맞춤형 선구자로 수정하고, 구아니딘 그룹의 기능화

이 절차의 전반적인 목표는 구아니딘 기능성 펩타이드에 대한 편리한 합성 접근을 제공하는 것입니다. 이 방법은 인테그린 리간드 또는 GPCR 리간드의 개발과 같은 근육 펩타이드 화학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 SPPS와 완벽하게 호환되는 기능화된 구아니딘에 대한 쉬운 합성 접근을 허용한다는 것입니다.

이 기술은 촉각 분자에 특히 유용한데, 변형된 작용기는 일반적으로 생체 분자를 악화시키기 때문입니다. 우리의 경우, 우리는 개별 암의 뚜렷한 특성과 특정 치료에 대한 분자 이미징을 사용할 수 있는 분자를 목표로 합니다. 개인 맞춤형 의료를 위한 중요한 문제입니다. 이 특정 절차를 시작하려면 boc-pyrazol carboxamaidine 1g과 PPh3 1g을 50ml 둥근 바닥 플라스크에 추가합니다.

그런 다음 고무 격막을 통해 불활성 분위기에서 50ml의 둥근 바닥 플라스크에 건조된 THF 10ml를 추가합니다. 주사기를 사용하여 194마이크로리터의 건조 메탄올을 추가합니다. 실온에서 용액을 저어줍니다.

주사기를 사용하여 준비된 디이소프로필 아조디카르복실레이트 용액을 THF에 15분에 걸쳐 적가합니다. 그런 다음 용액을 실온에서 2시간 동안 저어줍니다. 회전 증발기를 사용하여 감압 하에서 용매를 제거합니다.

그 후, 조잡한 생성물을 1 밀리리터의 DCM에 용해시킨다. 다음으로, 펜탄 용액에 10 % 에틸 아세테이트에 실리카 100g이 함유 된 플래시 컬럼을 사용하게하십시오. 용해된 조생성물을 컬럼에 로드하고 압력 하에서 용매를 추가합니다.

텍스트 프로토콜에 설명된 대로 분수를 수집, 식별 및 결합합니다. 그런 다음 회전 증발기를 사용하여 감압 하에서 용매를 증발시켜 원하는 화합물을 노란색의 점성 오일로 얻습니다. 먼저 boc-pyrazole carboxamidine 1g, PPH3 1g, Dde-6-Aminohexanol 0.9g을 50ml 둥근 바닥 플라스크에 추가합니다.

그런 다음 고무 격막을 사용하여 불활성 분위기에서 10ml의 건조 THF를 추가합니다. 그 후, 출발 물질을 실온에서 용해시킵니다. 주사기를 사용하여 준비된 디이소프로필 아조디카르복실레이트 용액을 THF에 15분에 걸쳐 적가합니다.

용액을 실온에서 2시간 동안 저어줍니다. 그런 다음 회전 증발기를 사용하여 감압 하에서 용매를 제거하십시오. 조잡한 생성물을 1ml의 DCM에 용해시킵니다.

다음으로, 100g의 실리카가 함유된 플래시 컬럼을 펜탄과 에틸 아세테이트의 2:1 용액에 로드합니다. 용해된 조생성물을 컬럼에 로드하고 압력 하에서 용매를 추가합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 분수를 수집, 식별 및 결합합니다.

회전 증발기를 사용하여 감소된 압력 하에서 용매를 증발시켜 원하는 생성물을 얻습니다. 먼저 S-메틸이소우레아 1.4g과 무수복복 2.2g을 DCM과 포화 중탄산나트륨 수용액의 격렬하게 교반하는 이위상 용액에 용해시킵니다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 저어줍니다.

그런 다음 혼합물을 분리 깔때기에 붓습니다. 층을 분리하고 DCM으로 수성상을 3회 추출합니다. 그런 다음 유기 단계를 결합합니다.

결합 된 유기상을 황산나트륨으로 건조시킵니다. 회전 증발기를 사용하여 용매를 제거한 후 조제품을 헥산 2ml에 용해시킵니다. 100g의 실리카가 포함된 플래시 컬럼을 헥산과 에틸 아세테이트의 4:1 용액에 로드합니다.

그 후, 용해된 조생성물을 컬럼에 로드하고 압력을 가해 용매를 첨가합니다. 분획을 수집하고 식별한 후 원하는 분획을 결합합니다. 회전 증발기를 사용하여 감압 하에서 용매를 증발시켜 1.1g의 Boc-S-methylisothiourea를 얻습니다.

수집된 Boc-S-methylisothiourea 250mg을 건조된 DMF 10ml에 50ml 바닥 플라스크에 용해시켜 실온의 불활성 분위기에서 용해시킵니다. 주사기를 사용하여 440마이크로리터의 DIPEA를 추가합니다. 주사기를 사용하여 교반하면서 245마이크로리터의 무수아세트산을 적음으로 첨가합니다.

혼합물을 실온에서 1시간 동안 저어줍니다. 그런 다음 주사기를 사용하여 메탄올 2ml를 넣고 15분 동안 저어줍니다. 감압 하에서 용매를 제거한 후 회전 증발기를 사용하여 조잡한 생성물을 1 밀리리터의 DCM에 용해시킵니다.

60g의 실리카가 포함된 플래시 컬럼을 헥산과 에틸 아세테이트의 3:1 용액에 로드합니다. 다음으로, 용해된 조질 생성물을 적재하고 압력 하에서 용매를 첨가합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 분수를 수집, 식별 및 결합합니다.

회전 증발기를 사용하여 감소된 압력 하에서 용매를 증발시켜 원하는 생성물 210mg을 백색 고체로 얻습니다. 먼저 직교로 보호되지 않은 고리형 펩타이드를 소량의 DMF에 용해시킵니다. DIPEA에 해당하는 두 개를 추가합니다.

및 guanidinylation 전구체의 2 개의 등가물. 그런 다음 용액을 실온에서 2시간 동안 저어줍니다. 반응이 완료되면 용매를 제거합니다.

구아니디닐화된 고리형 펩타이드를 아세틸 니트릴에 재용해하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 반분취 HPLC 정제를 수행합니다. 그 후, 작은 유리 vile에 트리플루오로 아세트산, 물 및 트리 이소 프로필 실란의 준비된 용액을 정제 된 생성물에 첨가하십시오. 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 저어준 다음 ESIMS로 완전한 탈보호제를 관찰합니다.

50ml 원심분리기 튜브에 10ml의 얼음처럼 차가운 에테르를 추가합니다. 파스퇴르 피펫을 사용하여 비보호성 펩타이드를 에테르에 적가합니다. 5, 5 분 동안 000 번 g에서 서스펜션을 원심 분리하십시오.

그런 다음 펠릿을 얼음처럼 차가운 에테르로 씻으십시오. 5, 5 분 동안 000 번 g에 원심 분리기에서. 이 세척과 원심분리를 한 번 더 반복합니다.

그런 다음 제품을 2ml의 HBLC 등급 물에 용해시키고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 반분취 HPLC를 사용하여 제품을 정제합니다. 이 연구에서는 펩티드 글리진에서 구아니딘 그룹을 변형하는 쉬운 방법이 제시됩니다. 반응의 진행은 고압 액체 크로마토그래피를 사용하여 모니터링됩니다.

구아니딘 그룹에 잔류물이 더 큰 경우, 2시간은 반응이 완료되기에 충분한 시간이 아닌 경우가 많습니다. 따라서, 반응이 계속되고 화합물이 반 분취 HPLC에 의해 정제됩니다. 그런 다음 소량을 DMSO로 희석하여 al-ee-so-like 고체상 결합 분석에서 생물학적 평가를 위한 줄기 용액을 얻습니다.

분석 된 모든 화합물은 통합 아형 알파 v 베타 3의 상대적으로 높은 친화도를 보여 주며, 통합 아형 알파 5 베타 1에 대해 높은 선택성을 보인다. 이 방법에 대한 아이디어는 SPPS 중 구아니디닐화에 대한 표준 방법을 찾고 있을 때 처음 떠올랐습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 타겟 펩타이드의 구아니딘 그룹을 변형하거나 기능화하기 위해 맞춤형 구아니디닐화 전구체를 준비하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.