습니다.  물은 선택적 또는 비선택성 매체로 농축된 MMS(Modified Moore Swabs)를 통해 여과되며, 검출은 박테리아 표시 비색 기판이 내장된 종이 기반 분석 장치(μPAD)를 사용하여 수행됩니다.

색도계 탐지의 종이 기반의<em&gt; 대장균</em&gt;<em&gt; 살모넬라</em&gt; SPP., 그리고<em&gt; 리스테리아</em&gt; 농업 다량의 물에서

이 원고는 일련의 생화학 분석법 외에도 적절한 Vibrio cholerae 유지 기술을 설명하며, 임상 적 및 환경 적 V 사이의 신속하고 안정적인 차별화를 위해 집합 적으로 활용됩니다. 실험실 환경에서 cholerae biotypes.

생물학적 유형을 유지하고 차별화하기 위해 사용되는 실험실 기술<em&gt; 콜레라 비브리오</em&gt; 임상 적 및 환경 적 분리 물

이 프로토콜은 차별적으로 구별되는 Vibrio parahaemolyticus 헤모글로빈 과 swarmer 세포의 단일 세포 현미경 검사를 가능하게합니다. 이 방법은 단일 세포 분석을 위해 쉽게 얻을 수있는 덩어리 세포 집단을 생산하고 세포 배양의 준비, 스웜머 분화의 유도, 샘플 준비 및 이미지 분석을 다루고있다.

세포 분화 및 단일 세포 이미징의 유도<em&gt; 비브리오 균 (Vibrio parahaemolyticus)</em&gt; Swimmer and Swarmer Cells

브리 parahaemolyticus 감지 polylactic 산 안정, 금 나노 입자 수정, 모티브로 탄소 전극으로 구성 된 전기 화학 DNA 바이오 센서의 개발에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.

Foodborne 병원 체를 검출 하는 전기 화학 DNA 바이오 센서의 개발

방법에 의한 하와이의 꼬리 자른 오징어 절차를 간략하게...

의 식민지 Euprymna scolopes 오징어에 의한 장염 fischeri</em

학습하세요 새로운 크로모제닉 배지를 사용하여 Vibrio parahaemolyticus를 검출하고 분리하는 방법을. 기존 배지보다 민감도와 특이도가 향상되어 식품 안전 및 환경 미생물학 연구에 유용합니다.

의 검출을위한 더 민감하고 특정 원체 한천 배지의 개발

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