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췌 장 이식 수정된 팔목 기술을 사용 하 여 마우스 모델
췌 장 이식 수정된 팔목 기술을 사용 하 여 마우스 모델
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JoVE Journal Medicine
Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

췌 장 이식 수정된 팔목 기술을 사용 하 여 마우스 모델

Full Text
11,336 Views
13:19 min
December 16, 2017

DOI: 10.3791/54998-v

Benno Cardini*1, Rupert Oberhuber*1, Sven R Hein1, Rebecca Eiter1, Martin Hermann2, Markus Kofler1,3, Stefan Schneeberger1, Gerald Brandacher1,4, Manuel Maglione1

1Center of Operative Medicine, Department of Visceral, Transplant and Thoracic Surgery,Medical University Innsbruck, 2Department of Anesthesiology and Critical Care Medicine,Medical University Innsbruck, 3Department of Cardiac Surgery,Medical University Innsbruck, 4Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Laboratory,Johns Hopkins University School of Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

복 부의 단단한 장기 이식 중 췌 장 이식 가혹한 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 관련 된 이식 손상, 결국 초기 이식 손실에 지도 개발 하는 경향이 있다. 이 프로토콜 murine 췌 장 이식이 초기, 해로운 손해 분석 적합 비 봉합 팔목 기술을 사용 하 여 모델을 설명 합니다.

제 이름은 인스브루크 의과대학 내장, 이식 및 흉부외과의 다니엘 스와로브스키 연구소의 베노 카르디니입니다. 오늘은 변형된 커프 기술을 사용한 췌장 이식을 위한 마우스 모델을 보여드리겠습니다. 케타민과 자일라진의 복강 내 주사로 기증 동물을 마취하고 복부 부위를 면도합니다.

그런 다음 수혜자를 누운 자세로 수술 부위에 놓고 클로르헥시딘으로 수술 부위를 세 번 문지릅니다. 이제 치골에서 치부까지 정중선 개복술을 시행하고 절개 부위를 양쪽으로 확대하여 수술 부위를 더 잘 볼 수 있습니다. 그런 다음 내장을 왼쪽으로 바깥쪽으로 내밀고 하정맥에 헤파린을 주입합니다.

다음 단계에서는 왼쪽 신장 정맥이 교차하는 지점에 근접한 복부 대동맥을 확인하고 대동맥을 약화시킨 다음 그 지점에서 묶습니다. 이제 간골로 이동하여 간 가까이에 있는 총담관을 확인하고 해부한 다음 췌장 가까이에서 결찰합니다. 마지막으로, 결찰 위의 총담관을 절제합니다.

다음으로, 정맥 문합을 위한 충분한 길이를 얻기 위해 간에 가까운 문맥을 절개합니다. 팁으로, 나중에 더 쉽게 식별할 수 있도록 문맥에 작은 간 조각을 남겨 두십시오. 다음으로, 대동맥 주위 조직의 왼쪽 신장 정맥을 약화시키고 결찰합니다.

그런 다음 신장 정맥과 대동맥 주위 조직을 절단하여 결찰의 오른쪽에 머무릅니다. 다음으로, 복부 대동맥을 셀리악 몸통에서 횡격막까지 퉁명스럽게 절개하고, 횡격막에 가까운 대동맥을 약화시키고 그 지점에서 횡단시킵니다. 다음으로, 모든 요추 가지를 확인하고 응고시켜 절제합니다.

이제 이전에 설정된 결찰 아래에서 대동맥을 절제합니다. 이제 문맥에서 폐수가 나오는 것을 볼 때까지 얼음처럼 차가운 관류 용액으로 대동맥 패치를 통해 췌장을 관류합니다. 상단에는 관류된 문맥이 보이고 아래에는 관류된 대동맥이 보입니다.

이제 내장을 복막강으로 교체하고 8-0을 사용하여 장에서 췌장을 단계적으로 분리합니다. 실크 합자. 유문 후 영역에서 시작하여 십이지장을 두 번 훼손하고 8-0으로 당깁니다. 그것을 통해 실크 합자. 그런 다음 그것을 합치고 십이지장에서 췌장을 날카롭게 분리하십시오.

이 접근법은 Treitz의 인대에 도달할 때까지 반복적으로 수행됩니다. 십이지장을 손상시키지 않는 것이 중요한데, 이는 오염 가능성으로 인해 이식편을 실험에서 제외시킬 수 있기 때문입니다. 췌장이 십이지장에서 완전히 분리된 후, 장간막으로 이동하여 훼손하고 결찰한 다음 횡단시킵니다.

이전 단계와 유사하게, 췌장을 횡결장에서 훼손하고, 결찰하고, 최종적으로 횡단하여 췌장을 분리합니다. 이제 동일한 접근법을 사용하여 결찰 후 췌장을 날카롭게 절개하여 담도 영역과 췌장을 분리합니다. 그런 다음 위에서 췌장을 퉁명스럽게 절개합니다.

좌측 위 동맥을 확인하고, 결찰하고, 절제합니다. 마지막에는 비장이 부착된 췌장을 제거하고 추가 이식이 있을 때까지 얼음처럼 차가운 재관류 용액에 넣습니다. 비장을 손잡이로 사용하십시오.

기증자와 유사하게, 케타민과 자일라진의 복강 내 주사로 수혜 동물을 마취하고 자궁 경부 부위를 면도합니다. 그 후, 기증자 동물을 누운 자세로 수술장에 눕히고 클로르헥시딘으로 자궁 경부 부위를 세 번 문지른다. 그런 다음 경정맥 절개 부위에서 오른쪽 하악 각도까지 피부 절개를 수행합니다.

다음으로, 우측 외부 경정맥의 모든 측면 가지를 확인하고, 이를 동원하고, 약화시키고, 양극성 응고 후 분열시킵니다. 그 후, 오른쪽 턱밑샘의 아래쪽 극을 잡고 두개골로 들어 올려 영양 혈관의 양극성 응고 후 해부합니다. 이제 양극성 응고 후 오른쪽 외부 경정맥의 모든 내측 가지를 절제합니다.

외부 경정맥을 가능한 한 두개골로 두 번 결찰하고 결찰로 나눕니다. 외부 경정맥의 근위부 끝을 폴리에틸렌 커프를 통과시킵니다. 여기서 커프의 손잡이가 수술 의사를 향하는 것이 중요합니다.

다음 단계로, 측면에서 오는 미세혈관 정맥 클램프를 놓습니다. 이제 헤파린으로 정맥을 적시고 결속을 제거한 다음 폴리에틸렌 커프 위로 정맥을 부드럽게 당깁니다. 마지막에 커프 위의 정맥을 원형 8-0으로 고정합니다. 뒷면에 1 개의 매듭과 앞쪽에 3 개의 매듭이있는 실크 합자.

오른쪽 총경동맥에 접근하려면 근위부 및 원위 응고 후 오른쪽 흉쇄유돌근을 동원하고 절제합니다. 그런 다음 총경동맥을 부드럽게 움직이고 미주신경과 같은 인접 구조에 해를 끼치지 않도록 주의하십시오. 정맥에 비유하여, 총경동맥을 가능한 한 두개골로 두 번 결찰하고 결찰로 나눕니다.

이제 혈관을 동맥 커프에 통과시킵니다. 마지막으로, 내측에서 오는 미세혈관 클램프로 동맥 커프를 고정합니다. 다음으로, 혈관 확장기를 사용하여 결찰을 제거하고 동맥 내강을 넓힙니다.

내강을 충분히 넓힌 후 동맥을 동맥 커프 위로 당깁니다. 결국, 정맥에 비유하여 8-0으로 동맥을 고정하십시오. 실크 합자. 여기에서 동맥 정맥 문합을 위해 복구된 정맥과 동맥을 볼 수 있습니다.

이식을 위해 경추 부위의 축축한 에이스에 이식편을 놓습니다. 그런 다음 문맥을 8-0으로 당깁니다. 실크 합자 루프, 긴장 없는 문합을 위해 정맥을 짧게 한 다음 정맥 커프 위로 문맥을 당깁니다. 마지막으로 원형 8-0으로 정맥을 고정합니다. 실크 합자.

정맥에 비유하여 대동맥 그루터기를 결속 고리에 통과시키고 대동맥을 짧게 합니다. 그런 다음 대동맥을 동맥 커프 위로 당기고 마지막으로 원형 8-0으로 고정합니다. 실크 합자. 재관류 전에 비장 혈관을 확인하고 결찰하고 마지막으로 날카롭게 절개하고 비장을 제거합니다.

재관류를 위해 먼저 정맥 클램프를 제거한 다음 동맥 클램프를 제거합니다. 이식편을 적절하게 재관류하면 동맥의 가시적인 맥동과 전체 이식편의 분홍빛이 도는 색을 보여줍니다. 이식편을 정상 발열 식염수로 적십니다.

상처를 봉합하기 전에 정맥 커프의 손잡이를 제거하여 혈관이 꼬이지 않도록 하십시오. 마지막에는 6-0 러닝 봉합사로 상처를 봉합하고 0.5ml의 정상항성식염수를 피하로 주입합니다. 모델을 검증하기 위해 이식된 췌장의 내분비 기능을 테스트했습니다.

생쥐는 수술 4일 전에 스트렙토조토신으로 전처리하여 저혈당증을 보였으며 혈당 수치가 300밀리그램 퍼센트 이상일 경우 저혈당증으로 간주되었습니다. 이 라인 샷은 이식되지 않은 살아있는 대조군 마우스의 혈당 수치를 빨간색으로 표시하고, 이식편 수혜자의 혈당 수치를 파란색으로 표시합니다. 또한, 16시간 저온 허혈 시간에 노출된 췌장 이식 수혜자의 혈당 수치는 녹색으로 표시됩니다.

살아있는 쥐는 전체 관찰 기간 동안 저혈당 상태를 유지했습니다. 대조적으로, 장시간의 추위 허혈 시간에 노출되지 않은 췌장 이식편을 이식한 경우 24시간 이내에 정상 혈당이 나타나 이식편의 내분비 기능을 확인했습니다. 16시간 저온 허혈 시간에 노출된 이식편을 이식해도 수혜자의 정상 혈당이 회복되지 않았습니다.

더욱이, 이 그룹에서 모든 마우스는 조기 이식 손상과 관련된 허혈 재관류 손상으로 인해 48시간 이내에 희생되어야 했습니다. 이 비디오에서는 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 췌장을 이식하는 방법을 제시했습니다. 이것은 기술적으로나 미세외과적으로 실현 가능하며 우수한 성공률을 보입니다.

그러나 관 폐색으로 인한 췌장의 췌장의 완연한 섬유화를 감안할 때 이 모델은 초기 허혈 재관류 손상 관련 이식편 손상에 초점을 맞춘 연구 분야에 가장 적합하다고 생각합니다.

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