Name: ImageJ에 플러그인을 사용하여 셀 카운팅 절차의 자동화 된 정량 및 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: 배우세요 ImageJ 플러그인을 활용한 세포 카운팅 자동화 정량 분석 방법입니다. 현미경 이미지 취득 및 보정 프로토콜을 통해 정확하고 빠른 세포 수 계산을 수행할 수 있습니다.

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이 작업은 캐나다 보건 연구소(Canadian Institute of Health Research)의 지원을 받아 CP(OR 142730 및 OR 89931)로 승인되었습니다. ImageJ에서 이진 입자 분석에 대한 초기 아이디어를 제시한 Jelena Brkic에게 감사드립니다.

<ol><li>Ricardo, R., Phelan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+and+Determining+the+Viability+of+Cultured+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Counting and Determining the Viability of Cultured Cells.</a> J. Vis. Exp. (16), e752(2008).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Using a Hemacytometer to Count Cells. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education/5048/using-a-hemacytometer-to-count-cells">https://www.jove.com/science-education/5048/using-a-hemacytometer-to-count-cells</a> (2016).</li>
<li>Graham, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coulter+principle%3A+foundation+of+an+industry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lab.+Autom%22%5BJournal%5D)">The coulter principle: foundation of an industry.</a> J. Lab. Autom. 8 (6), 72-81 (2003).</li>
<li>Ormerod, M. G., Imrie, P. R. Flow cytometry. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOrmerod%2C+MG+%22Animal+Cell+Culture%22">Animal Cell Culture</a>. Walker, J. M., Pollard, J. W. , Humana Press. 543-558 (1990).</li>
<li>Eliceiri, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+Imaging+Software+Tools%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Biological Imaging Software Tools.</a> Nat. Methods. 9 (7), 697-710 (2013).</li>
<li>Louis, K. S., Siegel, A. C. Cell viability analysis using Trypan blue: manual and automated methods. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLouis%2C+KS+%22Mammalian+Cell+Viability%3A+Methods+and+Protocols%22">Mammalian Cell Viability: Methods and Protocols</a>. Stoddart, J. M. , Humana Press. 7-12 (2011).</li>
<li>Scott, W. N. Invasion and motility assays. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aScott%2C+WN+%22Cancer+Cell+Culture%3A+Methods+and+Protocols%22">Cancer Cell Culture: Methods and Protocols</a>. Langdon, S. P. , Humana Press. 225-229 (2004).</li>
<li>Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Cell+Migration+and+Invasion+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro Cell Migration and Invasion Assays.</a> J. Vis. Exp. (88), e51046(2014).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-378a-5p+promotes+trophoblast+cell+survival%2C+migration+and+invasion+by+targeting+Nodal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-378a-5p promotes trophoblast cell survival, migration and invasion by targeting Nodal.</a> J. Cell Sci. 125, 3124-3132 (2012).</li>
<li>Adorno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mutant-p53%2FSmad+Complex+Opposes+p63+to+Empower+TGFbeta-Induced+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Mutant-p53/Smad Complex Opposes p63 to Empower TGFbeta-Induced Metastasis.</a> Cell. 137, 87-98 (2009).</li>
<li>Chung, T. K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulation+of+microRNA-204+mediates+migration+and+invasion+of+endometrial+cancer+by+regulating+FOXC1%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dysregulation of microRNA-204 mediates migration and invasion of endometrial cancer by regulating FOXC1.</a> Int. J. Cancer. 130, 1036-1045 (2012).</li>
<li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((et+al.+In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat.+Res.%2FRev.+Mutat%22%5BJournal%5D)">et al. In vitro cell migration and invasion assays.</a> Mutat. Res./Rev. Mutat. 752, 10-24 (2013).</li>
<li>Al-Khazraji, B. K., Medeiros, P. J., Novielli, N. M., Jackson, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+cell-counting+algorithm+for+fluorescently-stained+cells+in+migration+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Proced.+Online%22%5BJournal%5D)">An automated cell-counting algorithm for fluorescently-stained cells in migration assays.</a> Biol. Proced. Online. 13, 1-6 (2011).</li>
<li>Rasband, W. S. ImageJ. , National Institutes of Health. Bethesda, Maryland, USA. Available from:
 <a target="_blank" href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a> (2007).</li>
<li>Abramoff, M. D., Magalhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+processing+with+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Biophotonics+Intern%22%5BJournal%5D)">Image processing with ImageJ.</a> Biophotonics Intern. 11, 36-42 (2004).</li>
<li>Grishagin, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+cell+counting+with+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Automatic cell counting with ImageJ.</a> Anal. Biochem. 473, 63-65 (2015).</li>
<li>Thomas, C. R., Paul, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+image+analysis+in+cell+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotech%22%5BJournal%5D)">Applications of image analysis in cell technology.</a> Curr. Opin. Biotech. 7 (1), 35-45 (1996).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appreciating+data%3A+warts%2C+wrinkles+and+all%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Appreciating data: warts, wrinkles and all.</a> Nat. Cell Biol. 8, 203(2006).</li>
<li>Rossner, M., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+in+a+picture%3F+The+temptation+of+image+manipulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">What's in a picture? The temptation of image manipulation.</a> J. Cell Biol. 166, 11-15 (2004).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Count+objects+in+an+image+in+Adobe+Photoshop%5BTitle%5D)+AND+%22Helpx.adobe.com%22%5BJournal%5D)">Count objects in an image in Adobe Photoshop.</a> Helpx.adobe.com. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://helpx.adobe.com/photoshop/using/counting-objects-image.html">https://helpx.adobe.com/photoshop/using/counting-objects-image.html</a> (2016).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

중요한 단계, 문제 해결 및 제한 사항 자동화 된 계산 방법의 특성상 입자 분석의 상세들은, 이들 입자를 정의하는 수학적인 기능을 필요로한다. 따라서, 세포 농도 계산기 마이그레이션 분석 계수기 모두의 정확도는 상기 캡쳐 된 이미지는 세포 샘플 또는 마이그레이션 분석 막과 유사한 방법에 가깝게, 즉 이미지 충실도 majorly에 의존한다. 따라서 가능한 한 가장으로 현미경 및 관련 소프트웨어 보정 프로토콜을 수행 할 수있는 최상의 중요하다. 이는 배경 잡음을 제한 불필요한 입자를 감소 밝고 균일 합초 이미지 캡처 및 TIFF와 같은 비 손실 파일 형식으로 저장 포함한다. 따라서, 두 플러그인은 이러한 요건이 충족되지 않은 경우에 잘못된 결과를 생성 할 가능성이있다. 퍼펙트 세포 수에 따라서 항상 좋은 연습 때 두 í에 그들은 시각적 인 기대와 일치하는지 확인하는 것입니다티. 만약 참 결과가 문제 (10.4 주)를 명료하게 도움이 될 바이너리 이미지와 원본 이미지를 비교하여 일치하지...

시험 관내 세포 카운트에서 조직 배양 실험의 넓은 범위의 중요한 기본 기술이다. 정확하게 배양 세포의 수를 결정하는 실험 재현성 표준화 1,2- 필수적이다. 세포는 혈구 계산을 사용뿐만 아니라 자동화 된 방법의 다양한 고유의 장점과 단점 3,4,5- 각을 사용하여 수동으로 수행 될 수있다. 세포 계수에 대한 자동화 된 방법의 대부분은 두 개의 클래스, 콜터 원리를 사용하거나 유동 세포 계측법이 그 중 하나에 속한다. 콜터 카운터는 세포 수와 크기를 결정하기 위해 셀의 전기 저항을 이용한다. 이들은 유동 세포 계측기보다 빠르고 정확하고 저렴하다. 그러나, 이들은 거의 수동 계산 3 비교 인해 상당한 비용 만 세포 카운팅에 사용되지 않는다. 한편, 세포 계측기 흐름 비싸다 있지만 휴대 계산, 셀 형상, 명세서의 분석과 같은 많은 응용 분야를 가지고ructure 측정 내부 셀은 4,5 마커. 이 두 원칙 중 하나를 사용 기계는 많은 제조 업체에서 사용할 수 있습니다. 자동화 된 방법은 수동 계산에 필요한 시간의 일부와 함께하지만 비싼 기계 (6)을 사용하는 동안 수동 계산은 저렴하지만 시간과 바이어스의 적용을받습니다. 다른 일반적인 세포 배양 과정은 시험 관내 세포 운동성 분석, 즉, 세포 이동 및 침입 7이다. 마이그레이션 및 침략 분석은 일반적으로 화학 주성 응답에 대한 응답으로 세포 운동성 및 침입을 조사하는 데 사용됩니다. 또한, 이들은 널리 여러 세포 유형 7-11 배아의 발달, 분화, 염증성 반응 및 전이를 연구하기 위해 사용된다. 마이그레이션 분석의 다공질 막을 통해 이전 또는 침입 한 세포는 두 가지 방법으로 정량화 될 수있다. 첫째, 형광 염료로 염색 세포를 해리하여 이리저리형광 판독기 (12)를 사용하여 막 및 정량화 해요. 정량이 방법의 제한은 기록 막의 유지 될 수 없으며 추가 분석 13 가능성이 없다는 것이다. 마이그레이션에 대한 두 번째 정량 방법은 / 고정 및 크리스탈 바이올렛, 톨루이딘 블루 염색 또는 헤 마톡 실린과 같은 세포 학적 염료와 더 일반적으로 형광 염료, 염색되는 세포를 침공된다 그 다음 세포는 수동으로 매우 시간이 걸리는 작업 12,13 이들 막의 반전 현미경 이미지를 사용하여 정량화된다. 수동 세포 계수의 단점을 극복하기 위해, 세포 농도 및 마이그레이션 분석을위한 두 신뢰성 있고 정확한 자동 세포 계수기가 개발되었다. 이러한 자동 세포 계수기 알고리즘 오라클 자바 컴퓨터 언어를 사용하여 플러그인으로 ImageJ에 대해 개발되었다. ImageJ에는 난방 국립 연구소에서 개발 한 공공 및 널리 사용되는 이미지 처리 도구입니다l 번째 (NIH) 14, 15; 따라서, ImageJ에 이러한 플러그인을 작성하는 것은 생물학적 지역 사회에 쉽게 통합을 용이하게합니다. 세포 계수의 자동화는 수동 계산에 비해 높은 처리량과 재현성을 보장합니다. 다른 가능한 소프트웨어 및 플러그인은 이미지 분석 5,16,17, 세포 농도 계산기 플러그인을 통해 세포 농도를 계산하기 위해 사용될 수 있지만 고속이며 또한 세포 치료의 희석 처리 할 수있다. 또한,이 두 카운터에서 모든 결과 및 계산을 저장하고 내보낼 수 있습니다. 이 논문에서 설명 된 두 개의 플러그인 해부 범위의 사용을 통해 생균 이미징 마이그레이션 분석 멤브레인 큰 시야 (전체 막 캡처) 이미징 위상차 현미경의 사용을 위해 최적화된다. http://peng.lab.yorku.ca/imagej-plugins : 플러그인은에서 설치 지침을 다운로드 자유롭게 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>HyClone 클래식 액체 매체: RPMI 1640 - L-글루타민</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>SH3002702</td><td>세포 배양 배지 포함&nbsp;</td></tr><tr><td>태아 보비안 혈청(FBS)</td><td>GIBCO BRL</td><td>P00015</td><td>배지 공급</td></tr><tr><td>HTR8/SVneo 영양막 세포주 세포는</td><td>Charles Graham 박사(Queen' s University, Kingston, Canada)소프트웨어는</td><td></td> <td>모든 세포주와 함께 작동하도록 설계되었습니다.</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>GIBCO BRL</td><td>27250-018</td><td>10 &micro에서 0.20%(w/v)로 제조; M EDTA 1x PBS</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AT104</td><td></td></tr><tr><td>10 cm 세포 배양 플레이트</td><td>SARSTEDT</td><td>833902</td><td>어떤 조직 배양 처리된 플레이트도 적합할 것입니다</td></tr>. <tr><td>Transwell 폴리에스터 막 삽입물 - 8.0&nbsp; &마이크로; m 기공 크기</td><td>Costar 3422는 Fisher Scientific 7200150에서 주문했습니다</td><td></td>. <td>24웰 플레이트용; 기공 크기: 8.0 &마이크로; m; 직경 6.5mm; 0.33 cm2 성장 영역</td></tr><tr><td>HARLECO 혈액학 염색 및 시약, EMD Millipore - Soluntions 1, 2 & 3</td><td>EMD Millipore 및 VWR</td><td>65044A, B, & C</td><td>Hemacolor 염색 세트는 3개의 500ml(16.9oz.) 폴리 병으로 구성되며 메탄올 고정제(용액 1), 에오신 또는 산 염색(용액 2) 및 메틸렌 블루 또는 염기성 염색(용액 3)</td></tr><tr><td>면 팁 애플리케이터</td><td>Puritan Medical</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>단일 가장자리 산업용 면도날</td><td>VWR</td><td>55411 - 055</td><td>두께: 0.30mm(0.012")</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드 - 사전 청소/일반</td><td>Fisher Scientific</td><td>12550A3</td><td>치수: 25mm x 75mm x 1.0mm</td></tr><tr><td>Fisherbrand 커버 안경 - 직사각형 번호 1</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545E</td><td>두께: 0.13 - 0.17mm; 크기: 50mm x 22mm</td></tr><tr><td>Fisher Chemical Permount 마운팅 매체</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Leica 스테레오 해부 현미경</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>마이크로소프에는 Leica 현미경 카메라 모델 MC170 HD 및 카메라 소프트웨어가 장착되어 있습니다. Leica App. Suite (LAS E2) 버전 3.1.1 [Build: 490]. 현미경 부품:&nbsp; LED3000 스포트라이트 조명 모델: MEB126, Leica M80 광학 캐리어 모델 M80, 목표 아크로맷 1.0X, WD=90&nbsp; mm 모델: MOB306 & 대물렌즈 아크로마트 0.32X, WD=303&nbsp; mm 모델: MOB315, 비디오 목표 0.5X 모델: MTU-293</td></tr><tr><td>혈구계</td><td>보조 독일&nbsp;</td><td></td><td>0.100mm 깊이 - 0.0025mm2</td></tr><tr><td>Olympus 도립 광 현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td>CKX41SF</td><td>마이크로소프에는 Lumenera Infinity 1-2 2.0 메가픽셀 CMOS 컬러 카메라가 장착되어 있으며 카메라 소프트웨어는 Infinity 분석 버전 6.5.2</td></tr><tr><td>층류 캐비닛 1300 시리즈 A2</td><td>Thermo Scientific입니다.</td><td>모델: 1375</td><td>세포 배양 작업을 위한 모든 층류 캐비닛이 적합할 것입니다&nbsp;</td></tr><tr><td>세포 배양 인큐베이터</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>모델: 370</td><td>모든 세포 배양 인큐베이터가 적합합니다 - 세포는 습도 환경, 5% CO2, 37 &deg에서 배양되었습니다. 씨&nbsp;</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td>버전 1.50e</td><td>최소 버전 필요</td></tr><tr><td>Java Runtime Environment</td><td>Oracle</td><td>버전 1.8.0_66</td><td>최소 버전 필요</td></tr></tbody></table>

imagej에 플러그인을 사용하여 셀 카운팅 절차의 자동화 된 정량 및 분석

Automated Quantification and Analysis of Cell Counting Procedures Using ImageJ Plugins

건강의 ImageJ에 국립 연구소는 강력하고 자유롭게 사용할 이미지 처리 소프트웨어 제품군입니다. ImageJ에 다양한 생물학적 입자를 계산하기 위해 효과적으로 사용할 수있는 포괄적 인 입자 분석 알고리즘을 보유하고 있습니다. 세포 샘플들의 다수를 카운트하면 혈구 시간 관련하여 병목 현상을 나타낸다. 마찬가지로, 상기 ImageJ에 플러그인 셀 카운터와 마이그레이션 / 침공 분석에서 막을 계산 정확하지만, 손목 통증을 일으키는 매우 노동 집약적 주관적인, 그리고 악명입니다. 이러한 요구를 해결하기 위해, 우리는 자동 혈구 (또는 알려진 볼륨) 및 마이그레이션 / 침략 세포 계수의 유일한 작업 ImageJ에 내 두 개의 플러그인을 개발했다. 두 플러그인 최소 배경 고품질 현미경 사진을 획득 할 수있는 능력에 의존한다. 그들은 사용하기 쉽고 카운트 교정에 도움 내장 된 분석 도구와 큰 샘플 크기의 빠른 계산과 분석에 최적화되어 있습니다. 핵심 원리를 결합하여자동화 된 계산 알고리즘 및 사후 분석 계산 셀 카운터 (S)이 크게 이동 분석 정확도의 손실없이 처리 될 수있는 용이성을 증가시킨다.

세포 농도 계산기 그림 1은 CCC의 교정 및 가산 이미지 수집의 전체 프로세스를 제공합니다. 도 1a와 1b는 픽셀 P-평방 길이의 P-광장 교정 이미지와 계산을 묘사한다. CCC는 식을 이용하여 소정의 부피로 세포 농도를 결정 <img alt="식 (1)" src="/files/ftp_upload/54719/54719eq1.jpg" /> 혈구의 P-광장은 100 거리 nL의 볼륨 (1 mm × 1 mm X 0.1 mm) 및, 전체 이미지 볼륨이 mm로 픽셀을 변환 한 후이 상수 계산 될 수있다 주어진 있습니다. <s...

이 논문은 두 개의 새로운 오픈 소스 ImageJ 플러그인인 Cell Concentration Calculator 및 Migration Assay Counter를 통해 혈구계 및 이동/침입 현미경 사진의 정량화에 대해 설명합니다. 또한 이미지 획득 및 보정 프로토콜에 대해 설명하고 플러그인의 입력 요구 사항에 대해 자세히 설명합니다.

ImageJ에 플러그인을 사용하여 셀 카운팅 절차의 자동화 된 정량 및 분석

The National Institute of Health&#39;s ImageJ is a powerful, freely available image processing software suite. ImageJ has comprehensive particle analysis ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 디지털 분석 도구를 사용하여 현탁액 또는 침입 분석 멤브레인의 이동에 있는 세포의 정확한 계수를 신속하게 수행하는 것입니다. 이 프로토콜은 연구자가 일반적인 기술 및 체외 세포 운동성 분석에 필요한 세포 수를 정량화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 여러 필터와 분석 도구를 포함하면서 빠르고 정확한 세포 계수를 제공한다는 것입니다.시작하려면 현미경 조명을 최대로 설정하십시오. 4x 대물렌즈로 전환하고 위상차 필터가 사용 중인지 확인합니다. 그런 다음 현미경 소프트웨어 내에서 이미지 캡처 설정을 기본값으로 설정합니다.이제 표준 혈구계를 현미경 스테이지에 놓고 이미지 볼륨 보정 단계를 위해 이미지를 캡처합니다. 필요에 따라 노출 시간을 조정합니다. ImageJ의 세포 농도 계산기에서 이미지를 열고 이미지 차원 가져오기 버튼을 클릭합니다.이 작업은 이미지 너비 및 높이 텍스트 상자를 이미지 해상도(픽셀)로 채웁니다. 그런 다음 직선 도구를 선택하고 커서를 클릭하고 드래그하여 혈구계의 기본 p-제곱의 전체 길이에 걸쳐 직선을 그립니다. 그런 다음 M 키를 눌러 결과 창을 표시합니다.이제 길이 열의 값을 셀 농도 계산기의 p-square length 텍스트 상자에 입력합니다. 그런 다음 이미지 볼륨 계산 버튼을 클릭하여 이미지 볼륨을 이미지 볼륨 텍스트 상자에 출력합니다. 마지막으로 저장 버튼을 클릭하여 플러그인 보정을 완료합니다.샘플 분석을 위해 혈구계 슬라이드의 양쪽 챔버에 10마이크로리터의 세포를 로드하고 세포 내부가 세포막보다 어둡도록 초점을 조정하여 극이 아닌 세포의 중앙 단면 내에서 초점을 제공합니다. 그런 다음 세포가 과도하게 노출되지 않도록 노출을 추가로 조정합니다. 약간 보이는 혈구계 선은 허용됩니다.이제 혈구계의 중앙 영역에 대한 5-10개의 겹치지 않는 이미지를 캡처합니다. 각 이미지의 해상도와 배율은 부피 보정 이미지와 동일해야 합니다. 그런 다음 세포 농도 계산기에서 Count Cells를 클릭하고 팝업 창에서 계산할 폴더를 선택합니다.그런 다음 샘플 번호 입력 상자에 챔버당 촬영된 이미지 수를 입력하고 OK를 클릭합니다. 이제 플러그인이 데이터를 수집합니다. 자세한 내용은 텍스트를 참조하십시오. 시작하려면 현미경 소프트웨어 내에서 이미지 캡처 설정을 기본값으로 설정합니다.해부 범위의 s의 경우 단색 흰색 배경을 사용하고 무대 위의 광원, 가급적

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Research

연구

JoVE Journal

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생물학

세포 구조를 정상화 접착제 micropatterns는 약물 효과의 검출에 감도를 증가 재현성을 개선하고 자동화된 이미지 수집 및 분석을 단순화하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 기술은 기존의 세포 배양 지원을 수행하고 결과적으로 과도한 휴대 전화의 변화로 고통 받고 약물 / siRNA 심사 assays를 도움이 될 것입니다.

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우리는 invadopodia로 인한 매트릭스 저하를 시각화를위한 형광 젤라틴으로 코팅 현미경 coverslips를 생산을위한 원형 방법을 설명합니다. 사용 가능한 소프트웨어를 사용하여 전산 기술이 혼합 된 인구 내에 전체 미세 필드를 포함한 다세포 그룹에 대한 하나의 세포 매트릭스 proteolysis의 결과 수준을 정량화를 위해 제공됩니다.

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여기에서, 선충류 예쁜꼬마선충에서의 단백질 응집 동역학의 분석을 위한 방법이 제시 된다. 연령 동기화 된 집단의 동물은 서로 다른 시점에서 이미지화되고 CellProfiler에서 반자동 포함 계수가 수행되고 AmyloFit의 수학적 모델에 적합합니다.

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결핵에 대한 백신의 효능 평가를 위한 Micro-colony Forming Unit Assay

이 문서에서는 다양한 세포 밀도에서 검증된 오픈 소스 실행 프로그램을 사용하여 이미지 기반 핵 정량화를 자동화하는 단계별 방법을 설명합니다. 이 프로그램은 비용, 제한된 기술 역량을 가진 사용자의 접근성 및 기존 기술의 유용성을 제한할 수 있는 애플리케이션별 검증과 관련된 장벽을 해결하는 대안을 제공합니다.

Computer Vision 라이브러리를 사용하여 핵 정량 분석 간소화

배우세요 ImageJ 플러그인을 활용한 세포 카운팅 자동화 정량 분석 방법입니다. 현미경 이미지 취득 및 보정 프로토콜을 통해 정확하고 빠른 세포 수 계산을 수행할 수 있습니다.

ImageJ에 플러그인을 사용하여 셀 카운팅 절차의 자동화 된 정량 및 분석

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