Name: 기본 및 확실 한 조 혈 창시자 인간 만능 줄기 세포에서의 감독 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: 학습하세요 인간 만능 줄기 세포에서 CD34+ 조혈 전구체로 분화 유도하는 방법을. 단계별 WNT 신호 조절을 통해 기본 및 확실한 조혈 프로그램을 지정하여 재생의학 연구에 활용할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 부의 내과, 혈액 부, 워싱턴 대학의과 대학에 의해 지원 되었습니다. CD는 국가 심 혼, 폐, 혈액 연구소에서 T32HL007088에 의해 지원 되었다. CMS는 혈액학 학술 상을의 미국 사회에 의해 지원 되었다.

<ol><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li>
<li>Murry, C. E., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+embryonic+stem+cells+to+clinically+relevant+populations%3A+lessons+from+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development.</a> Cell. 132 (4), 661-680 (2008).</li>
<li>Ditadi, A., Sturgeon, C. M., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+view+of+human+haematopoietic+development+from+the+Petri+dish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A view of human haematopoietic development from the Petri dish.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (1), 56-67 (2017).</li>
<li>Chen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythroid%2Fmyeloid+progenitors+and+hematopoietic+stem+cells+originate+from+distinct+populations+of+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Erythroid/myeloid progenitors and hematopoietic stem cells originate from distinct populations of endothelial cells.</a> Cell Stem Cell. 9 (6), 541-552 (2011).</li>
<li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+Sources+of+Hematopoietic+Progenitors+Emerge+before+HSCs+and+Provide+Functional+Blood+Cells+in+the+Mammalian+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Distinct Sources of Hematopoietic Progenitors Emerge before HSCs and Provide Functional Blood Cells in the Mammalian Embryo.</a> Cell Rep. 11 (12), 1892-1904 (2015).</li>
<li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+definitive+erythroid+lineage+with+unique+regulation+of+the+beta-globin+locus+in+the+mammalian+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transient definitive erythroid lineage with unique regulation of the beta-globin locus in the mammalian embryo.</a> Blood. 117 (17), 4600-4608 (2011).</li>
<li>Palis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+emergence+of+high+proliferative+potential+hematopoietic+precursors+during+murine+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal emergence of high proliferative potential hematopoietic precursors during murine embryogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (8), 4528-4533 (2001).</li>
<li>Palis, J., Robertson, S., Kennedy, M., Wall, C., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+erythroid+and+myeloid+progenitors+in+the+yolk+sac+and+embryo+proper+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Development of erythroid and myeloid progenitors in the yolk sac and embryo proper of the mouse.</a> Development. 126 (22), 5073-5084 (1999).</li>
<li>Boiers, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphomyeloid+contribution+of+an+immune-restricted+progenitor+emerging+prior+to+definitive+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lymphomyeloid contribution of an immune-restricted progenitor emerging prior to definitive hematopoietic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 535-548 (2013).</li>
<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cells+derive+directly+from+aortic+endothelium+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cells derive directly from aortic endothelium during development.</a> Nature. 464 (7285), 108-111 (2010).</li>
<li>Hadland, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+requirement+for+Notch1+distinguishes+2+phases+of+definitive+hematopoiesis+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A requirement for Notch1 distinguishes 2 phases of definitive hematopoiesis during development.</a> Blood. 104 (10), 3097-3105 (2004).</li>
<li>Kumano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+but+not+Notch2+is+essential+for+generating+hematopoietic+stem+cells+from+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Notch1 but not Notch2 is essential for generating hematopoietic stem cells from endothelial cells.</a> Immunity. 18 (5), 699-711 (2003).</li>
<li>Medvinsky, A., Rybtsov, S., Taoudi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+origin+of+the+adult+hematopoietic+system%3A+advances+and+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Embryonic origin of the adult hematopoietic system: advances and questions.</a> Development. 138 (6), 1017-1031 (2011).</li>
<li>Robert-Moreno, A., Espinosa, L., de la Pompa, J. L., Bigas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RBPjkappa-dependent+Notch+function+regulates+Gata2+and+is+essential+for+the+formation+of+intra-embryonic+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">RBPjkappa-dependent Notch function regulates Gata2 and is essential for the formation of intra-embryonic hematopoietic cells.</a> Development. 132 (5), 1117-1126 (2005).</li>
<li>Chadwick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+BMP-4+promote+hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Cytokines and BMP-4 promote hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells.</a> Blood. 102 (3), 906-915 (2003).</li>
<li>Davis, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+GFP+reporter+gene+to+the+MIXL1+locus+of+human+embryonic+stem+cells+identifies+human+primitive+streak-like+cells+and+enables+isolation+of+primitive+hematopoietic+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Targeting a GFP reporter gene to the MIXL1 locus of human embryonic stem cells identifies human primitive streak-like cells and enables isolation of primitive hematopoietic precursors.</a> Blood. 111 (4), 1876-1884 (2008).</li>
<li>Kaufman, D. S., Hanson, E. T., Lewis, R. L., Auerbach, R., Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+colony-forming+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic colony-forming cells derived from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (19), 10716-10721 (2001).</li>
<li>Kennedy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+lymphocyte+potential+marks+the+emergence+of+definitive+hematopoietic+progenitors+in+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">T lymphocyte potential marks the emergence of definitive hematopoietic progenitors in human pluripotent stem cell differentiation cultures.</a> Cell Rep. 2 (6), 1722-1735 (2012).</li>
<li>Ledran, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+on+stromal+cells+derived+from+hematopoietic+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Efficient hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells on stromal cells derived from hematopoietic niches.</a> Cell Stem Cell. 3 (1), 85-98 (2008).</li>
<li>Ng, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primitive+streak+gene+Mixl1+is+required+for+efficient+haematopoiesis+and+BMP4-induced+ventral+mesoderm+patterning+in+differentiating+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The primitive streak gene Mixl1 is required for efficient haematopoiesis and BMP4-induced ventral mesoderm patterning in differentiating ES cells.</a> Development. 132 (5), 873-884 (2005).</li>
<li>Pick, M., Azzola, L., Mossman, A., Stanley, E. G., Elefanty, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+in+serum-free+medium+reveals+distinct+roles+for+bone+morphogenetic+protein+4%2C+vascular+endothelial+growth+factor%2C+stem+cell+factor%2C+and+fibroblast+growth+factor+2+in+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human embryonic stem cells in serum-free medium reveals distinct roles for bone morphogenetic protein 4, vascular endothelial growth factor, stem cell factor, and fibroblast growth factor 2 in hematopoiesis.</a> Stem Cells. 25 (9), 2206-2214 (2007).</li>
<li>Vodyanik, M. A., Bork, J. A., Thomson, J. A., Slukvin, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+CD34%2B+cells%3A+efficient+production+in+the+coculture+with+OP9+stromal+cells+and+analysis+of+lymphohematopoietic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived CD34+ cells: efficient production in the coculture with OP9 stromal cells and analysis of lymphohematopoietic potential.</a> Blood. 105 (2), 617-626 (2005).</li>
<li>Vodyanik, M. A., Thomson, J. A., Slukvin, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukosialin+%28CD43%29+defines+hematopoietic+progenitors+in+human+embryonic+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukosialin (CD43) defines hematopoietic progenitors in human embryonic stem cell differentiation cultures.</a> Blood. 108 (6), 2095-2105 (2006).</li>
<li>Yu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+enhances+the+generation+of+hematopoietic+progenitors+from+human+embryonic+stem+cell-derived+hemato-vascular+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid enhances the generation of hematopoietic progenitors from human embryonic stem cell-derived hemato-vascular precursors.</a> Blood. 116 (23), 4786-4794 (2010).</li>
<li>Zambidis, E. T., Peault, B., Park, T. S., Bunz, F., Civin, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+progresses+through+sequential+hematoendothelial%2C+primitive%2C+and+definitive+stages+resembling+human+yolk+sac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells progresses through sequential hematoendothelial, primitive, and definitive stages resembling human yolk sac development.</a> Blood. 106 (3), 860-870 (2005).</li>
<li>Sturgeon, C. M., Ditadi, A., Awong, G., Kennedy, M., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+Signaling+Controls+the+Specification+of+Definitive+and+Primitive+Hematopoiesis+From+Human+Pluripotent+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Wnt Signaling Controls the Specification of Definitive and Primitive Hematopoiesis From Human Pluripotent Stem Cells.</a> Nat Biotechnol. 32 (6), 554-561 (2014).</li>
<li>Choi, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+hemogenic+endothelial+progenitor+and+its+direct+precursor+in+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Identification of the hemogenic endothelial progenitor and its direct precursor in human pluripotent stem cell differentiation cultures.</a> Cell Rep. 2 (3), 553-567 (2012).</li>
<li>Ditadi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Definitive+Haemogenic+Endothelium+and+Arterial+Vascular+Endothelium+Represent+Distinct+Lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human Definitive Haemogenic Endothelium and Arterial Vascular Endothelium Represent Distinct Lineages.</a> Nat Cell Biol. 17 (5), 580-591 (2015).</li>
<li>Conner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryo+fibroblast+%28MEF%29+feeder+cell+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse embryo fibroblast (MEF) feeder cell preparation.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter 23, Unit 23.2 (2001).</li>
<li>La Motte-Mohs, R. N., Herer, E., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+T-cell+development+from+human+cord+blood+hematopoietic+stem+cells+by+Delta-like+1+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Induction of T-cell development from human cord blood hematopoietic stem cells by Delta-like 1 in vitro.</a> Blood. 105 (4), 1431-1439 (2005).</li>
<li>Schmitt, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+T+cell+development+and+establishment+of+T+cell+competence+from+embryonic+stem+cells+differentiated+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction of T cell development and establishment of T cell competence from embryonic stem cells differentiated in vitro.</a> Nat Immunol. 5 (4), 410-417 (2004).</li>
<li>Holmes, R., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OP9-DL1+system%3A+generation+of+T-lymphocytes+from+embryonic+or+hematopoietic+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">The OP9-DL1 system: generation of T-lymphocytes from embryonic or hematopoietic stem cells in vitro.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2009 (2), (2009).</li>
<li>Polychronopoulos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+for+the+synthesis+of+indirubins+as+potent+and+selective+inhibitors+of+glycogen+synthase+kinase-3+and+cyclin-dependent+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Structural basis for the synthesis of indirubins as potent and selective inhibitors of glycogen synthase kinase-3 and cyclin-dependent kinases.</a> J Med Chem. 47 (4), 935-946 (2004).</li>
<li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule-mediated+disruption+of+Wnt-dependent+signaling+in+tissue+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer.</a> Nat Chem Biol. 5 (2), 100-107 (2009).</li>
<li>Sugimura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+and+progenitor+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem and progenitor cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature. , (2017).</li>
<li>Ohgushi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathway+and+cell+state+responsible+for+dissociation-induced+apoptosis+in+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Molecular pathway and cell state responsible for dissociation-induced apoptosis in human pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (2), 225-239 (2010).</li>
<li>Peschle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic----Fetal+Hb+switch+in+humans%3A+studies+on+erythroid+bursts+generated+by+embryonic+progenitors+from+yolk+sac+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Embryonic----Fetal Hb switch in humans: studies on erythroid bursts generated by embryonic progenitors from yolk sac and liver.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 81 (8), 2416-2420 (1984).</li>
</ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

이 프로토콜 기본 또는 최종 조 혈 창시자의 분화에 대 한 빠른, 혈 청, 기질-없는 방법을 설명합니다. 기본 또는 최종 조 혈 창시자의 mesodermal 규격은 유일 하 게 정식 WNT 신호 전달의 분자 억제제를 이용 하는 우리의 프로토콜을 사용 하 여 안정적으로 얻을 수 있습니다. 반면 PORCN 억제제 IWP234 에 의해 WNT 억제 지정 원시 조 혈 mesoderm26단계 관련 WNT 활성화 GSK3β 억제제 CHIR9902133 에 의해 확실 한 조 혈 mesoderm 상승을 제공 합니다. 메모의이 방법은 튼튼하게 주지 않는다 상승 engraftable HSC 같은 인구 (표시 되지 않음). 그러나,이 방식으로 생성 하는 확실 한 조 혈 창시자는 그들의 잠재적인 미래에 변환 응용 프로그램을 강조 transgene 유도 engraftment 잠재적인35</su...

인간 만능 줄기 세포 (hPSCs) 인간 배아 줄기 세포 (hESCs) 및 인간 유도 만능 줄기 세포 (hiPSCs), 포괄로 정의 되 고 적절 한 성장 조건 하에서 자기 갱신을 받은 뿐만 아니라의 독특한 능력을가지고 또한, 모든 세포 유형으로 분화 하는 능력 3 개의 세균 층에서 파생 하는 그러나: endoderm, mesoderm, ectoderm1. 이러한 독특한 능력으로 인해 hPSCs 재생 의학, 질병, 모델링과 세포 기반 요법2에 대 한 큰 약속을 잡으십시오. 여러 셀 형식 hPSCs에서 성공적으로 분화 되어 있다, 하는 동안 한 가지 중요 한 문제는 독점적으로 성인 같은 hPSC 파생 된 조 혈 줄기 세포 (HSCs)와 최종 조 혈 창시자의 생체 외에서 사양입니다.
HPSCs에서 인간의 HSCs의 발전에 하나의 가능성이 장벽이 인간 배아3내에서 여러 조 혈 프로그램의 존재입니다. 나온다, "원시 조," 불리는 첫 번째 프로그램 extraembryonic 노 른 자 삭 조직에서 유래 하 고 erythroblast 창시자 (EryP-CFC), macrophages, 및 없으며 일시적 생산 최고의 특징 이다. 특히,이 프로그램은 HSCs, 상승 수 주지도 않습니다 그것을 일으키 다 T와 B 림프 창시자. 그러나, 노 른 자 삭은 뚜렷이 일으키 erythro 골수성 조상 (EMP4,5,6,,78) 같은 제한 된 확실 한 조 혈 창시자 그리고 erythroid 불충분 한 림프 액 multipotent 조상 (LMPP9). 그러나, EMPs도 LMPPs는 완전히 multipotent 또는 HSC 같은 engraftment 성인 받는 사람의 수입니다. 대조적으로, 나중에 개발, 고아 하 게 정의 된 "확실 한" 조 혈 모 프로그램은 HSC를 포함 하 여 모든 성인 조 혈 계보를 야 기한 적절 한 태아의 대동맥-생식-mesonephros 지역에 지정 됩니다. Hemogenic (그가) 내 피3,10,11에서에서 내 피-하-조 혈 전환을 통해 노치 종속 패션에서 발생 하는이 내 배아 확실 한 조 혈 모 세포의 사양 ,12,,1314. 재구성 능력, 외 잠재적인 multilineage 및 이러한 셀의 노치 의존을 사용할 수 있는 EMP (검토 참조3,13 LMPP에서 이러한 확실 한 조 혈 창시자를 구별 ).
에 따라 장치를 마더보드에 hPSCs에서 원시적이 고 확실 한 조 혈 사양 관리를 이해 하는 것입니다 가능성이 확실 한 조 혈 창시자 hPSC 라인의 다양 한 걸쳐의 재현 생산에 중요 한. 최근까지 multipotent 원시적이 고 확실 한 조 혈 창시자 분리 수 hPSC 차별화 프로토콜15,,1617,18, 존재 하지 않았다 19,20,21,22,23,,2425. 먼저 소 태아 혈 청 (FBS) 및 실질 공동 문화를 사용 하 여 많은 접근 원시적이 고 확실 한 조 혈 잠재적인15,16의 혼합물으로 hPSC 차별화의 조 혈 잠재력 설명 17,,1922,,2325. 더 많은 조 혈 혈 청 무료 프로토콜 항구 조 혈 잠재적인18,20,21, hPSCs에서 mesoderm의 사양에 대 한 신호 요구 사항 설명 그러나 24., 이러한 방법은 여전히 두 프로그램 전부의 다른 유형의 혼합물을 상승 했다, 임상 응용 및 이해 발달 메커니즘에 그들의 사용 제한 될 수 있습니다.
우리는 최근 ACTIVIN/NODAL 및 WNT 신호 hPSC 파생 mesoderm18,26에서에서 원시적이 고 확실 한 조 혈 사양에 대 한 단계-특정 신호 요구 사항을 설명 하는 데 이러한 연구에 내장 . 후자 이었다 특히 독특한 무대 관련 WNT 신호 조작의 그것의 사용 중 독점적으로 기본 또는 독점적으로 확실 한 조 혈 창시자26의 사양에 대 한 수 있습니다. Mesoderm 사양 중 정식 WNT 신호 IWP2 PORCN 억제제와 억제 CD43 지정에 결과+ EryP CFC 및 감지 림프 잠재력과 골수성 창시자. 예리한 대조에서는, 정식 WNT 신호 GSK3β 억제 물, CHIR99021와 차별화의 동일한 단계에서의 자극 감지 CD43의 완전 한 부재에 결과+ EryP-CFC, 동시에 선도 하는 동안에 CD34의 사양+CD43− 그. 이 인구 보유 골수성, HBG-erythroid, 및 T-림프 잠재력을 표현. 이후 분석 CD7327,28 와 CD18428, 그리고 조 혈 잠재력의 표현 부족으로 그는 노치 종속28이 확인. 추가, 단일 셀 클론 분석 이러한 확실 한 조 혈 모 계보 multipotent 단일 셀28에서 파생 될 수 있는 시연 했다. 함께 찍은, 이러한 연구 단계 관련 WNT 신호 조작 순수 원시 조 혈 창시자, 또는 multipotent 노치 종속 확실 한 조 혈 창시자 지정할 수 나타냅니다.
여기, 우리는 그 독점적으로 기본 또는 최종 조 혈 창시자, 정식 WNT mesodermal 패턴, 그리고 그들의 다운스트림 조 혈 계보 중 신호 분석 실험의 조작을 통해 수익률 차별화 전략 개요. 이 프로토콜은 hPSCs 재생 의학 응용 프로그램에서 기본 또는 최종 조 혈 창시자의 생산에 관심이 수사에 큰 가치입니다.

<table><tbody><tr><td>Iscove의 변형 Dulbecco's Medium (IMD)</td><td>Corning</td><td>10-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), ES cell rated</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine, 200 mM 용액</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Life 기술</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>0.25% 트립신-EDTA</td><td>생명 기술</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>0.05% 트립신-EDTA</td><td>생명 기술</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>젤라틴, 돼지 피부, A형</td><td>시그마-알드리치</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>알파-MEM</td><td>생명 기술</td><td>12000-022</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>코닝</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>녹아웃 혈청 교체</td><td>Life Technologies</td><td>10828028</td><td>"KOSR"</td></tr><tr><td>비필수 아미노산(NEAA)</td><td>Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>b-메르캅토에탄올, 55mM 용액</td><td>Life Technologies</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Fraction V, 소 혈청 알부민</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1605</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F12</td><td>Corning</td><td>10-080</td><td></td></tr><tr><td>N2 보충제</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>B27 보충제, 비타민 A</td><td>없음 Life Technologies</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Stempro-34 (SP34)</td><td>Life Technologies</td><td>10639011</td><td>"SP34"</td></tr><tr><td>성장 인자 감소 Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>"MAT"</td></tr>L<tr><td>-흡수산</td><td>시그마-알드리치</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>인간 혈청 트랜스페린</td><td>시그마-알드리치</td><td>10652202001</td><td></td></tr><tr><td>모노티오글리세롤(MTG)</td><td>시그마-알드리치</td><td>M6145</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 B</td><td>로슈</td><td>11088831001</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 II</td><td>라이프 테크놀로지</td>스 <td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI</td><td>Calbiochem</td><td>260913</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>생명 기술</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& D 시스템</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BMP4</td><td>R & D 시스템</td><td>314-BP</td><td></td></tr><tr><td>액티브 A</td><td>R & D 시스템</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>R & D 시스템</td><td>293-VE</td><td></td></tr><tr><td>SCF</td><td>R& D 시스템</td><td>255-SC</td><td></td></tr><tr><td>IGF-1</td><td>R& D 시스템</td><td>291-G1</td><td></td></tr><tr><td>IL-3</td><td>R& D 시스템</td><td>203-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>R& D 시스템</td><td>206-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>R& D 시스템</td><td>207-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-11</td><td>R& D 시스템</td><td>218-1L</td><td></td></tr><tr><td>TPO</td><td>R& D 시스템</td><td>288-TP</td><td></td></tr><tr><td>EPO</td><td>Peprotech</td><td>100-64</td><td></td></tr><tr><td>Flt-3 리간드(FLT3-L)</td><td>R& D Systems</td><td>308-FK</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>IWP2</td><td>Tocris</td><td>3533</td><td></td></tr><tr><td>Angiotensin II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9525</td><td></td></tr><tr><td>Losartan Potassium</td><td>Tocris</td><td>3798</td><td></td></tr><tr><td>CD4 PerCP Cy5.5 Clone RPA-T4</td><td>BD Biosciences</td><td>560650</td><td>희석 1:100; T 세포 분석</td></tr><tr><td>CD8 PE 클론 RPA-T8</td><td>BD Biosciences</td><td>561950</td><td>희석 1:10; T 세포 분석</td></tr><tr><td>CD34 APC 클론 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>340441</td><td>희석 1:100; EHT 분석</td></tr><tr><td>CD34 PE-Cy7 클론 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>348801</td><td>희석 1:100; 혈인성 내피</td></tr><tr><td>CD43 FITC 클론 1G10</td><td>BD Biosciences</td><td>555475</td><td>희석 1:10; 혈인성 내피</td></tr><tr><td>CD45 APC-Cy7 클론 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>557833</td><td>희석 1:50; T 세포 분석</td></tr><tr><td>CD45 eFluor450 클론 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>642284</td><td>희석 1:50; EHT 분석</td></tr><tr><td>CD56 APC 클론 B159</td><td>BD Biosciences</td><td>555518</td><td>희석 1:20; T 세포 분석</td></tr><tr><td>CD73 PE 클론 AD2</td><td>BD Biosciences</td><td>550257</td><td>희석 1:50; 혈인성 내피</td></tr><tr><td>CD184 APC 클론 12G5</td><td>BD Biosciences</td><td>555976</td><td>희석 1:50; 혈인성 내피</td></tr><tr><td>4',6-디아미디노-2-페닐린돌 (DAPI)</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td>희석 1:10,000; T 세포 분석</td></tr><tr><td>OP9 DL4 세포</td><td></td><td></td><td>Holmes, R. 및 JC Zuniga-Pflucker. 콜드 스프링 Harb 프로토콜, 2009. 2009(2): p. pdb prot5156</td></tr><tr><td>MethoCult H4034</td><td>Stemcell Technologies</td><td>4034</td><td>"MeC"</td></tr><tr><td>Milli-Q 정수 시스템</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% CO2 인큐베이터</td><td></td><td></td><td>37°C에서 설정</td></tr><tr><td>멀티가스 인큐베이터</td><td></td><td></td><td>37°C에서 설정, 5% CO2, 5% O2</td></tr><tr><td>6웰 조직 배양 플레이트</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>24웰 조직 배양 플레이트</td><td>Corning</td><td>353226</td><td></td></tr><tr><td>6웰 저접착 조직 배양 플레이트</td><td>Corning</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>24웰 저접착 조직 배양 플레이트</td><td>Corning</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>35mm 조직 배양 접시</td><td>Corning</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>블런트 엔드 니들, 16 게이지</td><td>Corning</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>3cc 주사기</td><td>Corning</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 폴리프로필렌 시험관</td><td>Corning</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 폴리스티렌 시험관</td><td>Corning</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 폴리프로필렌 원뿔</td>형 <td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 폴리프로필렌 원뿔</td>형 <td>Corning</td><td>430921</td><td></td></tr><tr><td>2 mL 혈청학적 피펫</td><td>Corning</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 혈청학적 피펫</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 혈청학적 피펫</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 혈청학적 피펫</td><td>Corning</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>세포 스크레이퍼</td><td>Corning</td><td>353085</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL cryovial</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 시험관(40 &micro 포함); M 세포 여과기</td><td>Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; M 세포 여과기</td><td>Corning</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 원심 분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biosafety hood</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS AriaII 또는 동급</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRii 또는 동급</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 소프트웨어</td><td>TreeStar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수조</td><td></td><td></td><td>37°C</td></tr><tr><td>로 설정0.22 & 마이크로; M 여과 시스템</td><td>코닝</td><td></td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 C 냉장고</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>- 20 C 냉장고</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>- 80 C 냉장고</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

기본 및 확실 한 조 혈 창시자 인간 만능 줄기 세포에서의 감독

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

재생 의학에 대 한 주요 목표 중 하나입니다 생성 및 인간 만능 줄기 세포 (hPSCs)에서 파생 된 조 혈 줄기 세포 (HSCs)의 유지 보수. 최근까지, HSCs로 hPSCs를 차별화 하는 노력 있다 주로 HSC 잠재력, 부족 하 고 대신 노 른 자 삭 조를 닮은 창시자 조 혈을 생성 하 게 됩니다. 이 결과 조 혈 창시자 다양 한 성인 조 혈 장애, 림프 성 계보의 특히 그의 질병 모델링 생체 외에서 유틸리티를 제한 수 있습니다. 그러나, 우리는 최근 우리 여기 개요 무대 관련 감독된 분화 프로토콜을 사용 하는 hPSCs에서 erythro-myelo-림프 multilineage 확실 한 조 혈 창시자를 생성 하는 방법을 설명 했습니다. 매트릭스-코팅 plasticware 지하실 멤브레인에 hPSCs의 효소 분리 통해 embryoid 몸 (EBs)이 형성 된다. EBs는 재조합 BMP4, 이후 GSK3β 억제 물, CHIR99021 확실 한 조 혈 모 프로그램에 지정 된 의해 mesoderm로 구분 됩니다. 또는, 기본 조 PORCN 억제 물, IWP2에 의해 지정 됩니다. 더 조는 재조합 VEGF의 추가 지원 조 혈 cytokines를 통해 구동 됩니다. 이 메서드를 사용 하 여 생성 결과 조 혈 창시자 질병 및 발달 모델링, 생체 외에서사용 될 가능성이 있다.

HPSCs에서 원시적이 고 확실 한 조 혈 창시자의 유도 묘사한 회로도 그림 1에서 그림입니다. Mesoderm 정식 WNT 차별화, 조 혈 原 사양에 따라 2-3 일 동안 발생 하는 신호에 의해 패턴.
대표적인 흐름 cytometric 분석 및 스 분석 실험 조 혈 차별화 hPSC 파생 된 문화를 형성 하는 식민지는 그림 2에 표시 됩니다. IWP2 대우 차별화 문화 고유 CD34 보장할+CD43− 와 CD34낮은 /−CD43+ 인구, 그러나 CHIR 처리 차별화 문화 해야한다 &#60; 1 %CD43+ 세포의 8 일 분화 (<strong ...

여기, 우리는 인간의 만능 줄기 세포 (hPSC) 문화 프로토콜, hPSCs CD34로 차별화 하는 데 사용 현재+ 조 혈 창시자. 이 방법은 단계 특정 조작 정식 WNT 신호 독점적으로 프로그램 중 하나는 확실 한 또는 원시 조 혈 세포를 지정 하려면 사용 합니다.

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

이 방법의 전반적인 목표는 단계별 신호 조작 접근 방식을 사용하여 인간 만능 줄기세포의 분화를 원시 또는 확정적 조혈 프로그램으로 유도하는 것입니다. 이 방법은 인간 확정적 조혈 작용의 신호 및 전사 조절자를 이해하는 것과 같이 해당 분야의 많은 핵심 질문들을 해결할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 단계별 조작을 즉각적으로 사용할 수 있다는 점입니다.이 절차는 저희 연구실의 박사후 연구원인 Carissa Dege가 시연하겠습니다. 프로토콜을 시작하려면, 5% CO2 농도의 37°C 배양기에서 마우스 배아 섬유아세포(MEFs) 상에 70%에서 80% 밀도로 성장시킨, 미리 준비된 인간 다능성 줄기세포 라인(HPSCs)을 준비합니다. HPSC 배지를 흡입하여 제거하고, 각 웰에 37°C의 0.25% Trypsin EDTA 1 mL를 넣고 1분 동안 둡니다.1분 후, Trypsin을 흡입하여 제거하고 각 웰에 1 mL의 스톡 배지를 첨가합니다. 세포 스크레이퍼를 사용하여 플레이트에서 세포를 긁어냅니다. 그런 다음, 각 웰에 1 mL의 세척 버퍼를 첨가합니다.2 mL 세롤로지컬 피펫을 사용하여, 세포를 3~5회 파이펫팅하여 커다란 세포 덩어리를 풀어줍니다. 그 후 세포를 50 mL 원심분리관으로 옮깁니다. HPSCs를 330 x G에서 5분 동안 원심분리합니다.원심분리 후, HPSC 배지를 첨가하고 세포를 재현탁합니다. 다음으로, 재현탁된 HPSCs 2 mL를 MAT 코딩된 플라스틱웨어의 각 웰에 분주하고 세포를 하룻밤 동안 배양합니다. 24시간 후, 배지를 흡입하여 제거하고 37 °C의 0.05% Trypsin EDTA로 1분 동안 교체합니다.Trypsin EDTA를 흡입하여 제거합니다. 스톡 배지 1 mL를 가하고 셀 스크레이퍼로 세포를 강하게 긁어냅니다. 그런 다음 세척 배지 1 mL를 추가합니다.2mL 세롤로지컬 피펫을 사용하여 세포를 3회나 파이펫팅(triturate)하고, 이를 50mL 원심분리관(conical tube)으로 옮깁니다. 세포를 220 x G에서 5분 동안 원심분리합니다. 그 후 배지를 흡입하여 제거하고, 세척 배지 20mL를 추가한 다음 5mL 세롤로지컬 피펫을 사용하여 세포를 부드럽게 재현탁합니다.원심분리와 흡입 후, 배아체(Embryoid Bodies, EBs)를 Day Zero 배지에 조심스럽게 재부유시킵니다. 10 mL 세롤로지 피펫을 사용하여 EBs가 포함된 분화 배지 2 mL

directed-differentiation-primitive-definitive-hematopoietic

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

유도된 pluripotent 줄기 (IPS) 세포로부터 T lymphocytes의 생성은 T 세포 기반 immunotherapy에 대한 배아 줄기 세포를 사용하는 대체 방식을 제공합니다. 방법 중 하나를 이용하여...

T Lymphocytes쪽으로 유도 Pluripotent 줄기 세포의 분화 감독

우리는 발달 생물학의 지식과 발표된 연구를 바탕으로 인간 배아 줄기 세포와 인간 유도 만능 줄기 세포 모두에서 A9 중뇌 도파민 뉴런을 효율적으로 생성할 수 있는 최적화된 프로토콜을 개발했으며, 이는 파킨슨병에 대한 질병 모델링 및 세포 대체 요법에 유용할 것입니다.

인간의 다 능성 줄기 세포에서 도파민 신경 세포의 분화를 감독

이 프로토콜은 전사 인자의 강제 발현을 통해 인간 만능 줄기 세포에서 혈구 내피 및 다중전위 조혈 전구 세포의 효율적인 유도를 설명합니다.

인간 만능 줄기 세포에서 전사 인자의 과발현에 의해 직접 Hemogenic 내피 세포의 유도 및 혈액

여기에 설명된 프로토콜은 최소 전사 인자 세트의 과발현을 통해 마우스 배아 섬유아세포에서 혈액 프로그램의 유도를 자세히 설명합니다. 이 기술은 조혈, 혈액 질환 및 조혈 줄기 세포 이식에 대한 향후 연구를 위한 플랫폼을 제공하기 위해 인간 시스템으로 변환될 수 있습니다.

전사 인자와 마우스 배아 섬유 아 세포를 재 프로그램하는 것은 Hemogenic 프로그램을 유도하는

여기서, 우리는 피더-및 제노프리 조건에서 인간 다능성 줄기 세포로부터 혈생 내피를 정밀하게 형성하는 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 치료 화합물에 대한 질병 모델링 및 스크리닝에 광범위한 응용 프로그램을 가질 것이다.

피더 및 제노 프리 정의 상태에서 인간 다능성 줄기 세포에서 혈생 내피 분화

여기서, 우리는 4개의 골수성 혈통에 제대혈 유래 CD34+ 조혈 줄기 및 전구 세포의 면역표현특성 및 사이토카인 유도분화를 위한 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜의 적용은 CD34+ 세포의 골수성 분화에 대한 골수성 질환 돌연변이 또는 소분자의 영향에 대한 조사를 포함한다.

인간 코드 혈액 유래 CD34+ 조혈 줄기 및 전구 세포의 범골수성 분화

이 프로토콜은 조혈 줄기 및 전구 세포를 생성하는 전사 인자 GATA2, GFI1B 및 FOS의 발현을 강제함으로써 인간 진피 섬유아세포에서 혈생 프로그램의 유도를 입증한다.

전사 요인의 강제 표현에 의한 인간 섬유아세포의 혈생 재프로그래밍

이 문서의 목표는 만능 줄기 세포로부터 인간 간 선구분화를 유도하는 표준화된 접근법을 제공하는 것입니다. 즉시 사용 가능한 미디어 제형이 있는 이 절차의 개발은 사용자에게 생체 의학 연구 및 번역을 위한 인간 간 세포를 생성하는 촉진 시스템을 제공합니다.

정의된 분화 시스템을 사용하여 만능 줄기 세포에서 간 선조 사양

여기에 제시된 것은 약 1 주일 내에 인간 다 능성 줄기 세포로부터 혈구 내피 세포의 유도 분화를위한 간단한 프로토콜이다.

인간 만능 줄기 세포로부터 혈구 내피 세포의 유도 분화

이 프로토콜은 유도만능줄기세포(iPSC)에서 인간 파골세포의 분화를 제시하고 파골세포 및 파골세포 전구체의 특성 분석 방법을 설명합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포에서 파골세포의 분화 및 특성화

학습하세요 인간 만능 줄기 세포에서 CD34+ 조혈 전구체로 분화 유도하는 방법을. 단계별 WNT 신호 조절을 통해 기본 및 확실한 조혈 프로그램을 지정하여 재생의학 연구에 활용할 수 있습니다.

기본 및 확실 한 조 혈 창시자 인간 만능 줄기 세포에서의 감독

더 많은 동영상 탐색